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簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多腺病毒介導(dǎo)CTLA-41g基因轉(zhuǎn)染延長(zhǎng)大鼠腎臟移植物存活的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTERTHELEFTITRINRECOMBINANTADENOVIRUSVECTORSINFLUENCETHEEXPRESSIONOFDOWNSTREAMGENESBYYUANLINGXUSUPERVISORPROFZANGXINMAHONGBAOCELLBIOLOGY一一DEPARTMENTOFBIOENGINEERINGMAY2011原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者彳蔽I起遵日期為F／年‘月／D日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者彳泰L起勉日期知11年6月I。日

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）的培養(yǎng)及CEA重組痘苗病毒轉(zhuǎn)染DC誘導(dǎo)的特異性T細(xì)胞免疫姓名吳軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)消化內(nèi)科指導(dǎo)教師王曉懷周殿元2001530簡(jiǎn)單摘要／／7＼體外成功地完成了CDL4單核細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀G啦DC的蕉養(yǎng)，并進(jìn)一步研究人癌胚抗原重組痘苗病毒RV．CEA轉(zhuǎn)染DC后體外誘導(dǎo)的CEA特異性細(xì)胞免疫。首先，分離癌癥患者的外周血單核細(xì)胞，分別加入重組人粒．單集落刺激因子RHGMCSF1000U／MLIL4500U／MLA組、血GMCSF1000U／MLB組及單純含10％牛血清的RPMI1640C組。體外培養(yǎng)一周后C于光鏡及電鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的表面標(biāo)志、MTT比色法檢測(cè)上述三種條件培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞的刺激增殖作用√結(jié)果，癌癥患者外周血中的單核細(xì)胞在RHGM．CSF1000U／MIIL．4500U，ML的條件下培養(yǎng)一周，就可看到典型的樹(shù)突狀細(xì)胞形態(tài)，其表面CDL4分子表達(dá)減少，HLADR、CD54、CD40、CD83及CD86分子的表達(dá)明顯增高，且具有明顯刺激T細(xì)胞增殖的能力。成功地完成了外周血單核細(xì)胞來(lái)源的DC的培養(yǎng)。其次，用RV．CEA轉(zhuǎn)染晚期大腸癌患者的DC，再激發(fā)自體T細(xì)胞，然后檢測(cè)T細(xì)胞對(duì)CEA分泌性腫瘤細(xì)胞的體外殺傷活性，并與未經(jīng)RV．CEA轉(zhuǎn)染的DC激發(fā)的T細(xì)胞及野生型痘苗病毒轉(zhuǎn)染的DC激發(fā)的T細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果，經(jīng)RV．CEA轉(zhuǎn)染的DC激活的T細(xì)胞增殖力強(qiáng)，且對(duì)CEA分泌性腫瘤細(xì)胞具特異性殺傷活性。關(guān)鍵詞；樹(shù)突狀細(xì)胞；外周血單核細(xì)胞癌胚抗原；痘苗病毒

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒潛伏膜蛋白1轉(zhuǎn)化鼻咽上皮細(xì)胞的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名劉潔瓊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師賀智敏20080501碩士學(xué)位論文中文摘要PLNSX為對(duì)照分別導(dǎo)入PA317包裝細(xì)胞，G418篩選2周后擴(kuò)大培養(yǎng)，自細(xì)胞培養(yǎng)上清獲得后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需的感染性逆病毒RVPLNSX、RVLMPLWR、RVLⅧ1TRADD與RVLMPL△232。51。然后，用濃縮的病毒分別感染人鼻咽上皮細(xì)胞NP69，匯合克隆培養(yǎng)，獲得NP69PLNSX、NP69LMP1WR、NP69L腳1吼∞D(zhuǎn)與NP69L腳1必2。514種轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。觀察和檢測(cè)以上轉(zhuǎn)化細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)曲線、平板克隆、細(xì)胞周期等。同時(shí)，采用固相PH梯度雙向凝膠電泳技術(shù)結(jié)合WESTEMBLOT方法分析NP69PLNSX、NP69LMPLWR、NP69L御1TRADD與NP69LMPL△232。351細(xì)胞系磷酸化蛋白質(zhì)表達(dá)的差異，即在感染24小時(shí)后抽提細(xì)胞總蛋白，2DE分別分離NP69PLNSX、NP69LMP1WR、NP69LⅧ1吼心D與NP69LMP1△232351細(xì)胞的總蛋白質(zhì)，每組平行進(jìn)行兩塊膠電泳，其中一塊作為制備膠，另一塊作為分析膠。制備膠考染顯色，得到了分辨率較高、重復(fù)性較好的NP69PLNSX、NP69LMP1WR、NP69LMP1T啪D與NP69LMPL△232。351細(xì)胞總蛋白質(zhì)2D膠電泳圖譜；分析膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜后，與抗酪氨酸磷酸化抗體孵育，進(jìn)行WESTEMBLOT分析，獲得差異表達(dá)酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)的反應(yīng)圖譜；將制備膠的電泳圖譜和WESTEMBLOT的反應(yīng)圖譜進(jìn)行比對(duì)分析，在制備膠上找到相應(yīng)的差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)點(diǎn)。利用MALDITOFMS對(duì)差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，部分差異蛋白質(zhì)應(yīng)用免疫沉淀方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果1NP69LMPLWT細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中，逐漸由多角形、II

簡(jiǎn)介：目的調(diào)查在呼吸科就診的COPD患者的一般情況及疾病認(rèn)知狀況，為進(jìn)一步在遼寧地區(qū)普及COPD相關(guān)知識(shí)和提高人們對(duì)COPD的認(rèn)識(shí)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和相關(guān)信息。方法采用調(diào)查問(wèn)卷的方法，對(duì)我院2007年5月～2008年11月在呼吸科就診和門(mén)診定期隨訪的206例COPD患者進(jìn)行一般情況及疾病認(rèn)知狀況調(diào)查，分析與認(rèn)知程度相關(guān)的因素。結(jié)果COPD患者年齡普遍偏大，平均年齡6469±1016歲，社會(huì)經(jīng)濟(jì)地位和受教育程度普遍偏低，對(duì)COPD的認(rèn)知明顯不足，對(duì)COPD名稱(chēng)及COPD急性加重方面的知曉率分別為277％和262％，病情嚴(yán)重程度相對(duì)較輕、受教育程度和經(jīng)濟(jì)收入水平低下患者的認(rèn)知水平明顯下降。結(jié)論COPD患者對(duì)于疾病的認(rèn)知水平十分低下，尤其是低收入，受教育水平較低及病情相對(duì)較輕的患者對(duì)疾病的認(rèn)知程度更低，有必要加大對(duì)COPD相關(guān)知識(shí)的宣傳教育力度，提高COPD患者的疾病認(rèn)知程度，從而提高疾病防治水平以減輕家庭及社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

簡(jiǎn)介：天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文副粘病毒天津株HN、M基因克隆與表達(dá)的研究姓名袁立軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)病原生物學(xué)指導(dǎo)教師李曉眠李梅20070501天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文●FDVODPBSPCABPCRPVDFRNAASINRTSDSNEWCASTLEDISEASEVIRUS新城疫病毒OPTICALDENSITY光密度PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液POLYCLONALANTIBODY多克隆抗體POLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)POLYVINYLIDENEDIFLUORIDE聚偏二氟乙烯RNAA∞INHIBITORREVERSETRANSCRIPTI∞SODIUMDODECYLSULFATERNA酶抑制劑逆轉(zhuǎn)錄十二烷基硫酸鈉SODIUMDODECYLSULFATESDSPAGEPOLYACRYLAMIDEGEL聚丙烯酰胺凝膠變性電泳ELECTROPHORESISSE_VTEMEDSENDAIVIRUS仙臺(tái)病毒N，NN’，NTETRAMETHYL四甲基乙二胺ETHYLENEDIAMINE2

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簡(jiǎn)介：目的腫瘤壞死因子凋亡相關(guān)配體TNFRELATEDAPOPTOSISINDUCINGLIG，TRAIL是近年發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子家族的一員，在正常人體組織中廣泛存在，主要參與機(jī)體的免疫自穩(wěn)定、免疫監(jiān)控和免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)，但對(duì)正常組織細(xì)胞基本無(wú)毒副作用，而主要選擇性作用于腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)其凋亡。鑒于有學(xué)者報(bào)道，TRAIL表達(dá)的降低可能與HBV感染的慢性化有關(guān)，我們推測(cè)，TRAIL可能在抑制乙肝病毒復(fù)制方面發(fā)揮某種作用。為此，作者采用肝癌細(xì)胞株HEPG2及其同種系的HEPG2215建立體外細(xì)胞模型，就TRAIL分子對(duì)HBV復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的影響及其與凋亡的關(guān)系作了初步探索，希望可以為抗乙肝病毒治療找到新思路。方法1研究STRAIL對(duì)HBVDNA轉(zhuǎn)錄、復(fù)制和表達(dá)的影響。將具有相同遺傳背景的肝癌細(xì)胞株HEPG2215和HEPG2細(xì)胞作為體外模型，使25～20NGMLSTRAIL分別作用于已與HBV基因組整合的HEPG2215和轉(zhuǎn)染了乙肝病毒PHBV41的HEPG2細(xì)胞，通過(guò)ELISA測(cè)定HEPG2215細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBSAG、HBEAG量的變化情況加STRAIL0～5天；通過(guò)免疫組化觀察HEPG2細(xì)胞分泌HBSAG、HBCAG的變化情況加STRAIL48H后；用SOUTHERN核酸吸印雜交檢測(cè)HEPG2215和HEDG2細(xì)胞中HBV復(fù)制中間體水平，NTHERN核酸吸印雜交檢測(cè)HEPG2細(xì)胞中35KB、24KB、21KB和07KBHBVMRNA的轉(zhuǎn)錄水平加STRAIL48H后。2用乙肝病毒全基因重組質(zhì)粒PHBV41轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，加入STRAIL10、20、100、200、1000NGML作用48H后，以電泳觀察DNALADDER形成實(shí)驗(yàn)，了解不同濃度的STRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果1SOUTHERN核酸吸印雜交的結(jié)果顯示，與未加STRAIL的對(duì)照組相比，10NGMLSTRAIL作用48H后的實(shí)驗(yàn)組已與HBV基因組整合的HEPG2215或轉(zhuǎn)染了乙肝病毒PHBV41的HEPG2細(xì)胞中的HBV復(fù)制中間體RCDNA、SSDNA均下降了3～20倍；NTHERN核酸吸印雜交的結(jié)果顯示，與未加STRAIL的對(duì)照組相比，加了10NGMLSTRAIL作用48H后的實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染了乙肝病毒PHBV41的HEPG2細(xì)胞中的HBV前基因組RNA即35KBRNA的轉(zhuǎn)錄水平下降了5～20倍。2ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示。加入不同濃度0、25、5、10、20NGMLSTRAIL作用于HEPG2215細(xì)胞后，對(duì)其分泌HBSAG、HBEAG量進(jìn)行連續(xù)5天的觀察，各濃度組檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行方差分析和兩兩比較后提示與不加STRAIL組相比，在25、5、10、20NGML范圍內(nèi)，加入STRAIL后，第1天起HBSAG分泌量即均顯示減少P005。3免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示。10NGMLSTRAIL作用于HEPG2細(xì)胞48小時(shí)后，免疫組化檢測(cè)觀察到細(xì)胞中HBSAG、HBCAG分泌量表達(dá)明顯減少。4LADDER實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，STRAIL誘導(dǎo)HEPG2細(xì)胞已轉(zhuǎn)染乙肝病毒PHBV41凋亡的現(xiàn)象呈濃度依賴(lài)性。加入STRAIL100NGML組作用48小時(shí)后，則可見(jiàn)LADDER條帶，表明HEPG2細(xì)胞已出現(xiàn)可檢測(cè)的凋亡；加入STRAIL200NGML組作用48小時(shí)后，LADDER條帶明顯變強(qiáng)。但是，在上述可以產(chǎn)生HBV復(fù)制及表達(dá)抑制現(xiàn)象的STRAIL濃度10、20NGML組作用48小時(shí)后，HEPG2細(xì)胞未見(jiàn)明顯凋亡。結(jié)論10NGMLSTRAIL作用48小時(shí)后可使轉(zhuǎn)染了PHBV41的HEPG2細(xì)胞分泌HBSAG、HBCAG量減少，HBV復(fù)制中間體DNA和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物35KBMRNA水平降低；HEPG2215細(xì)胞HBV復(fù)制中間體DNA生成減少。而25～20NGML濃度范圍內(nèi)STRAIL作用48小時(shí)后，HEPG2215細(xì)胞分泌HBSAG、HBEAG量下降；且HBSAG下降趨勢(shì)呈STRAIL濃度依賴(lài)性。另由LADDER實(shí)驗(yàn)的結(jié)果觀察到，STRAIL誘導(dǎo)HEPG2細(xì)胞已轉(zhuǎn)染乙肝病毒PHBV41凋亡的現(xiàn)象呈濃度依賴(lài)性。100NGMLSTRAIL作用48小時(shí)后，轉(zhuǎn)染了PHBV41的HEPG2細(xì)胞方可觀察到凋亡現(xiàn)象；小于此劑量則未見(jiàn)凋亡。上述結(jié)果提示，STRAIL可能通過(guò)某種機(jī)制對(duì)HBV復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及表達(dá)的過(guò)程發(fā)揮了抑制作用，在STRAIL25～20NGML濃度范圍內(nèi)，該抑制作用的產(chǎn)生與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡似無(wú)明顯關(guān)系。

簡(jiǎn)介：朊病毒病PRIONDISEASES是一類(lèi)致死性神經(jīng)退行性疾病，是細(xì)胞型朊蛋白CELLULARPRIONPROTEIN，PRPC經(jīng)構(gòu)象轉(zhuǎn)變形成致病型朊蛋白SCRAPIEPRIONPROTEIN，PRPSC的結(jié)果。上世紀(jì)末歐洲瘋牛病的大范圍爆發(fā)及其由牛傳染給人的新型克雅氏病的發(fā)現(xiàn)使得人們“談牛色變”，并迫使歐盟迅速建立朊病毒病檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法。朊病毒病的診斷尤其是早期診斷既能實(shí)現(xiàn)該疾病流行趨勢(shì)的監(jiān)控、確保肉類(lèi)產(chǎn)品、輸血、手術(shù)、血庫(kù)和血漿產(chǎn)品安全，又使得該病在永久性腦損傷發(fā)生前即可進(jìn)行有效治療?；陔貌《静】贵w的傳統(tǒng)檢測(cè)方法因抗體制備復(fù)雜、與靶物的親和力和特異性不高等缺點(diǎn)而無(wú)法應(yīng)用于朊病毒病的早期診斷中。因此簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的朊病毒病早期診斷方法亟待建立。朊病毒蛋白配體因能夠特異性的與朊蛋白相互作用而得到科學(xué)工作者的廣泛關(guān)注。如適配子是一類(lèi)新興的與靶物具有很高的親和力和選擇性的核酸配體，自發(fā)現(xiàn)以來(lái)就因具抗體無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)成為抗體替代物在各個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。本文將配體應(yīng)用于朊病毒病分析中，建立了一系列基于配體的朊病毒蛋白分析方法。主要研究?jī)?nèi)容如下1單標(biāo)記APTAMER分子燈標(biāo)的設(shè)計(jì)及朊蛋白的檢測(cè)中。根據(jù)G堿基在距離適當(dāng)時(shí)能猝滅染料如羅丹明、熒光素等的熒光的性質(zhì)，本文設(shè)計(jì)了基于G堿基猝滅的單標(biāo)記適配子分子燈標(biāo)，成功解決了分子燈標(biāo)雙標(biāo)記的操作復(fù)雜、成本高、適配子親和力下降等問(wèn)題。將所設(shè)計(jì)的適配子分子燈標(biāo)應(yīng)用于朊病毒蛋白檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，在朊病毒蛋白濃度為11447ΜGML時(shí)，熒光強(qiáng)度與蛋白濃度呈現(xiàn)很好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為03ΜGML3Σ。與傳統(tǒng)的抗體檢測(cè)方法相比，本文所建立的方法簡(jiǎn)單、快速且選擇性高。2基于適配子和汞離子的朊蛋白免標(biāo)記檢測(cè)。根據(jù)T堿基能與HG相互作用形成THG2T結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，本文建立了基于適配子和HG2的免標(biāo)記的朊病毒蛋白檢測(cè)方法。研究結(jié)果表明，適配子與HG2作用后形成鏈間雙鏈結(jié)構(gòu)，引起雙鏈嵌入熒光染料SYBERGREENⅠ的熒光顯著增強(qiáng)；但當(dāng)加入朊病毒蛋白后，朊病毒蛋白與適配子的特異性相互作用促使THGT結(jié)構(gòu)打開(kāi)從而雙鏈結(jié)構(gòu)被破壞，SYBERGREENⅠ的熒光降。當(dāng)朊蛋白濃度為1301560NMOLL時(shí)，SYBERGREENⅠ的熒光強(qiáng)度與朊蛋白濃度呈現(xiàn)很好的線性關(guān)系，線性方程為IFF05833842CPRP，相關(guān)系數(shù)R0992。3雙適配子策略在多靶物分析中的應(yīng)用。與單適配子策略相比，雙適配子策略具有更高的選擇性和靈敏度，并能顯著提高分析方法靈敏度。本研究將雙適配子策略應(yīng)用于多靶物分析中并選擇凝血酶、腺苷、朊病毒蛋白PRP三種與疾病相關(guān)的生物分子作為研究對(duì)象。結(jié)果表明，雙適配子策略能夠?qū)崿F(xiàn)同一樣品中凝血酶、腺嘌呤核苷酸和朊蛋白的同時(shí)檢測(cè)，且三種靶物的類(lèi)似物如鳥(niǎo)嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、IGG、蝸牛酶、牛血清白蛋白等對(duì)多靶物測(cè)定不產(chǎn)生干擾，顯示出雙適配子策略在多靶物分析中的高選擇性。4雙適配子分子邏輯門(mén)在朊病毒蛋白構(gòu)象區(qū)分中的應(yīng)用。作為邏輯門(mén)延伸的分子邏輯門(mén)以一個(gè)或多個(gè)復(fù)雜的生物或化學(xué)反應(yīng)過(guò)程為輸入信號(hào)，通過(guò)一定的邏輯運(yùn)算簡(jiǎn)化為單一輸出結(jié)果，例如疾病的診斷通過(guò)分子邏輯門(mén)可簡(jiǎn)化為“患病”或“正常”。本文借助分子邏輯門(mén)的優(yōu)勢(shì)并將雙適配子策略應(yīng)用其中，成功構(gòu)建了能夠進(jìn)行“異或”X和“或”邏輯運(yùn)算的雙適配子分子邏輯門(mén)。結(jié)果表明，PRPC符合“異或”邏輯運(yùn)算而PRPRES符合“或”邏輯運(yùn)算。與傳統(tǒng)的朊病毒蛋白區(qū)分方法相比，本文所構(gòu)建的雙適配子分子邏輯門(mén)具有四個(gè)優(yōu)點(diǎn)1雙適配子分子邏輯門(mén)非常簡(jiǎn)單且能夠應(yīng)用于朊病毒蛋白不同構(gòu)象的區(qū)分；2使用雙適配子策略使得分子邏輯門(mén)具有極高選擇性，無(wú)需分離和純化即可實(shí)現(xiàn)血清中的朊病毒蛋白的區(qū)分；3雙適配子分子邏輯門(mén)的輸入信號(hào)PRP和鹽酸胍和元件MMPSAPT1和QDSAPT2的成本較低，且都是化學(xué)穩(wěn)定分子，而這是構(gòu)建更快、更高效、更小型的計(jì)算器所必需的；4因APT1只在磁微米粒子表面形成單層而不涉及固定構(gòu)象，所以元件之一的MMPSAPT1能夠通過(guò)簡(jiǎn)單的方法進(jìn)行循環(huán)使用。5肝素鈉誘導(dǎo)朊病毒蛋白構(gòu)象變化的光譜分析。粘多糖是一種在細(xì)胞膜表面和溶酶體中均有表達(dá)的朊蛋白配體分子，其在朊病毒病中發(fā)生中所發(fā)揮的作用目前仍存在爭(zhēng)議。本文以肝素鈉作為粘多糖的代表，通過(guò)共振光散射光譜、熒光光譜和圓二色光譜的變化研究了肝素鈉與人重組細(xì)胞型朊蛋白R(shí)HPRPC23231的相互作用。結(jié)果表明，肝素鈉與朊蛋白相互作用后光散射和熒光信號(hào)均得到增強(qiáng)，且當(dāng)RHPRPC23231濃度為0411646ΜGML時(shí)，RHPRPC23231濃度與共振散射光強(qiáng)度呈現(xiàn)很好的線性關(guān)系，線性方程IRLS1838427240CRHPRPC23231，相關(guān)系數(shù)R0999。同時(shí)對(duì)朊蛋白和肝素鈉相互作用體系的熒光壽命表征表明，肝素鈉促使朊蛋白的熒光壽命有一定程度的延長(zhǎng)，而圓二色光譜的表征則表明肝素鈉能誘導(dǎo)朊蛋白從富含Α螺旋的構(gòu)象向富含Β折疊的構(gòu)象轉(zhuǎn)變。本研究基于配體所建立的一系列朊病毒蛋白分析方法，方法簡(jiǎn)單、快速且靈敏，雙適配子邏輯門(mén)方法更因具有超高的靈敏度和選擇性而有望開(kāi)發(fā)成朊病毒病的早期診斷方法。

簡(jiǎn)介：第一部分中國(guó)靜脈吸毒人群HCV感染的流行病學(xué)系統(tǒng)綜述和META分析靜脈吸毒是中國(guó)丙型肝炎病毒傳播的主要方式，然而全國(guó)對(duì)此的報(bào)道和描述存在許多不一致。本文旨在對(duì)中國(guó)靜脈吸毒人群IDUS的流行病學(xué)特征和HCV感染危險(xiǎn)因素的已有相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和綜合，為制定防治計(jì)劃和明確研究方向提供可靠依據(jù)。根據(jù)事先制定的標(biāo)準(zhǔn)，從已發(fā)表文章或報(bào)道中摘錄中國(guó)不同地域、性別、民族和具有不同高危行為注射毒品行為、共用針具、長(zhǎng)期吸毒、不安全性行為和共感染吸毒人群的HCV感染率數(shù)據(jù)進(jìn)行META分析?；诰C合的數(shù)據(jù)及代表性觀點(diǎn)進(jìn)行系統(tǒng)綜述。應(yīng)用近似正態(tài)分布法計(jì)算HCV感染率的95％可信區(qū)間CI。比值比及其95％CI的計(jì)算使用固定或隨機(jī)效應(yīng)模型。發(fā)表偏倚的衡量采用BEGG’S檢驗(yàn)和EGGER’S檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)處理軟件為STATA70和REVMAN42。地圖制作采用EPIINFO343軟件。中國(guó)IDUS的合并感染率為614％95％CI557672％，感染率最高的地區(qū)是湖北、云南、廣西、湖南和新疆。IDUS中男性和女性之間HCV感染率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義153，95％CI080293，P0339。漢族IDUS的HCV感染率低于少數(shù)民族068，95％CI050092，P0012。IDUS感染HCV的風(fēng)險(xiǎn)是非靜脈方式吸毒者的92倍95％CI7031214，P0000，而非靜脈方式吸毒者的感染風(fēng)險(xiǎn)仍然高于一般人群682，95％CI1932411，P0003和其他高危人群如性病門(mén)診病人和醫(yī)務(wù)工作者。共用針具和不共用針具IDUS的HCV感染率差異無(wú)顯著性95％CI074444。人類(lèi)免疫缺陷病HIV共感染能顯著增加IDUS感染HCV的可能1770，95％CI5575629，P0000，而乙型肝炎病毒HBV的感染率在感染或未感染HCV的IDUS中無(wú)顯著差異。在中國(guó)，通過(guò)靜脈吸毒途徑傳播HCVHIV的勢(shì)頭迅猛，政府和疾病預(yù)防控制部門(mén)已采取各種切實(shí)的措施，但效果仍需進(jìn)一步評(píng)價(jià)。第二部分江蘇省部分地區(qū)吸毒人群HCV感染的流行病學(xué)調(diào)查毒品是全世界關(guān)注的問(wèn)題，吸毒不僅造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且傳播丙型肝炎、性病、艾滋病等多種疾病。吸毒人群的不良行為，特別是共用注射針管和稀釋液，為HCV提供了高效的傳播條件。吸毒人群與非主要性伴發(fā)生性行為較普遍，同樣是傳播HCV的危險(xiǎn)因素。為了解江蘇省吸毒人群的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征、吸毒行為、性行為和HCV感染狀況，為制定科學(xué)的防治策略和措施提供依據(jù)，本研究對(duì)江蘇省部分地區(qū)吸毒人群HCV感染現(xiàn)狀進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查。本研究選取南京市公安局強(qiáng)制戒毒所強(qiáng)制戒毒人員587例，無(wú)錫市疾病預(yù)防控制中心美沙酮維持治療MMT門(mén)診收治的吸毒者798例，兩地共計(jì)1385例吸毒者。采用專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的“藥物濫用監(jiān)測(cè)調(diào)查表”進(jìn)行調(diào)查，同時(shí)抽取每名調(diào)查對(duì)象靜脈血3ML檢測(cè)抗HCV抗體。第三部分TAP基因與吸毒人群HCV感染關(guān)系的研究HCV感染時(shí)，細(xì)胞毒性T細(xì)胞CD8T細(xì)胞CTL反應(yīng)起很重要的作用。被感染細(xì)胞胞漿內(nèi)的抗原經(jīng)蛋白酶體降解后，一部分經(jīng)抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體TAP從胞漿轉(zhuǎn)運(yùn)到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中，并在此與MHCⅠ類(lèi)分子結(jié)合，進(jìn)一步被提呈到細(xì)胞表面，引起HCV特異性的CD8T應(yīng)答。TAP蛋白是由TAP1和TAP2蛋白組成的異二聚體，人類(lèi)TAP基因位于第六號(hào)染色體短臂HLAⅡ區(qū)，包括TAP1和TAP2基因，人類(lèi)的部分多態(tài)性位點(diǎn)已被證實(shí)。本研究目的是為了探索TAP基因多態(tài)性與HCV易感性及HCV感染者ALT水平的關(guān)聯(lián)。本研究對(duì)象為南京市強(qiáng)制戒毒所強(qiáng)制戒毒人員587名。根據(jù)抗HCV檢測(cè)結(jié)果分為HCV感染組362人和HCV感染陰性組225人。其中，HCV感染組根據(jù)ALT水平分為ALT異常組ALT≥40UL116人和ALT正常組ALT40UL246人。TAP1基因2個(gè)和TAP2基因4個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)檢測(cè)采用ARMSPCR法。運(yùn)用SASGEIC模塊根據(jù)觀察到位點(diǎn)的基因型推斷TAP1和TAP2基因的基因型。

簡(jiǎn)介：浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文利用IETD連接TRAIL和SMAC的靶向性雙基因溶瘤腺病毒治療癌癥的研究姓名譚淵申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師劉新垣20100101

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒LMP1介導(dǎo)PKC調(diào)控ANNEXINA2絲氨酸磷酸化的分子機(jī)制研究姓名羅威申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)腫瘤病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師曹亞20070501碩士學(xué)位論文中文摘要磷酸化分子機(jī)制及其生物學(xué)功能的研究，有助于進(jìn)一步完善這條新的信號(hào)通路。為此我們確定了“髓病毒LMPL介導(dǎo)PKC調(diào)控ANNEXINA2絲氨酸磷酸化的分子機(jī)制研究”這一課題，采用LMPL陰性的CNEI和LMPI穩(wěn)定表達(dá)的CNEILMPI鼻咽癌細(xì)胞系為主要實(shí)驗(yàn)材料。我們通過(guò)PKCKINASEACTIVITYASSAYKITNONRADIOACTIVE，STRESSGEN特異檢測(cè)經(jīng)過(guò)不同處理細(xì)胞的PKC激酶活性；同時(shí)使用抗絲氨酸抗體進(jìn)行IPWESTERNBLOTTING，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ANNEXINA2絲氨酸磷酸化水平的變化。使用PKC激活劑TPA、阻斷LMPL表達(dá)的脫氧核酶DZL和PKC特異性活性抑制劑發(fā)現(xiàn)，PKC的活化狀態(tài)與ANNEXINA2絲氨酸磷酸化狀態(tài)的變化趨勢(shì)一致，因此得出結(jié)論LMPI確實(shí)可通過(guò)PKC調(diào)控ANNEXINA2絲氨酸磷酸化，進(jìn)一步確定了這條通路的存在。PKC屬于“IP3、DAG信號(hào)系統(tǒng)”，磷脂酰肌醇磷脂酶CPHOSPHOINOSITIDESPECIFICPHOSPHOLIPASEC，PIPLC是PKC的上游關(guān)鍵性激酶，PLC同功酶中以PLCB和PLC_Y的功能最為重要。使用特異針對(duì)PLCB和PLCY的激酶活性抑制劑U73122，并以結(jié)構(gòu)相似但無(wú)活性的小分子U73343和載體DMSO作為對(duì)照，研究PIPLC激酶對(duì)PKC激酶和PKC下游效應(yīng)蛋白ANNEXINA2絲氨酸磷酸化水平的影響。PIPLC活性小分子抑制劑U73122能降低兩種細(xì)胞系的PKC激酶活性，進(jìn)而降低PKC下游蛋白ANNEXINA2的絲氨酸磷酸化水平。證實(shí)了LMPL介導(dǎo)PIPLC調(diào)控PKC激酶活性和ANNEXINA2絲氨酸磷酸化水平。前期實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用特異針對(duì)PKCA和PKCB的抑制劑，證實(shí)了L卿L可能主要通過(guò)PKCQ和PKCB調(diào)控ANNEXINA2絲氨酸磷酸化。我們進(jìn)一步研究PKC亞型對(duì)ANNEXINA2絲氨酸磷酸化的調(diào)控機(jī)制。通過(guò)免疫共沉淀結(jié)合WESTERNBLOTTING，發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)PKCA和PKCB均可直接與ANNEXINA2結(jié)合；而且LMPL對(duì)PKCQ、PKCB的激酶活性都有上調(diào)的作用，但以對(duì)PKCB的調(diào)控更顯著。繼而我們?cè)贑NEI和CNEILMPI細(xì)胞中轉(zhuǎn)染PKCQ、PKC9特異性SHRNA質(zhì)粒，特異且有效地阻斷PKCQ、PKCB的蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在兩種細(xì)胞系中PKCQSHRNA和PKCBSHRNA質(zhì)粒均能有效降低PSERANNEXINA2水平，證實(shí)在CNEI和CNEILMPL細(xì)胞內(nèi)PKCD和PKCB兩種亞型均調(diào)控ANNEXINA2的絲氨酸磷酸化。進(jìn)一步我們進(jìn)行了重組活性激酶PKC和純化的GSTANNEXINA2之間的體外蛋白激酶Ⅱ

簡(jiǎn)介：目的研制早期快速檢測(cè)抗腸道病毒71型（EV71）抗體的ELISA血清學(xué)診斷性試劑盒，評(píng)價(jià)其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法將表達(dá)純化的EV71重組蛋白VP1作為包被抗原，建立EV71型手足口病間接ELISA法的血清學(xué)檢測(cè)方法。通過(guò)與逆轉(zhuǎn)錄（RT）PCR方法、EV71病毒分離試驗(yàn)和微量血清中和試驗(yàn)比較，評(píng)價(jià)抗EV71IGM和抗EV71IGG血清學(xué)診斷方法在EV71型手足口病的診斷價(jià)值，并進(jìn)行臨床考評(píng)。結(jié)果與RTPCR比較，抗EV71IGM敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為83％，85，81和87；抗EV71IGG敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為72，74，68和77。與EV71病毒分離方法比較，抗EV71IGM敏感度、特異度分別為85和97；抗EV71IGG敏感度、特異度分別為75和77。通過(guò)直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，抗EV71IGG抗體滴度和中和抗體滴度呈顯著正相關(guān)（R072，P結(jié)論利用VP1重組蛋白作為包被抗原，成功開(kāi)發(fā)ELISA檢測(cè)人血清抗EV71IGM和抗EV71IGG抗體的診斷試劑盒。

簡(jiǎn)介：目的探討新呼吸道病毒一人類(lèi)偏肺病毒HUMANMETAPNEUMOVIRUS，HMPV在福州地區(qū)感染情況，比較HMPV與傳統(tǒng)呼吸道病毒一呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，RSV所引起呼吸道感染的臨床特征及流行特點(diǎn)。方法2005年11月～2007年4月連續(xù)兩個(gè)冬春季節(jié)福建省立醫(yī)院門(mén)診和住院的部分呼吸道感染患者153例，男91例，女62例；兒童121例，成人32例，年齡最小27天，最大96歲。收集以上患者咽拭子標(biāo)本。用巢式逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTION，RTPCR檢測(cè)HMPV的M基因。用RTPCR檢測(cè)RSV的N基因。部分PCR陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，用DNAMAN軟件對(duì)基因序列分析。同時(shí)分析HMPV和RSV感染患者的臨床資料。結(jié)果1、153例呼吸道標(biāo)本中，HMPV陽(yáng)性率210％32153，其中兒童22例，最小年齡為8個(gè)月，平均年齡為458±335歲；RSV陽(yáng)性率170％26153，其中兒童17例，最小年齡為27天，平均年齡為265±265歲；兒童RSV感染的平均年齡低于HMPVP005。2005年～2006年冬春季節(jié)HMPV陽(yáng)性率為258％，RSV陽(yáng)性率為124％，HMPV陽(yáng)性率高于RSVP005；2006年～2007年冬春季節(jié)HMPV陽(yáng)性率為152％，RSV陽(yáng)性率為304％，HMPV的陽(yáng)性率高于RSV本課題為福建省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目編號(hào)F0310042P005。2、8例HMPV感染患者合并RSV感染，5例成人，3例兒童；5例為女性，3例為男性。3、在32例HMPV陽(yáng)性患者中，患者臨床表現(xiàn)406％咳嗽，217％咽部紅腫，343％發(fā)熱，344％臨床診斷為支氣管炎和肺炎；26例RSV陽(yáng)性患者中650％咳嗽，269％咽部紅腫，192％發(fā)熱，460％臨床診斷為支氣管炎和肺炎。4、分別隨機(jī)抽出的3例HMPV和2例RSV擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸測(cè)序。3例HMPV產(chǎn)物的核苷酸序列完全一致，與GENBANK中文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的HMPVM基因序列達(dá)85％～99％一致，氨基酸的同源性達(dá)93％～100％。對(duì)上述3例HMPV核苷酸序列作基因進(jìn)化樹(shù)分析顯示為單一基因型，均屬于以病毒株BJ1816為代表的A基因型，但發(fā)生了部分變異。2例RSV產(chǎn)物的核苷酸序列完全一致，與GENBANK中文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)中RSV病毒株BJ9149序列號(hào)DQ7805641部分N基因序列97％相似。結(jié)論1、HMPV與RSV均是福州地區(qū)兒童和成年人冬春呼吸道病毒感染的主要病原體。2、HMPV與RSV感染的臨床特征相似。主要癥狀為發(fā)熱、咳嗽、咽部紅腫；主要臨床診斷是支氣管炎或肺炎。3、本研究期間福州地區(qū)發(fā)現(xiàn)的HMPV為單一基因型，均屬于以病毒株BJ1816為代表的A基因型。4、HMPV與RSV可合并感染。

簡(jiǎn)介：目的探討人巨細(xì)胞病毒HCMV感染與非特異性下腰痛NLBP的關(guān)系；HCMV活動(dòng)性感染與NLBP患者腰痛加重病程、疼痛程度和內(nèi)皮素水平的相關(guān)性；走罐療法對(duì)HCMV感染引起的NLBP的作用及其機(jī)制。方法1選擇符合NLBP診斷標(biāo)準(zhǔn)的50例NLBP患者作NLBP組，與該組性別、年齡相似的36例健康正常人作健康對(duì)照組；NLBP組采用走罐治療，隔日一次，一共觀察2周。2NLBP組走罐前50例、后35例及36例健康對(duì)照組采用蘇木素一伊紅染色HE檢測(cè)尿沉渣中HCMV包涵體，采用聚合酶鏈反應(yīng)PCR對(duì)HCMV包涵體進(jìn)行鑒定；通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法ELISA測(cè)定血漿HCMV抗體工GM、IGG；采用放射免疫法檢測(cè)血漿中的內(nèi)皮素水平作為反應(yīng)腰部炎癥程度指標(biāo)。3NLBP患者走罐前、后使用VAS調(diào)查表評(píng)估患者腰痛程度；使用OSW調(diào)查表評(píng)估腰痛對(duì)患者軀體的功能影響結(jié)果1NLBP組走罐前HCMV包涵體、HCMVIGG和IGM抗體陽(yáng)性率分別為12％、66％、22％，ET值為4738±881，明顯高于正常對(duì)照組PO05；IGG抗體陽(yáng)性例數(shù)分別為26例、9例；內(nèi)皮素水平分別為4716±8883497±510，T值為947，POOL。結(jié)論1NLBP患者腰痛癥狀可能與HCMV活動(dòng)性感染有關(guān)。2本研究發(fā)現(xiàn)成年人HCMV活動(dòng)性感染尿標(biāo)本中病毒包涵體形態(tài)不典型。3走罐治療對(duì)活動(dòng)性HCMV感染引起NLBP患者腰痛癥狀有治療效果。