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簡介：上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文老年輕度認(rèn)知功能損害的前瞻性多學(xué)科對照研究姓名肖世富申請學(xué)位級別博士專業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師張明園20050401上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要老年輕度認(rèn)知功能損害的前瞻性多學(xué)科對照研究2目的觀察和評價老年輕度認(rèn)知功能損害艇CI患者的轉(zhuǎn)歸及其認(rèn)知變化特點(diǎn)，探索MCI發(fā)展為癡呆的神經(jīng)心理、腦誘發(fā)電位、結(jié)構(gòu)和功能性腦影像的預(yù)測因素。方法前瞻性隨訪多學(xué)科對照研究。研究對象為患輕度認(rèn)知功能損害的老年人MCI組和認(rèn)知功能正常的老年人對照組，NC組兩組。MCI的診斷標(biāo)準(zhǔn)為①年齡55～85歲②主觀有記憶減退，客觀檢查有輕度認(rèn)知功能損害；③記憶減退病程大于3個月；④簡明智力狀態(tài)檢查MMSE得分26分，韋氏記憶測驗的記憶商MQ為60～79分；⑤總體衰退量表評定為2～3級，哈金斯基缺血指數(shù)4分；⑥不符合癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)；⑦排除特殊原因引起的認(rèn)知功能減退。隨訪對象轉(zhuǎn)為癡呆的標(biāo)準(zhǔn)系根據(jù)DSMIV的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。認(rèn)知評價工具主要是世界衛(wèi)生組織老年認(rèn)知功能評價成套神經(jīng)心理測驗IJ／HOBCAI和韋氏記憶測驗，在基線和隨訪時分別評價研究對象。在基線進(jìn)行腦誘發(fā)電位檢測包括腦干聽覺反應(yīng)ABR、關(guān)聯(lián)性負(fù)變CNV、認(rèn)知誘發(fā)電位ERP的P300和視覺誘發(fā)電位VEP和腦影像檢查包括結(jié)構(gòu)性顯像核磁共振三維測量3DMRI和功能性顯像”氟脫氧葡萄糖正電子發(fā)射斷層檢查“FFD6PET。以基線神經(jīng)心理、腦誘發(fā)電位和腦影像的檢測結(jié)果分析它們對MCI是否發(fā)展為癡呆的預(yù)測作用。結(jié)果MCI組47例，男10例，女37側(cè)；平均蛐SE得分為24122分，ADL為15021分，MQ為71587分NC組50例，男17例，女33例；平均BLASE、ADL和MQ分別為27819分、143_LO8分和948495分。隨訪時間為3418月；兩組對象隨訪期間共有14倒轉(zhuǎn)為癡呆，其中姬I組13例，NC組L例。14例癡呆病人中13例診斷為阿爾茨海默病，1例為血管性癡呆。隨訪期間MCI組癡呆的發(fā)病率為277％，NC組為2O％，兩組的差異具有極顯著性PO01。3年問，MCI組的埔％LSE總分平均下降了2237分，NC組下降了1019分；MCI組的MQ下降了126173，NC組下降了3984MCI組中發(fā)展為癡呆的病人的瑚SE和MQ下降更為明顯，分別下降了55士28分和30018。0。L／HOBCAI測驗結(jié)果顯示，MCI組隨訪時，連線、分類、命名、運(yùn)動、再認(rèn)、延遲回憶諸測驗的成績明顯差予基線水平和NC組P001或005；K1中發(fā)展為癡呆者的詞匯學(xué)習(xí)、連線、分類、命名、詞匯流暢、小標(biāo)記、再認(rèn)、視覺推理、延遲回憶等測驗成績顯著差于未發(fā)展為癡呆的MCI患者P001或005。另外，MCI組及其發(fā)展為癡呆者，日常生活能力的下降也非常顯著，MCI組、癡呆組和NC組的ADL分別增加了49士91分、135109分和00519PO01。2

簡介：點(diǎn)擊查看更多福建省某自然村丙型肝炎病毒感染的分子流行病學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)靶向VEGFSIRNA對K562細(xì)胞凋亡及凋亡抑制基因SURVIVIN表達(dá)影響的研究姓名李方方申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科學(xué)（血液腫瘤）指導(dǎo)教師徐酉華20090501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2熒光顯微鏡證實(shí)重組腺病毒AD5一VEGFSI成功導(dǎo)入HEK293包裝細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)得到良好表達(dá)。3獲得了高滴度重組腺病毒AD5．VEGFSI，病毒滴度約為4．6X1011PFU／ML。結(jié)論成功構(gòu)建了攜帶靶向VEGFSIRNA的重組腺病毒質(zhì)粒，并收獲高滴度重組腺病毒AD5．VEGFSI，為進(jìn)一步的研究打下了良好的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞重組腺病毒，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF，轉(zhuǎn)染第二部分腺病毒介導(dǎo)靶向VEGFSIRNA對K562細(xì)胞凋亡及SURVIVIN基因表達(dá)的影響目的采用腺病毒介導(dǎo)VEGFSIRNA即攜帶VEGFSIRNA的重組腺病毒沉默白血病K562細(xì)胞中VEGF的表達(dá)，檢測K562細(xì)胞增殖及凋亡情況，并進(jìn)一步檢測細(xì)胞內(nèi)SURVIVIN基因的表達(dá)，探討VEGF在白血病發(fā)病中的作用及VEGF與SURVIVIN在白血病發(fā)病中的關(guān)系。方法應(yīng)用第一部分成功構(gòu)建的攜帶靶向VEGFSIRNA的重組腺病毒AD5。VEGFSI感染K562細(xì)胞。實(shí)驗分為三組實(shí)驗組K562／AD5．VEGFSI、空載體組K562／AD5、空白塒照組K562。4

簡介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文含風(fēng)疹病毒部分核酸序列的噬菌體樣顆粒的研制及其應(yīng)用研究姓名趙立紅申請學(xué)位級別博士專業(yè)病原生物學(xué)指導(dǎo)教師王志玉20090518山東大學(xué)博士學(xué)位論文3將構(gòu)建的風(fēng)疹病毒RNA噬菌體樣顆粒作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)用于所建立的風(fēng)疹病毒RNATAQMAN實(shí)時熒光定量RTPCR方法中，并對其進(jìn)行評價。實(shí)驗第一部分建立風(fēng)疹病毒RNATAQMAN實(shí)時熒光定量RTPCR方法，將風(fēng)疹病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄CDNA作為RV實(shí)時熒光定量RTPCR陽性標(biāo)準(zhǔn)品，定量檢測已確診的風(fēng)疹患者咽拭子標(biāo)本中風(fēng)疹病毒RNA，評價其敏感度與特異度。實(shí)驗第二部分利用MS2噬菌體衣殼蛋白自我組裝的特性，采用原核表達(dá)技術(shù)將風(fēng)疹病毒EL部分保守序列包裝至JMS2噬菌體衣殼蛋白內(nèi)構(gòu)成噬菌體樣顆粒。即將大腸桿菌MS2噬菌體衣殼蛋白的編碼基因序列構(gòu)建到原核表達(dá)載體PET30A獲一重組表達(dá)載體，然后將風(fēng)疹病毒E1的部分高度保守RNA序列構(gòu)建到該重組表達(dá)載體上，經(jīng)誘導(dǎo)后表達(dá)獲內(nèi)含風(fēng)疹病毒E1部分保守序列的噬菌體樣顆粒，然后對內(nèi)含風(fēng)疹病毒EL部分保守序列的噬菌體樣顆粒進(jìn)行定量分析，并驗證其耐核糖核酸酶RNASE特性，以及分析其在4℃和37℃血漿中的穩(wěn)定性，并與風(fēng)疹病毒病毒株在37“C血漿中的穩(wěn)定性進(jìn)行比較。實(shí)驗第三部分將實(shí)驗第二部分構(gòu)建的內(nèi)含風(fēng)疹病毒E1部分保守序列的噬菌體樣顆粒作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用于實(shí)驗第一部分所建立的風(fēng)疹病毒RNATAQMAN實(shí)時熒光定量RTPCR方法中，并定量檢測已確診的風(fēng)疹患者鼻咽拭子標(biāo)本中風(fēng)疹病毒RNA，評價其敏感度與特異度。通過對其檢測靈敏度、重復(fù)性、敏感度與特異度等指標(biāo)的測定，并與實(shí)驗第一部分中RNA逆轉(zhuǎn)錄CDNA作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品時的相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行比較，來分析實(shí)驗第二部分構(gòu)建的內(nèi)含風(fēng)疹病毒E1部分保守序列的噬菌體樣顆粒作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品的優(yōu)勢所在。實(shí)驗方法1建立風(fēng)疹病毒RNATAQMAN實(shí)時熒光定量RTPCR方法，將風(fēng)疹病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄的CDNA，作為RV實(shí)時熒光定量RTPCR陽性標(biāo)準(zhǔn)品，定量檢測已確診的風(fēng)疹患者鼻咽拭子標(biāo)本中風(fēng)疹病毒RNA，評價其敏感度與特異度。2利用MS2噬菌體衣殼蛋白自我組裝的特性，采用原核表達(dá)技術(shù)將風(fēng)疹病毒E1部分保守序列包裝NMS2噬菌體衣殼蛋白內(nèi)構(gòu)成噬菌體樣顆粒，采用基因工程方法2

簡介：目的了解某校本科護(hù)生循證護(hù)理（EBN）相關(guān)知識認(rèn)知、學(xué)習(xí)態(tài)度情況的基本情況，探討本科EBN課程設(shè)置預(yù)案，為本科護(hù)生的EBN教育提供理論依據(jù)。方法本研究采用普查和德爾菲法，分兩個階段進(jìn)行。第一階段為基線調(diào)查與分析，了解本科護(hù)生EBN認(rèn)知情況和教育需求；第二階段通過德爾菲法構(gòu)建本科EBN課程預(yù)案。結(jié)果⑴認(rèn)知現(xiàn)況329名本科護(hù)生中僅有183的對EBN非常了解，425的比較了解，1246的一般了解，其余8146的從沒聽說過EBN；對EBN有一定了解的護(hù)生中通過講座和老師（臨床帶教老師）提及途徑獲得的占2951和2459；⑵教育需求329名本科護(hù)生中7690的表示愿意學(xué)習(xí)EBN相關(guān)知識；6049的認(rèn)為有必要在本科教育階段開設(shè)EBN課程；4650的本科護(hù)生選擇“選修課”作為EBN開課形式；⑶課程設(shè)置4706的專家認(rèn)為在護(hù)理專業(yè)本科教育中開設(shè)EBN課程“非常必要”，3529的認(rèn)為“必要”；5882的專家建議將EBN課程列入護(hù)理專業(yè)本科的選修課程；6470的專家建議將EBN課程安排在整個護(hù)理學(xué)學(xué)習(xí)的中后期，即基礎(chǔ)課程學(xué)習(xí)后期，臨床實(shí)習(xí)前期；7647的專家建議從事臨床工作的老師擔(dān)任本科EBN課程教學(xué)任務(wù)；本科循證護(hù)理課程預(yù)設(shè)6章23節(jié)內(nèi)容。結(jié)論⑴本科護(hù)生對EBN認(rèn)知情況較差；⑵本科護(hù)生對EBN知識學(xué)習(xí)興趣濃厚；⑶本科EBN課程開課形式為選修課；⑷開課時機(jī)基礎(chǔ)課程學(xué)習(xí)后期，臨床實(shí)習(xí)前期；師資來源從事臨床工作的臨床老師；⑸循證護(hù)理課程預(yù)設(shè)6章23節(jié)內(nèi)容，安排18學(xué)時，機(jī)動2學(xué)時。

簡介：重組腺相關(guān)病毒攜帶CEA感染DC誘導(dǎo)CTL抗10VO直腸癌細(xì)胞活性的研究研究指導(dǎo)教師疊揖莖亟俊蓮麴握申請學(xué)位門類級別專業(yè)名稱研究方向所在學(xué)院醫(yī)堂亟目主疸堂生塑漁痘笠三魚瘞醫(yī)堂醫(yī)2012年3月19日山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄縮略詞表1中文摘要2英文摘要OQIL003正文4材料試劑設(shè)備6實(shí)驗方法7討侖10附圖14參考文獻(xiàn)18綜述22正文22參考文獻(xiàn)27個人簡介31致謝32

簡介：目的（1）構(gòu)建定位于溶酶體、泛素的PRP表達(dá)載體，并進(jìn)行蛋白表達(dá)特點(diǎn)及定位的鑒定；（2）動物免疫后，初步研究此融合表達(dá)載體在小鼠體內(nèi)激起的細(xì)胞免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng)，得到一組最基礎(chǔ)的免疫數(shù)據(jù)，為以后朊蛋白疫苗的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法（1）將泛素基因、溶酶體膜定位信號序列基因和PRP基因連接，克隆至PCDNA31載體中，構(gòu)建表達(dá)載體PCDNA31UPRP、PCDNA31PRPL；瞬時轉(zhuǎn)染真核表達(dá)細(xì)胞，經(jīng)WESTERNBLOT和間接免疫熒光技術(shù)檢測PRP表達(dá)特點(diǎn)；（2）小鼠分八組，其中四組小鼠按0、14、28天分三次分別用質(zhì)粒PCDNA31、PCDNA31HUPRP、PCDNA31UBPRP、PCDNA31PRPL免疫；另四組小鼠中，有一組按0、14、28天分三次免疫重組PRP，另三組分別用質(zhì)粒PCDNA31HUPRP、PCDNA31UBPRP、PCDNA31PRPLⅡ首次免疫，PRP蛋白加強(qiáng)兩次。最后一次免疫后2周，取脾臟及血液進(jìn)行ELISPOT、ELISA、WESTERNBLOT檢測。結(jié)果（1）構(gòu)建的各種PRP定位表達(dá)載體均可定位表達(dá)具有三種類型的糖基化分子的PRP，以雙糖基化分子類型最多。帶有泛素、溶酶體信號尾的質(zhì)粒PCDNA31UBPRP、PCDNA31PRPLⅡ的PRP表達(dá)隨著時間的延長蛋白表達(dá)量下降，提示泛素、溶酶體信號能加速表達(dá)的PRP在細(xì)胞內(nèi)的降解。（2）動物免疫后，重組蛋白增強(qiáng)免疫的四組小鼠脾淋巴細(xì)胞在全長人PRP的刺激下，UBPRPRPRP組有兩只小鼠的脾淋巴細(xì)胞分泌特異性IFNΓ，分別為215、50SFCS106PBMCS；PRPRPRP組中有一只小鼠為1135SFCS106PBMCS，PRPLⅡRPRP組和RPRP組的小鼠脾淋巴細(xì)胞不分泌特異性IFNΓ；在DNA核酸疫苗免疫的四組小鼠脾淋巴細(xì)胞中，儀UBPRP組的淋巴細(xì)胞兩只小鼠淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生明顯的斑點(diǎn)，分別為56、50SFCS106PBMC，其他組的脾淋巴細(xì)胞在重組蛋白的刺激下均為陰性。小鼠抗血清ELISA結(jié)果顯示，重組蛋白組免疫小鼠的抗血清的滴度為151200，經(jīng)質(zhì)粒初免、重組蛋白增強(qiáng)小鼠抗血清效價在大于1102400，明顯高于單純重組蛋白免疫組；UBPRP組及PRPLⅡ組質(zhì)粒免疫小鼠抗血清滴度大于1400；未修飾PRP組及空載體PCDNA31組小鼠抗血清與免疫前血清的PN值小于21。各組抗血清特異性檢測的WB結(jié)果顯示各組免疫小鼠的抗血清均可特異性識別重組人PRP。結(jié)論成功構(gòu)建了溶酶體、泛素定位表達(dá)的PRNP核酸疫苗載體PCDNA31UBPRP、PCDNA31PRPLⅡ與泛素融合表達(dá)及定位于溶酶體的PRP能一定程度地打破免疫耐受，誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文基于SURVIVIN的新型“模擬病毒”瘤苗的分子設(shè)計及抗腫瘤免疫的研究姓名楊曌申請學(xué)位級別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師吳玉章20070501

簡介：點(diǎn)擊查看更多蒼葛止瀉靈抗輪狀病毒實(shí)驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多AD模型大鼠的制備及其認(rèn)知能力和腦電頻譜特征的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號R7303博士學(xué)位論文單位代碼11904學(xué)號20021059表達(dá)分泌型ST13RII胞外區(qū)RANTES融合基因重組腺病毒的構(gòu)建及抗腫瘤作用的實(shí)驗研究THESTUDYOFCONSTRUCTINGTHERECOMBINANTADENOVIRUSEXPRESSINGTHESOLUBLEEXTRACELLULARDOMAINOFT13RIIRANTESFUSIONGENEANDUSINGINANTITUMOREXPERIMENTS專業(yè)研究生導(dǎo)師副導(dǎo)師腫瘤學(xué)王旭東郝希山教授任秀寶副教授天津醫(yī)科大學(xué)2005年6月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文RNARNASERPMRRPCRTCRTHTNFRIBONUCLEICACID核糖核酸RIBONUCLEASE核糖核酸酶REVOLUTIONSPERMINUTE每分鐘轉(zhuǎn)速REVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASE逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)CHAINREACTIONTCELLRECEPTORT細(xì)胞抗原受體HELPERTLYMPHOCYTE輔助性T細(xì)胞TUMORNECROSISFACTOR腫瘤壞死因子

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎患兒血5脂氧酶及5脂氧酶激活蛋白MRNA的測定及臨床意義姓名王青梅申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師黃柳一20090524呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎患兒血5月旨氧酶及5脂氧酶激活蛋白MRNA的測定及臨床意義脂氧酶激活蛋白5一LIPOXYGENASEACTIVATINGPROTEIN，F(xiàn)LAP是白三烯合成的關(guān)鍵酶，因此有理由推測RSV毛細(xì)支氣管炎患兒血中可能存在5一LO及FLAPMRNA異常表達(dá)，從而導(dǎo)致白三烯生成增加。檢測患LJI周血5LO及FLAPMRNA水平從一個側(cè)面反應(yīng)白三烯在RSV毛細(xì)支氣管炎發(fā)病機(jī)制中的作用。5LO及FLAP合成酶系統(tǒng)主要存在髓性白細(xì)胞中，包括嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞，并有文獻(xiàn)表明RSV毛細(xì)支氣管炎患兒氣道分泌物中上述細(xì)胞有明顯升高，那么，RSV毛細(xì)支氣管炎患兒血中5LO及FLAPMRNA水平與外周血各類白細(xì)胞計數(shù)有無關(guān)系值得探討。另外，RSV尚可引起非喘息性下呼吸道感染，那么，5LO及FLAPMRNA表達(dá)水平在RSV毛細(xì)支氣管炎與無喘息RSV下呼吸道感染中有無差別，以及5LO及FLAPMRNA表達(dá)水平與RSV毛細(xì)支氣管炎臨床嚴(yán)重程度有無相關(guān)性值得探討。研究目的1探討5LO及FLAP在RSV毛細(xì)支氣管炎發(fā)病機(jī)制中的作用，為白三烯受體拮抗劑在毛細(xì)支氣管炎中的應(yīng)用提供理論依據(jù)2探討5一LO及FLAPMRNA表達(dá)水平與RSV毛細(xì)支氣管炎臨床嚴(yán)重程度的相關(guān)性3探討血5一LO及FLAPMRNA表達(dá)水平與外周各類白細(xì)胞的相關(guān)關(guān)系研究對象和方法1研究對象RSV毛細(xì)支氣管炎組A組對入我院20例毛細(xì)支氣管炎病人進(jìn)行RSV檢測，選取其中RSV陽性的17例作為RSV毛細(xì)支氣管炎組。非喘息RSV下呼吸道感染組B組對同期入我院20例無喘息下呼吸道感染患兒進(jìn)行RSV檢測，選取其中陽性者的8例作為無喘息RSV下呼吸道感染組

簡介：目的流行性感冒簡稱流感是由甲A、乙B、丙C三型流感病毒分別引起的急性呼吸道感染，其中甲型流感病毒在自然界中廣泛分布，常以流行形式出現(xiàn)，可引起世界性流感大流行，對人類健康和世界經(jīng)濟(jì)造成巨大影響。流感病毒在自然界中不僅能經(jīng)常發(fā)生抗原性漂移，而且也能發(fā)生同型毒株間基因片段的重配，這樣就造成了流感疫苗的時效性。因此，研制具有交叉保護(hù)能力的流感疫苗對于有效防止流感的發(fā)生和流行具有重要意義。甲型流感病毒RNA分為8個節(jié)段，其中第5節(jié)段編碼其核衣殼蛋白NUCLEOPROTEIN，NP。NP參與病毒復(fù)制周期的多個階段，影響病毒的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、裝配及轉(zhuǎn)運(yùn)功能；此外，NP也是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTESCTL識別的主要抗原，CTL通過識別MHCI類分子遞呈的核蛋白抗原肽而清除感染的流感病毒，因而能對不同亞型的病毒株產(chǎn)生交叉保護(hù)性。本研究旨在構(gòu)建PCDNA31NP的核酸疫苗，觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)，并在機(jī)體水平上研究其單獨(dú)應(yīng)用及與本室成功構(gòu)建的PCDNA31HA聯(lián)合應(yīng)用的抗流感病毒免疫效果。方法1甲型流感病毒NP基因DNA疫苗的構(gòu)建從流感病毒株APR834H1N1感染的雞胚尿囊液中提取病毒RNA，用RTPCR技術(shù)擴(kuò)增NP基因，并將擴(kuò)增的NP基因克隆入真核表達(dá)載體PCDNA31，構(gòu)建NP基因的真核表達(dá)載體PCDNA31NP。2PCDNA31NP的初步表達(dá)將PCDNA31NP質(zhì)粒DNA用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，然后用免疫熒光檢測重組質(zhì)粒的表達(dá)情況。再將PCDNA31NP質(zhì)粒DNA經(jīng)肌肉注射免疫動物，免疫組化技術(shù)檢測NP基因在肌細(xì)胞的表達(dá)及持續(xù)時間。3PCDNA31NP質(zhì)粒DNA的免疫效果研究將PCDNA31NP質(zhì)粒DNA采用DNA疫苗的肌肉注射方式免疫動物，通過免疫檢測技術(shù)觀察其對機(jī)體的抗流感病毒免疫應(yīng)答；并用同一亞型流感病毒攻擊免疫小鼠，觀察肺指數(shù)和肺指數(shù)抑制率等指標(biāo)；最后用不同亞型的流感病毒攻擊免疫小鼠，觀察保護(hù)率。綜合評價PCDNA31NP作為DNA疫苗的保護(hù)效果，和與PCDNA31HA聯(lián)合應(yīng)用的免疫效果。結(jié)果1經(jīng)RTPCR技術(shù)從流感病毒RNA中擴(kuò)增到NP基因，經(jīng)酶切后插入PCDNA31，構(gòu)建成PCDNA31NP。該重組載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切、PCR及序列測定等鑒定，證實(shí)PCDNA31NP構(gòu)建成功。2PCDNA31NP質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染ITEK293細(xì)胞后，免疫熒光結(jié)果顯示所轉(zhuǎn)染的細(xì)胞有較強(qiáng)的綠色熒光信號。給實(shí)驗動物肌肉內(nèi)注射PCDNA31NP質(zhì)粒DNA后，在實(shí)驗觀察的所有時間點(diǎn)均可觀測到NP蛋白的表達(dá)。3淋巴細(xì)胞增殖試驗表明，動物接種PCDNA31NP質(zhì)粒DNA后，在流感病毒抗原的刺激下，能夠誘導(dǎo)有效的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。流感病毒攻擊后肺指數(shù)等指標(biāo)顯示，PCDNA31NP質(zhì)粒DNA與PCDNA31HA質(zhì)粒DNA聯(lián)合使用對抑制肺病變程度的效果顯著。被PCDNA31NP質(zhì)粒DNA免疫的動物對同亞型流感病毒攻擊的保護(hù)率為50％，對不同亞型流感病毒攻擊的保護(hù)率為375％，而且與PCDNA31HA質(zhì)粒DNA聯(lián)合使用后可明顯提高保護(hù)率。結(jié)論1成功構(gòu)建了甲型流感病毒NP基因的真核表達(dá)載體PCDNA31NP。2免疫熒光技術(shù)證實(shí)了NP基因能夠在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)；實(shí)驗動物肌肉注射該重組質(zhì)粒DNA后可在肌細(xì)胞內(nèi)檢測到目的基因表達(dá)。3淋巴細(xì)胞增殖試驗證實(shí)，PCDNA31NP的質(zhì)粒DNA免疫動物后能有效誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗流感病毒的細(xì)胞免疫。PCDNA31NP的質(zhì)粒DNA免疫動物后，對同一亞型和或不同亞型流感病毒的攻擊都能提供有效的保護(hù)作用，與PCDNA31HA聯(lián)合應(yīng)用可明顯提高保護(hù)效果。綜上所述，提示PCDNA31NP可作為具有交叉保護(hù)作用的、抗流感病毒的侯選DNA疫苗。

簡介：呼吸道合胞病毒（RESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，RSV）是引起嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎和肺炎的主要原因，其發(fā)病機(jī)制仍不甚明確。關(guān)于RSV肺炎，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)并沒有特異的治療措施，臨床上也沒有明確有效的RSV疫苗面市。而中醫(yī)藥治療病毒性肺炎包括RSV肺炎，有著一定優(yōu)勢。某些病毒性疾病的發(fā)生與機(jī)體細(xì)胞凋亡的規(guī)律失常有關(guān)，RSV感染與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切。病毒感染早期，機(jī)體可能通過促進(jìn)局部受染細(xì)胞的凋亡來限制病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，而病毒則可能通過抑制宿主細(xì)胞凋亡的發(fā)生以利于子代病毒的復(fù)制和繁殖。體內(nèi)外實(shí)驗研究均證實(shí)金欣口服液具有拮抗RSV作用，但作用機(jī)制尚未明確。推測金欣口服液在RSV感染宿主細(xì)胞早期，通過拮抗RSV抑制細(xì)胞凋亡的進(jìn)程實(shí)現(xiàn)抗病毒作用。本研究在此基礎(chǔ)上進(jìn)行。目的1檢測RSV感染細(xì)胞早期（12H、24H）宿主細(xì)胞凋亡率及凋亡相關(guān)基因BCL2、BAX表達(dá)量的影響，探討RSV感染宿主細(xì)胞早期的相關(guān)機(jī)制。2檢測金欣口服液含藥血清對RSV感染早期細(xì)胞凋亡率及BCL2、BAX表達(dá)量的影響，探討金欣口服液拮抗RSV的相關(guān)機(jī)制。方法本實(shí)驗采用細(xì)胞培養(yǎng)、血清藥理學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、REALTIMEPCR、ANNEXINVPI法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率及BCL2、BAX表達(dá)量的變化。數(shù)據(jù)采用SPSS13軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)論1金欣口服液具有拮抗呼吸道合胞病毒作用。2呼吸道合胞病毒在感染宿主細(xì)胞早期可能通過抑制細(xì)胞凋亡以利于自身的復(fù)制與增殖。3金欣口服液治療RSV肺炎，在RSV感染早期，通過逐步下調(diào)抑凋亡基因BCL2、上調(diào)促凋亡基因BAX的表達(dá)以拮抗RSV感染宿主細(xì)胞早期的抑制細(xì)胞凋亡作用，影響進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)病毒的復(fù)制增殖過程，從而阻止病毒的擴(kuò)散，減輕RSV對機(jī)體的損傷。

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的HSVTKGCV自殺基因治療前列腺癌的體外實(shí)驗研究姓名吳建輝申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師黎瑋張勇20050301中文摘要性所必需的催化亞單位，它的表達(dá)調(diào)控在轉(zhuǎn)錄水平上。利用端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子HTERT來調(diào)控HSVTK基因，理論上可使HSVTK基因選擇性在端粒酶陽性的腫瘤細(xì)胞中增殖。另一種利用組織或腫瘤特異性啟動子，如AFPPSA及PS2等，來調(diào)控腺病毒攜帶的HSVTK基因，這種改造后的病毒在動物實(shí)驗中非常成功，前列腺腫瘤特異性增殖型腺病毒CN706及CV787己進(jìn)入臨床試驗，然而經(jīng)此途徑改造的病毒其增殖被局限于僅能表達(dá)相應(yīng)腫瘤特異性抗原的腫瘤類型。而單就前列腺癌，目前己檢測出500多種特異性標(biāo)志物。腫瘤的基因治療關(guān)鍵在于選擇好合適的載體，高效率的轉(zhuǎn)染是基因表達(dá)的前提。腺病毒載體是前列腺癌基因治療的最理想的載體?；诖耍覀円詯盒阅[瘤無限增殖特性為靶點(diǎn)，用人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶HTERT啟動子調(diào)控腺病毒攜帶的HSVTK基因，從而使HSVTK基因的復(fù)制局限在端粒酶陽性的腫瘤。本文應(yīng)用人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子和小鼠巨細(xì)胞病毒啟動子CMV調(diào)控攜帶HSVTK基因的減毒非增殖型腺病毒，通過體外實(shí)驗觀察HSVTKGCV自殺基因療法對前列腺癌細(xì)胞LNCAPPC3和人正常成纖維細(xì)胞MRC5的治療效果，對其抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法和結(jié)果1熒光顯微鏡鏡檢觀察病毒轉(zhuǎn)染情況將攜帶綠色熒光蛋白報告基因的腺病毒ADCMVEGFP和ADHTERTEGFP，按不同MOT值MOI00101110100分別轉(zhuǎn)染人正常成纖維細(xì)胞MRC5及腫瘤細(xì)胞LNCAPPC3轉(zhuǎn)染后第3天在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果表明ADHTERTEGFP僅能轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，且在