1、西南大學碩士學位論文蠟梅（Chimonanthus praecox（L.）Link）幾丁質酶基因Cpchia的克隆及原核表達產物特性分析姓名：謝樹章申請學位級別：碩士專業(yè)：花卉學指導教師：李名揚20090501西南大學碩士學位論文1 1 - - L , I ． J , 量曼曼曼曼! 寡曼曼曼皇曼曼皇曼曼皇曼曼曼曼曼蔓曼曼曼曼曼皇! 曼的信號肽序列。C p c h i a 蛋白二級結構主要由C t 螺旋( h e l i x ，6 5 ．

2、2 9 ％) 、少量的延伸鏈( e x t e n ds t r a n d ，5 ．3 6 ％) 和隨機結構( 1 0 0 p s ／o t h e r ，2 9 ．3 3 ％) 組成。同時該編碼蛋白含有多個磷酸化位點，推測翻譯后蛋白可能進行多樣化修飾，這與幾丁質酶多抗性特性相關。3 ．C p c h i a 基因原核表達載體的構建與原核表達體系的優(yōu)化通過切除信號肽序列并將蠟梅幾丁質酶基因構建到原核表達載體p E T - 2 8 a

3、( + ) 中，轉化宿主大腸桿菌B L 2 1 誘導表達，獲得了重組蛋白。從誘導溫度、I P T G 終濃度和誘導表達時間三個方面優(yōu)化重組蛋白的表達體系，經S D S - P A G E 電泳確認該重組蛋白以包涵體的形式存在。在本實驗中，通過降低誘導溫度可降低目的蛋白的表達量，但同時并不會促使產生可溶性目的蛋白。4 ．原核表達產物的純化復性及特性分析分離純化采用溶菌酶破碎細菌的細胞膜，再結合超聲破碎方法，可顯著提高了包涵體的純度和回收率