1、目的： 探討RA和TSA抑制DTC細胞增殖和誘導DTC細胞分化的機理；探討聯(lián)合用藥增強誘導DTC細胞分化作用的可行性；評價RA誘導DTC患者病灶分化的能力，最終目的是提高DTC病灶對<'131>Ⅰ的攝取能力，達到用<'131>Ⅰ治療的目的。 方法： 1．將不同濃度的RA和TSA加入K1，F(xiàn)TC-133細胞株，孵育12，24，48h后，MTT法觀察細胞生存率，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。 2．按照常規(guī)方法提取K

2、1和FTC-133細胞中RNA，RT-PCR技術測定基因mRNA表達。 3．采用電化學發(fā)光法(ECLLA)，檢測K1和FTC-133培養(yǎng)液中TG 表達；用對硝基苯磷酸鹽法檢測K1和FTC-133細胞內(nèi)的ALP活性。 4．分別利用：Immunofluorescence(IF)和Western blot技術對 NIS,Pendrin蛋白進行定位和定性表達檢測。 5．放射性測量法評價RA和TSA誘導后的K1和FTC

3、-133對Na<'125>Ⅰ攝取。 6．采用自身前后對照研究，通過服用RA前后DTC患者<'131>I一診斷劑量顯像(dWBS)和血清TG水平的測定，評價RA對DTC病灶分化的誘導能力。通過服用RA后DTC患者<'131>I一治療劑量顯像(tWBS)和治療后TG的水平，評價RA誘導DTC病灶分化后<'131>I的治療效果。 結果： 1．RA和TSA對K1和FTC-133細胞增殖的抑制作用具有濃度和時間依賴性，隨藥

4、物濃度增加和作用時間延長，細胞有向正常細胞形態(tài)轉化的趨勢，可見有凋亡現(xiàn)象。聯(lián)合用藥抑制DTC細胞增殖，誘導分化的作用更強，且可以降低藥物對細胞的毒性。 2．Kl和FTC-133中NIS和5’DI的mRNA表達隨著RA和TSA濃度增加，表達逐漸增強，呈依賴性關系，其中RA的作用強于TSA：PDS hAITmRNA表達隨著RA和TSA濃度增加，表達逐漸減弱，呈負依賴性關系；RA和TSA對TPO mRNA表達的作用較弱。聯(lián)合用藥可

5、以增強NIS、PDS，hAIT mRNA的表達，也可以增加5’DI、TPOmRNA表達。 3．RA和TSA誘導K1和FTC-133分泌TG、ALP，呈濃度和時間依賴性，隨藥物濃度增加和孵育時間的延長，TG、ALP分泌增多；RA和低濃度TSA聯(lián)合應用時，增強效果最明顯。 4．分別用RA和TSA誘導后的DTC細胞，NIS和Pendrin蛋白表達明顯。聯(lián)合RA和TSA有增強NIS、Pendrin蛋白表達的作用。 5．R

6、A和TSA能提高Kl和FTC-133攝取碘的能力，其攝碘率和藥物濃度和孵育時間呈依賴性關系。聯(lián)合用藥，具有增強DTC細胞攝碘能力的作用。 6．完成RA治療的9例DTC患者，5／9例(55.56％)DTC病灶dWBS時，攝取<'131>I增多，伴TG水平升高；用<'131>I治療的DTC患者5／8例(63％)DTC病灶攝碘明顯增多，治療3—6月后TG水平降低。 結論： RA和TSA均能抑制K1和FTC-133的增殖

7、、誘導細胞分化，促進細胞凋亡。聯(lián)合應用RA和TSA，能抑制K1和FTC-133增殖，誘導腫瘤細胞分化的作用更強，降低藥物毒性；RA和TSA能調(diào)控甲狀腺癌細胞中MS，5'DI，PDS，hAIT，TPOmRNA的表達，聯(lián)合應用通過受體介導調(diào)控和通過組蛋白乙?；{(diào)控的兩種調(diào)節(jié)機制，增強上調(diào)功能基因表達的能力；增加甲癌細胞TG和ALP的分泌，誘導NIS和PDS在細胞漿和細胞膜的表達、增加其攝碘能力。臨床研究表明，RA能提高DTC病灶攝取<'13