1、轉基因食品的安全性及對生態(tài)環(huán)境的影響等問題一直是關注的焦點。目前商業(yè)化的轉基因大豆主要為抗草甘膦大豆，抗逆基因的轉基因大豆因地理環(huán)境及全球商業(yè)化的需求的增多，商業(yè)化的呼聲也越來越高，但迄今為止我國尚未建立抗逆轉基因大豆的檢測技術。
　　 本實驗以已進入環(huán)境釋放或生產(chǎn)性試驗、或獲得安全證書的轉基因植物環(huán)境安全評價階段的耐低溫抗逆轉基因大豆新品系轉基因大豆OsDREB3為研究對象，利用染色體步移技術，獲得了轉基因大豆OsDREB35

2、’端和3’端旁側序列信息。通過生物信息學分析方法明確了5’端旁側序列344bp覆蓋了轉化載體及轉基因大豆基因組，在大豆基因組為1號染色體，位置為49，828，108～49，836，357；3’端旁側序列共長2189bp，屬未知基因序列。
　　 本實驗根據(jù)已得到的5’端旁側序列信息，建立了轉基因大豆OsDREB3品系特異性定性和定量檢測方法。品系特異性檢測定性和定量引物所擴增片段覆蓋了大豆基因組及轉化載體序列信息，在檢測過程中隨機

3、選擇了4種轉基因大豆，2種轉基因玉米，2種轉基因水稻同時進行品系特異性定性及定量檢測，結果顯示除轉基因大豆OsDREB3有擴增片段或擴增曲線外，其余轉基因作物均沒有擴增片段或擴增曲線，表明該定性及定量檢測方法符合品系特異性檢測要求。定性檢測擴增片段大小為160bp。檢測靈敏度為0.1％，比歐盟檢測下限(0.9％)低，且重現(xiàn)性好，可用于轉基因大豆OsDREB3定性檢測。所設計的熒光定量：PCR引物，擴增曲線檢測下限可達0.01％。

4、　　 建立了轉基因大豆多重PCR檢測方法和轉基因大豆OsDREB3巢式PCR檢測方法。本實驗選擇了轉基因大豆GTS40-3-2、轉基因大豆A2704-12及轉基因大豆OsDREB3DNA作為待檢測基因模板，對多重PCR體系中的成分進行了多次調(diào)整，嘗試了多種不同引物對的配比，擴增片段大小相差100多個堿基，范圍從700bp～200bp之間，可視性好。最終確定了最佳檢測方案，成功實現(xiàn)了3種轉基因大豆、4組不同片段的同時擴增和檢測，檢測下限

5、可達0.01％。巢式PCR所用引物在滿足品系特異定性檢測的同時，也要提高其檢測的靈敏度，本實驗所建立巢式PCR檢測方法，檢測靈敏度可達0.005％。
　　 本實驗在原有構建有4種轉基因大豆品系特異性序列的標準分子的基因上又構建了轉基因大豆OsDREB3品系特異性序列，新構建的含有5種轉基因大豆品系特異性序列及大豆內(nèi)參基因lectin的陽性對照標準分子，本實驗通過實時熒光定量PCR方法，以大豆凝集素基因(lectin)作為內(nèi)源參照

6、基因，確定了外源基因OsDREB3在轉基因大豆OsDREB3基因組為單拷貝作物。
　　 本實驗希望通過染色體步移技術得到的OsDREB3外源基因旁翼序列，建立起來的轉基因大豆OsDREB3一整套靈敏高、重現(xiàn)性好、可信度高、特異性強的品系特異性檢測體系，充分提高了轉基因大豆檢測工作效率，從而完善了現(xiàn)有轉基因大豆標準分子在OsDREB3抗旱基因檢測方面的不足，為我國建立轉基因大豆OsDREB3標識管理制度提供參考。該方法為建立轉基因