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簡介：上海交通大學博士學位論文基因輸送中聚陽離子非病毒載體的表征和優(yōu)化姓名郭妍申請學位級別博士專業(yè)生物醫(yī)學工程指導教師徐宇虹200501012連接了親水性聚合物PEG和靶向分子的復雜聚陽離子體系在體內(nèi)試驗中確實能夠提高DNA復合物的穩(wěn)定性和靶向性但是體內(nèi)的研究結(jié)果一直不穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效率還是不能得到保證我們認為這個關(guān)鍵問題的解決不是僅僅改變體內(nèi)的輸送條件和使用新的聚陽離子非病毒載體能夠解決根本的問題還是在體外的載體控制上復雜聚陽離子非病毒載體系統(tǒng)的組成表面性質(zhì)功能分子的裝配狀態(tài)等決定了聚陽離子非病毒載體在體內(nèi)的輸送和轉(zhuǎn)染情況但是對于這樣復雜的系統(tǒng)一直缺乏體外的系統(tǒng)表征手段來控制和確證這個載體系統(tǒng)的組成一些問題難以找到根本的原因本論文旨在于建立復雜聚陽離子非病毒載體系統(tǒng)的表征手段不僅為目前的載體系統(tǒng)提供質(zhì)量控制的手段以后使用的新聚陽離子載體也會遇到這樣的問題也能夠從本論文的研究方法得到借鑒聚陽離子非病毒載體系統(tǒng)本身的特殊性再加上親水性聚合物和靶向分子的連接使得這個非病毒載體系統(tǒng)非常復雜使得對這個復雜系統(tǒng)的表征非常困難聚陽離子非病毒載體系統(tǒng)的表征包括聚陽離子本身的表征連接了功能性分子后聚陽離子的表征功能性分子本身的表征復雜聚陽離子與DNA形成DNA復合物后的表征以及功能性分子裝配之后的表征等我們建立了以聚賴氨酸為骨架的聚陽離子非病毒載體在聚陽離子骨架上連接親水性聚合物PEG和靶向蛋白EGF形成靶向型的聚陽離子非病毒載體系統(tǒng)對這個系統(tǒng)進行優(yōu)化和表征工作本論文包括以下幾個方面一我們首先對聚陽離子載體系統(tǒng)的骨架進行表征骨架包括簡單的聚陽離子聚賴氨酸PLL還包括連接了親水性聚合物聚乙二醇的復雜骨架PEGGPLL我們采用應用最廣泛的聚陽離子非病毒載體之一聚賴氨酸PLL為DNA包裝的主體將兩種不同分子量的親水性聚合物聚乙二醇PEG通過化學合成的方法連接在PLL的骨架上形成PEG修飾的聚陽離子載體PEGGPLL聚賴氨酸和聚乙二醇都是聚合物具有一定的分子量分布聚乙二醇在聚賴氨酸上的連接位置和連接個數(shù)都難以確定產(chǎn)物成分復雜給產(chǎn)物的質(zhì)量分析帶來極大的困難陽離子脂質(zhì)體非病毒載體的分析和質(zhì)量標準建立可以參考脂質(zhì)體藥物的分析手段但是聚陽離子非病毒載體的分析沒有太多可以借鑒的急需探討開發(fā)

簡介：蘇州大學碩士學位論文視覺誘發(fā)電位和腦認知事件相關(guān)電位與視敏度相關(guān)性的初步研究姓名楊麗申請學位級別碩士專業(yè)法醫(yī)學指導教師陳奚萍20080501CORRELATIONOFVISUALEVOKEDPOTENTIALANDCOGNITIVEEVENTRELATEDPOTENTIALWITHVISUALSENSITIVITYCORRELATIONOFVISUALEVOKEDPOTENTIALANDCOGNITIVEEVENTRELATEDPOTENTIALWITHVISUALSENSITIVITYABSTRACTPURPOSEBYCOMBININGPAREMREVERSALVISUALEVOKEDPOTENTIALPRVEPANDCOGNITIVEEVENTRELATEDPOTENTIALCERAINNORMALCONTROLSANDSUBJECTSWITHDIFFERENTDEGREESOFVISUALDISORDERS，WEAIMEDTOINVESTIGATETHEIRCHARACTERISTICSANDCORRELATIONS晰THVISUALACUITYANDTRIEDTOMAKEITASALLOBJECTIVEELECTROPHYSIOLOGICALINDEXFOREVALUATINGVISUALFUNCTIONALSTATUSMETHODNINETYEYESWEREAPPHEDINTHISSTUDY，ANDTHREEGROUPS01，05AND10WEREDIVIDEDACCORDINGTOTHEVISIONCHECKEDINSTANDARDLOGARITHMICVISUALACUITYCHARTSLDII1THEPRVEPWEREINDUCEDBYSERIESOFCHEEKSIZE80，40，20，10，30’，15’，75’INWHITEBLACKCHESSBOARDREVERSALMODE晰THAVISUALANGLEOFEIGHTDEGREES，ACONTRASTLEVELOF100％，ANDATEMPORALFREQUENCYOF2HZ2CERPSWEREINDUCEDINAVISUALTHREESTIMULUSODDBALLTASK，INVOLVINGTHEPSEUDORANDOMPRESENTATIONOFVISUALSTREAMALTOGETHER200PRESENTATIONSWITHNONTARGETSFOR75‰RARETARGETSTIMULUSFOR15％ANDPROBESTIMULUSFOR10％THREEBLOCKSOFVISUALSTIMULUSCORRELATEDWITHVISUALANGLEOF50’，10’AND5’WEREPRESENTEDINTURNAMPLITUDEANDLATENCYOFN1，P1COMPONENTSATOZINPRVEPANDTHATOFP3AP3BCOMPONENTSATMIDLINEELECTRODESINERPWEREMEASUREDFORANALYSISRESULTSINPRVEPTESTINGTHERESULTSSHOWED1THEPRVEPLOCATESATOCCIPITALREGION，WITHPEAKAMPLITUDEATOZ。2N1，P1LATENCYANDAMPLITUDEALLDISPLAYCURVILINEARRELATIONSHIPWITHVISUALANGLEOFVISUALSTIMULUS，AND30’ISTHEOPTIMALSTIMULUSP090ALONGWITHTHEINCREMENTSOFTHEⅡ

簡介：點擊查看更多記憶的谷歌效應-認知與神經(jīng)機制.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本次研究既將PUCYSARS質(zhì)粒中含有的SARS病毒S蛋白基因的部分序列，分別在大腸桿菌BL21和家蠶細胞以及家蠶幼蟲體內(nèi)進行表達。在大腸桿菌表達系統(tǒng)中首先將S蛋白基因克隆到大腸桿菌表達載體PET28A構(gòu)建獲重組大腸桿菌載體PET28AS，將PET28AS在大腸桿菌BL21中利用IPTG進行誘導表達。在桿狀病毒表達系統(tǒng)中將S蛋白基因克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體PBACPAKHIS中，構(gòu)建重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體PBACPAKS，重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體PBACPAKS與線性化桿狀病毒BMBACPAK6共轉(zhuǎn)染BMN細胞，經(jīng)篩選獲得重組桿狀病毒BMBACS，并將其在細胞和家蠶中進行表達。表達產(chǎn)物經(jīng)SDSPAGE、WESTERNBLOTTING分析表明，大腸桿菌和家蠶中的表達產(chǎn)物的分子量分別為27KDA和30KDA左右，重組病毒感染后的第5天達到最高表達水平，約占血淋巴總蛋白的12％。另外利用金屬螯合親和層析純化方法對BMN細胞中的表達產(chǎn)物進行純化，得到相對較純的重組蛋白。

簡介：點擊查看更多重組腺相關(guān)病毒載體介導的人類組織型激肽釋放酶基因?qū)Ω哐獕旱闹委熥饔?pdf精彩內(nèi)容。

簡介：中因傷和罾科大學中國蔚學甜學豫博士研究生學位論文中國協(xié)和醫(yī)科大學研究生院中國枷和醫(yī)科人學博F．學位論立攜帶TIMP3基因的重組腺病毒對宮頸癌治療的體內(nèi)外實驗研究中文摘要細胞對細胞外基質(zhì)成分EXTRACELLULARMATRIX，ECM的降解是腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中最重要的分子事件，基質(zhì)金屬蛋白酶MATRIXMETALLOPROTEINASESMMPS是一類最重要的執(zhí)行ECM降解的水解酶，多種腫瘤組織中都伴有MMPS的高表達。基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子TISSUEINHIBITORSOFMETALLOPROTEINASETIMPS是一類能特異性抑制MMPS功能的活性因子，對抑制腫瘤浸澗和轉(zhuǎn)移有重要功能。TIMP3是TLMPS家族的新成員，由于它誘導腫瘤細胞調(diào)亡和抑制血管形成的作用，使其在腫瘤治療中越來越受到重視。我們用RTPCR和WESTERNBLOTTING檢測不同宮頸癌細胞中TIMP一3的表達情況，顯示在侵襲能力最強的CASKI細胞中TIMP．3的表達量最低，提示TIMP．3的水平與細胞浸潤能力的強弱呈負相關(guān)性，為我們選擇用TIMP．3治療宮頸癌提供了根據(jù)。對宮頸癌等常見的婦科惡性腫瘤細胞用攜帶綠色熒光蛋白的重組腺病毒ADGFP感染譜的測定的結(jié)果表明宮頸癌，尤其是HPV陽性的宮頸癌細胞對腺病毒有高度易感性，以腺病毒為載體的基因治療對富頸癌有獨特的優(yōu)越性。利用新一代的腺病毒ADEASYTM系統(tǒng)，采用兩步感受念法，我們成功組建了攜帶TIMP3基因的重組腺病毒載體ADTIMP．3。多種細胞凋亡檢測方法顯示ADTIMP3轉(zhuǎn)染可以強烈地誘導宮頸癌細胞的凋亡，并存在顯著的旁觀者效應；流式細胞分析表明TIMP一3可引起CASKI細胞的G2／M期阻滯；MTT測定ADTIMP一3對細胞的殺傷效應強于AD．P53；ADTIMP一3和順鉑或放療聯(lián)合使用可使療效明顯增強，起到效應相加或協(xié)同作用。對裸鼠宮頸癌皮下移植瘤用ADTIMP一3單獨瘤體內(nèi)注射或與順鉑腹腔內(nèi)注射聯(lián)合使用均可明顯抑制腫瘤生長。體內(nèi)外實驗結(jié)果均證明了AD．TIMP．3可有效地治療宮頸癌。關(guān)鍵詞基因治療TIMP一3腺病毒宮頸癌2

簡介：點擊查看更多逆轉(zhuǎn)錄病毒PLXSN-hBDNF轉(zhuǎn)染脊髓神經(jīng)干細胞及其誘導分化研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：上海交通大學博士學位論文攜帶41BB單鏈抗體基因的重組腺病毒介導的腫瘤基因治療研究姓名劉芳申請學位級別博士專業(yè)藥理學指導教師陳紅專葉迅20080501上海交通大學醫(yī)學院博士研究生畢業(yè)論文2008中文摘要16和TC1細胞，并在細胞膜表面表達ANIT41BBSCFV。在體外實驗中AD41BBSCFV能刺激小鼠脾細胞增殖，說明其具有生物活性。而MTS實驗表明AD41BBSCFV在高感染系數(shù)和長時間作用下對人和小鼠的腫瘤細胞A549、PLC／PRF／5、HEPA16和TC1活力沒有明顯影響，說明AD41BBSCFV對腫瘤細胞沒有直接殺傷作用。在動物實驗中瘤內(nèi)注射AD41BBSCFV，與對照病毒比較能延緩荷HEPA16和TC1腫瘤小鼠腫瘤生長，其作用與增加分泌IFN丫的T細胞數(shù)量和誘導淋巴細胞在腫瘤局部浸潤，改善腫瘤周圍免疫微環(huán)境，提高抗腫瘤免疫有關(guān)。而聯(lián)合應用AD41BBSCFV和CTX，較AD41BBSCFV和CTX分別單獨應用能明顯延長小鼠生存期，抑制腫瘤生長，甚至完全消退腫瘤，這是CTX抑制TREG細胞，增強了41BBSCFV抗腫瘤免疫作用。本研究為新型腫瘤免疫基因治療提供了理論和實驗依據(jù)。關(guān)鍵詞腺病毒，41BB，環(huán)磷酰胺，基因治療，共刺激分子，腫瘤免疫

簡介：背景肝細胞生長因子HGF是促進血管生成的主要細胞因子之一。腺病毒或質(zhì)粒介導的心肌細胞高表達HGF基因能夠促進側(cè)枝循環(huán)形成和改善心肌缺血狀況。本研究將建立小型豬慢性缺血的動物模型，并評價腺病毒介導HGF基因轉(zhuǎn)移對慢性缺血心肌心臟功能改善的作用和對心肌側(cè)支血管形成的影響，為進一步臨床應用提供依據(jù)。方法18只小型豬隨機分為對照組N5，模型組N5，和ADHGF組N8。對照組只進行二次單純開胸手術(shù)間隔3周，其余兩組第一次開胸于左回旋支起始處放置一AMEROID環(huán)。3周后，再次開胸，于直視下將1ML的生理鹽水模型組、109PFUADHGFADHGF組直接注射到左回旋支供血的缺血區(qū)域與正常心肌的移行區(qū)域，每只注射10個點，在二次手術(shù)前和給藥4周后，分別做一次正電子發(fā)光計算機斷層攝影、在體冠狀動脈造影、心臟超聲，分別檢查心肌灌注、側(cè)支血管形成和心臟功能變化。在臨床觀察結(jié)束時，活殺各組動物，用免疫組化染色測定心肌梗死邊緣區(qū)域微血管數(shù)量及用蘇木素堿性復紅苦味酸染色法評價心肌缺血面積。結(jié)果結(jié)果與模型組和給予ADHGF前比較，ADHGF組給藥4周后缺血部位心肌灌注顯著改善P＜005，心肌缺血面積明顯減小P＜001，左心射血分數(shù)明顯改善P＜001，治療組血管數(shù)目明顯多于模型組P＜005，血管密度高于模型組P＜005。結(jié)論腺病毒介導HGF基因轉(zhuǎn)移促進側(cè)支血管形成并改善心肌血液的灌注和改善心臟的運動功能，將成為治療慢性心肌缺血的新的治療手段。

簡介：肝細胞性肝癌HEPATOCULLULARCARCINOMAHCC作為人類最常見、惡性程度最高的惡性腫瘤之一，有著較高的發(fā)病率和死亡率。我國是世界上肝癌發(fā)病集中的國家之一，全球每年新發(fā)生的肝癌患者中有45％在我國大陸地區(qū)，嚴重地威脅著人民的身體健康。手術(shù)切除和肝臟移植是目前治療肝癌較為有效的方法，但由于肝癌具有惡性程度高、發(fā)展迅速、容易復發(fā)和轉(zhuǎn)移等特點，肝癌患者中僅有一部分人適合外科手術(shù)治療。絕大部分肝癌患者只能依賴于放療、化療及其它的一些姑息療法。發(fā)展新的肝癌治療手段和治療途徑已成為廣大醫(yī)務(wù)工作者迫切需要研究和解決的問題。實驗目的1制備兔抗GANKYRIN多克隆抗體，為后續(xù)實驗中GANKYRIN蛋白表達的定性、定量檢測提供實驗工具。2構(gòu)建并制備攜帶靶向沉默GANKYRIN基因SHRNA的慢病毒載體，為后續(xù)驗證采用該表達系統(tǒng)進行肝癌基因治療有效性的體內(nèi)和體外實驗提供基本的實驗工具。3探討慢病毒介導靶向沉默GANKYRIN基因表達系統(tǒng)對肝癌細胞生物學特性的影響，為該系統(tǒng)最終應用于肝癌的臨床治療提供科學的理論和實驗依據(jù)。實驗方法1兔抗GANKYRIN多克隆抗體的制備、純化及鑒定11采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建PET30AGANKYRIN表達載體質(zhì)粒并進行酶切鑒定；12通過IPTG誘導GANKYRIN蛋白原核表達獲得HIS6GANKYRIN融合蛋白；13以純化的HIS6GANKYRIN融合蛋白作為抗原進行免疫反應制備兔抗GANKYRIN多克隆抗體，并進行抗體特異性和反應性檢測。2靶向沉默GANKYRIN基因SHRNA慢病毒載體的構(gòu)建和制備21根據(jù)GANKYRIN基因NM002814CDS區(qū)編碼序列設(shè)計、選擇三段19NT的寡核苷酸序列作為靶向GANKYRIN基因的SHRNA片段序列，并以此合成三對長引物單鏈DNA片段，經(jīng)退火、雙酶切后與同樣雙酶切的質(zhì)粒PDC316EGFPU6連接、轉(zhuǎn)化，獲得三個質(zhì)粒；22將獲得的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染肝癌細胞株SMMC7721，以RTPCR和WESTERNBLOT方法篩選對GANKYRIN基因表達沉默作用最為明顯的質(zhì)粒；再以該質(zhì)粒為基礎(chǔ)通過基因克隆技術(shù)構(gòu)建攜帶有靶向沉默GANKYRIN基因SHRNA片段的慢病毒包裝質(zhì)粒PLENTI6V5SHRNAGANKYRINEGFP；23采用INVITROGEN公司的四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，制備LENTISHRNAGANKYRINEGFP慢病毒表達載體系統(tǒng)，并進行相關(guān)質(zhì)量檢測。3重組慢病毒介導靶向沉默GANKYRIN基因?qū)Ω伟┘毎飳W特性的影響31采用構(gòu)建的LENTISHRNAGANKYRINEGFP慢病毒表達載體系統(tǒng)感染肝癌細胞株SMMC7721，分別檢測該載體系統(tǒng)在體外對肝癌細胞生長抑制率、凋亡率、GANKYRINMRNA和蛋白表達的影響；32建立肝癌細胞SMMC7721移植瘤模型，成瘤后使用LENTISHRNAGANKYRINEGFP慢病毒表達載體進行瘤體注射，觀察其對荷瘤裸鼠移植瘤生長、移植瘤GANKYRINMRNA的影響，以及移植瘤形態(tài)學的改變。實驗結(jié)果1兔抗GANKYRIN多克隆抗體的制備、純化及鑒定11酶切鑒定結(jié)果顯示構(gòu)建的PET30AGANKYRIN表達載體質(zhì)粒正確，轉(zhuǎn)化入宿主大腸桿菌后通過IPTG可誘導GANKYRIN蛋白；12ELISA和WESTERNBLOT檢測結(jié)果顯示，以純化的HIS6GANKYRIN融合蛋白作為抗原制備的兔抗GANKYRIN多克隆抗體有較好的反應性和特異性，可以滿足后續(xù)實驗的要求。2靶向沉默GANKYRIN基因SHRNA慢病毒載體的構(gòu)建和制備21鑒定結(jié)果顯示3個攜帶靶向沉默GANKYRIN基因SHRNA片段的質(zhì)粒構(gòu)建正確，均攜帶有啟動EGFP轉(zhuǎn)錄的CMV啟動子和啟動SHRNA序列轉(zhuǎn)錄的U6啟動子。RTPCR和WESTERNBLOT方法篩選結(jié)果顯示其中的PDC316EGFPU6SHRNACANKYRIN1質(zhì)粒剔降SMMC7721細胞GANKYRIN表達效果最好。以該質(zhì)粒為基礎(chǔ)構(gòu)建的慢病毒包裝質(zhì)粒PLENTI6V5SHRNAGANKYRINEGFP經(jīng)鑒定顯示質(zhì)粒構(gòu)建準確。22通過四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染策略制備的高滴度慢病毒表達載體系統(tǒng)LENTISHRNAGANKYRINEGFP，經(jīng)PCR鑒定和EGFP的活性觀察等檢測方法，確認該慢病毒構(gòu)建正確、滴度高、感染活性高。3重組慢病毒介導靶向沉默GANKYRIN基因?qū)Ω伟┘毎飳W特性的影響31MTT法檢測體外培養(yǎng)SMMC7721細胞生長結(jié)果顯示空白對照組與慢病毒對照組細胞之間相比，細胞生長率差異無顯著性意義P005；32流式細胞儀對體外培養(yǎng)SMMC7721細胞凋亡率的檢測結(jié)果顯示，LEMISHRNAGANKYRINEGFP感染細胞48H后，肝癌SMMC7721細胞凋亡率明顯高于空白對照組、慢病毒對照組，差異有統(tǒng)計學意義P005；34全部裸鼠接種肝癌細胞系SMMC7721單細胞懸液后，均存活并有皮下移植瘤形成。35荷瘤裸鼠使用LENTISHRNAGANKYRINEGFP慢病毒表達載體進行瘤體內(nèi)注射，3W后處死，結(jié)果顯示LENTISHRNAGANKYRINEGFP慢病毒表達載體瘤體內(nèi)注射可顯著抑制移植瘤的生長，其移植瘤體積和重量均明顯低于對照組移植瘤的體積和重量，差異有顯著性意義P005。36荷瘤裸鼠移植瘤GANKYRINMRNA水平檢測結(jié)果顯示，LENTISHRNAGANKYRINEGFP瘤體內(nèi)注射3W后檢測裸鼠移植瘤組織GANKYRINMRNA水平低于對照組，差異有顯著性意義P005，LENTISHRNAGANKYRINEGFP慢病毒載體系統(tǒng)可顯著抑制肝細胞癌組織中GANKYRIN表達。37荷瘤裸鼠移植瘤HE及免疫組化染色結(jié)果顯示，LENTISHRNAGANKYRINEGFP瘤體內(nèi)注射裸鼠移植瘤可抑制肝細胞癌組織中GANKYRIN蛋白表達。結(jié)論1本課題成功構(gòu)建了PET30AGANKYRIN原核表達載體，將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌后通過IPTG誘導原核表達的方法獲得了HIS6TAGGEDGANKYDN融合重組蛋白。2以純化的HIS6TAGGEDGANKYRIN融合蛋白為抗原制備的兔抗GANKYRIN抗血清，經(jīng)WESTERNBLOT檢測表明其對HIS6TAGGEDGANKYRIN融合重組蛋白和SMMC7721肝癌細胞中的GANKYRIN蛋白具有較好的反應性和特異性。該抗血清可作為免疫反應中的抗體用于檢測GANKYRIN蛋白的表達。3利用成功構(gòu)建的慢病毒穿梭質(zhì)粒載體PLEMI6V5SHRNAGANKYRINEGFP，通過四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的策略制備了靶向沉默GANKYRIN基因表達的高滴度重組慢病毒載體LENTISHRNAGANKYRINEGFP，經(jīng)PCR鑒定和EGFP的活性觀察等檢測方法，確認該慢病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建正確、滴度高、感染活性高，為下一步開展靶向GANKYFIN基因的肝癌基因治療臨床前研究提供了必須的實驗工具。4慢病毒載體系統(tǒng)對于肝癌細胞具有較高的轉(zhuǎn)染效率，是以肝細胞為靶細胞的合適的基因轉(zhuǎn)移載體。利用慢病毒載體系統(tǒng)實現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移的治療技術(shù)可成為進行肝癌基因治療的有效手段。5本課題中構(gòu)建的靶向沉默GANKYRIN基因慢病毒載體通過RNAI在體外可有效抑制肝癌細胞系SMMC7721增殖，剔降肝癌SMMC772L細胞系GANKYRINMRNA和GANKYRIN蛋白的表達。6體內(nèi)注射靶向沉默GANKYRIN基因慢病毒載體LENTISHRNAGANKYRINEGFP可顯著抑制裸鼠肝癌SMMC7721細胞皮下移植瘤的生長速度和移植瘤組織GANKYRINMRNA及蛋白表達水平，該表達系統(tǒng)可能是肝癌治療的一種有效工具。本課題的創(chuàng)新性在于1從基因治療的角度探討了慢病毒介導靶向沉默GANKYRIN基因表達系統(tǒng)對肝細胞癌的影響及治療意義，為以GANKYRIN基因為靶點進行肝細胞癌的基因治療研究和相關(guān)基因治療產(chǎn)品最終進入肝細胞癌的臨床治療提供了不可或缺的實驗數(shù)據(jù)；2為在肝臟通過慢病毒載體介導RNAI的技術(shù)手段進行包括腫瘤在內(nèi)的肝臟相關(guān)疾病的基因治療研究提供了通用的基因治療策略。3為利用慢病毒介導基因轉(zhuǎn)移的病毒載體表達系統(tǒng)制造肝臟疾病動物模型的研究奠定了實驗基礎(chǔ)。

簡介：失樂園隱喻的認知分析0碩士學位論文失樂園隱喻的認知分析作者姓名李艷飛學科、專業(yè)外國語言學及應用語言學學號212010050211018指導教師李瑛完成日期2013年4月分類號密級UDC密級失樂園隱喻的認知分析2西華大學學位論文獨創(chuàng)性聲明西華大學學位論文獨創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地方外，本論文不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含其他已申請學位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的貢獻均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實之處，本人愿意承擔相關(guān)法律責任。學位論文作者簽名指導教師簽名日期日期西華大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書西華大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，在校攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)屬于西華大學，同意學校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，西華大學可以將本論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復印手段保存和匯編本學位論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定學位論文作者簽名指導教師簽名日期日期

簡介：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院中國人民解放軍總醫(yī)院碩士學位論文重組1型腺相關(guān)病毒介導HHGF轉(zhuǎn)染ADMSCS治療大鼠急性心肌梗死的實驗研究姓名齊冠鳴申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學（心血管?。┲笇Ы處煑钔?0080526軍醫(yī)進修學院碩IJ學位論文心動檢測判定心臟功能，隨后處死實驗動物，行形態(tài)學檢測并計算梗死面積IS、左室球形指數(shù)SI和擴張指數(shù)DI，天狼猩紅染色測定梗死區(qū)及非梗死區(qū)L、111型膠原容積分數(shù)CVF，免疫組織化學染色檢測局部血管密度及MMP一2和MMP9表達，行組織勻漿，應用RTPCR法測定梗死組織中HHGF的MRNA水平，應用WESTERNBLOTTING法測定梗死組織中HHGF蛋白表達情況。結(jié)果1RAAVLEGFP轉(zhuǎn)染后，大鼠ADMSCS可正常貼壁，生長迅速，細胞倍增時間DT約525H，多次傳代后形態(tài)上無明顯改變，其細胞表面特異性標記及多向分化潛能未受明顯影響。2同種異體轉(zhuǎn)基因ADMSCSEGFP移植后，1周及4周時于梗死心臟局部均可觀察到綠色熒光及相應部位EGFP的表達，兩者相比無顯著差異，移植后8周時梗死局部綠色熒光明顯減弱，但仍可見少量EGFP表達。對照組未觀察到綠色熒光及相應部位EGFP的表達。3成功構(gòu)建攜帶目的基因HHGF的RAAVL。與未轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)基因ADMSCSHHGF組上清液中HHGF的濃度及細胞分泌HHGF的能力均顯著增加。4心肌梗死8周后，與PBS組相比，單純ADMSCS組和轉(zhuǎn)基因ADMSCSHHGF組射血分數(shù)EF、左室搏出量LVSV及左室舒張末容積LVEDV顯著增加，DT／DPM觚、DT／DPM。X／LVSP以及DT／DPM。。、DT／DPMAX／LVSP顯著升高，左室相對重量顯著增加，梗死區(qū)及邊緣區(qū)I、III型膠原容積分數(shù)均顯著降低，而局部血管數(shù)目顯著增多，MMP一2、MMP一9顯著減少，但細胞凋亡指數(shù)AI沒有明顯變化。與單純ADMSCS組相比，轉(zhuǎn)基因ADMSCSHHGF組局部血管數(shù)目增加更為明顯，而MMP一9減少程度低于前者。同時，在細胞移植8周后，單純HHGF組和轉(zhuǎn)基因ADMSCSHHGF組于大鼠梗死心肌組織中均可檢測到HHGF的MRNA及相關(guān)蛋白表達。結(jié)論RAAVL轉(zhuǎn)染未明顯影響ADMSCS的生物學特性；在心肌梗死區(qū)域移植ADMSCSEGFP，術(shù)后4周于移植區(qū)域仍可檢測到外源性EGFP持續(xù)性表達。RAAVLHHGF轉(zhuǎn)染后可提高ADMSCS分泌HHGF的能力；ADMSCSHHGF能夠在移植區(qū)域持續(xù)表達HHGF，并可提高ADMSCS新生血管功能，有助于急性心肌梗死后心臟功能的恢復。關(guān)鍵詞心肌梗死；脂肪間充質(zhì)干細胞；腺相關(guān)病毒；肝細胞生長因子；6

簡介：20世紀末，病毒全基因組測序、生物信息學分析、蛋白質(zhì)組學和DNA芯片技術(shù)的發(fā)展為病毒研究領(lǐng)域帶來了前所未有的變革。應用生物信息學數(shù)據(jù)庫和工具，可對現(xiàn)有的流感病毒序列進化規(guī)律進行研究。通過對病毒序列的分析，可以預測病毒的關(guān)鍵抗原位點或病毒突破宿主障礙的關(guān)鍵氨基酸殘基的變化。從而為傳統(tǒng)方法無法取得成功的疫苗研究帶來了希望。同時也可對病毒進化過程中宿主障礙突破可能帶來的大流行提供預測和有力爭取預警時間。流感病毒疫苗生產(chǎn)現(xiàn)在存在許多需要改進的方面，比如使用雞胚生產(chǎn)流感疫苗的不利于應對大規(guī)模流感爆發(fā)等問題。VERO細胞是WHO生產(chǎn)疫苗指定細胞，能夠利用生物反應器進行大規(guī)模培養(yǎng)，在流感疫苗生產(chǎn)上有著廣闊的應用前景。但VERO細胞不是流感病毒的天然易感細胞，因此建立流感病毒VERO細胞適應株的基因組并通過反向遺傳學技術(shù)制備生產(chǎn)毒株對于流感疫苗的生產(chǎn)具有重要意義。本試驗使用流感病毒VERO細胞適應株AKUNMIN12005VA，設(shè)計帶有ESP3I或ECOL31I酶切位點的引物，用RTPCR擴增AKUNMING12005VA的8個基因全長片段，通過點突變將PB2基因中的兩個ECOL31I位點突變后將這八個基因片段分別連接至雙向表達載體PHW2000上，從而構(gòu)建了流感病毒VERO細胞適應株的基因組，為遺傳重配生產(chǎn)在VERO細胞上高產(chǎn)的流感病毒提供了可供選擇的基因庫。接著通過將AKUNMING12005與AKUNMING12005VA基因及編碼蛋白序列的比對，提供了病毒進化的理論依據(jù)，對改造流感病毒以便于生產(chǎn)高產(chǎn)量和可在VERO細胞基質(zhì)上生產(chǎn)流感疫苗提供了理論指導。

簡介：點擊查看更多是憤怒還是恐懼——特定負性情緒司機風險認知的干擾.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：同濟醫(yī)科大學博士學位論文孕早期人巨細胞病毒宮內(nèi)活動性感染的診斷方法學研究及其對絨毛細胞增殖活性的影響姓名王志新申請學位級別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師聞良珍19990501同濟醫(yī)科大學博士畢業(yè)論文第二部分人巨細胞病毒活動性感染與孕早期絨毛PCNAMRNA表達的關(guān)系目的探討人巨細胞病毒HCMV活動性感染對孕早期絨毛細胞增殖活性的影響。／方法采用原位雜交ISH法檢測有異常妊娠史的早孕孕婦絨毛組織中的HCMVMRNA和PCNAMRNA，比較HCMV活動性感染組HCMVMRNA陽性者16例和非活動性感染組52例絨毛組織中PCNAMRNA表達量的差異。結(jié)果HCMV活動性感染組PCNAMRNA表達量圖像分析的光密度值X±S為O．4583±0．1821，顯著高于非活動性感染組01834±ⅣO．0157PO．01。L結(jié)論HCMV活動性感染可增加絨毛組織細胞增殖活動性．從而增加諸如自然流產(chǎn)等胎兒生長發(fā)育異常的危險性。關(guān)鍵詞人巨細胞病毒感染增殖細胞核抗原信使RIGA表達2