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簡介：烏魯木齊某三甲醫(yī)院近3年兒童麻疹病毒感染調(diào)查分析研究生王穎指導(dǎo)教師孫荷教授專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域／啤哮研究方向醫(yī)學(xué)病毒學(xué)2015年3月論文獨創(chuàng)性說明本人申明所呈交的學(xué)位論文是在我個人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名縫簽字日期導(dǎo)師簽名簽字日期關(guān)于論文使用授權(quán)的說明L本人完全了解學(xué)校關(guān)于保留、使用學(xué)位論文的各項規(guī)定，列筮選擇“同意／不同意”以下事項1學(xué)校有權(quán)保留本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文；2學(xué)校有權(quán)將本人的學(xué)位論文提交至清華大學(xué)“中國學(xué)術(shù)期TJJ光盤版電子雜志社”用于出版和編入CNKI中國知識資源總庫或其他同類數(shù)據(jù)庫，傳播本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。學(xué)位論文作者簽名邀簽字日期導(dǎo)師簽名簽字日期盞

簡介：研究背景和目的經(jīng)皮冠狀動脈介入治療PCI術(shù)后再狹窄RS與PCI發(fā)展相伴相隨，是當(dāng)今心血管病界的重要課題。大量研究表明，血管平滑肌細胞通過一系列分子機制發(fā)生表型轉(zhuǎn)換，丟失其分化標(biāo)志物，并獲得增殖、遷移的能力，是新生內(nèi)膜形成及RS發(fā)生的病理基礎(chǔ)。近年來，大量抗增殖藥物，如雷帕霉素、紫杉醇等，廣泛用于臨床再狹窄的預(yù)防，在一定程度上降低了RS的發(fā)生。但是，這類藥物都不可避免地抑制了內(nèi)皮細胞的修復(fù)，從而引發(fā)了很多新的問題，如遲發(fā)性血栓形成，延遲內(nèi)皮化等。因此，有必要尋找新的藥物以選擇性地抑制平滑肌細胞增殖，而不影響內(nèi)皮化。E1A激活基因阻遏子CREG是新近發(fā)現(xiàn)的一個細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因，它由220個氨基酸殘基構(gòu)成，有3個糖基化位點。CRERG在單核細胞、造血祖細胞和VSMC等多種細胞中廣泛表達并促進細胞成熟分化，抑制細胞增殖。本實驗室前期研究表明，在體外培養(yǎng)的平滑肌細胞從合成表型向收縮表型轉(zhuǎn)化的過程中，CREG表達上調(diào)，而CREG過表達也可以促進平滑肌細胞從合成表型向收縮表型轉(zhuǎn)化，因此，CREG有可能成為抑制PCI術(shù)后再狹窄的有效藥物。本研究以兔頸動脈球囊損傷模型為研究對象，應(yīng)用腺病毒載體介導(dǎo)CREG基因在損傷血管中大量表達并觀察CREG表達對VSMC表型轉(zhuǎn)換的調(diào)控及對損傷血管內(nèi)膜增生的影響，以期深入探討CREG基因在PCI術(shù)后再狹窄發(fā)生中的作用。材料和方法以KPNI和XHOI酶切位點將CREGCDNA全長亞克隆至PSHUTTLECMV穿梭質(zhì)粒中，以菌內(nèi)同源重組的方法構(gòu)建腺病毒重組子，在293細胞中包裝產(chǎn)生CREG重組腺病毒。以CREG重組腺病毒及GFP對照腺病毒感染人VSMC細胞，應(yīng)用免疫熒光染色、WESTERNBLOT方法檢測CREG和平滑肌分化標(biāo)志蛋白SMΑACTIN、SMMHC表達，檢測細胞增殖指標(biāo)BRDU陽性細胞比例，以探討CREG對VSMC分化的影響。應(yīng)用雄性日本大耳白兔60只，建立頸動脈球囊拉傷模型，隨機分為3組，分別將含有ADCREG、ADGFP的病毒液或PBS1ML，注入損傷動脈段內(nèi)孵育30MIN。各組動物于術(shù)后3D、7D、14D和28D行雙側(cè)頸總動脈造影，觀察靶血管血流情況。術(shù)后經(jīng)靜脈注射50MG溴脫氧尿嘧啶，3小時后處死，取出損傷動脈及對側(cè)未損傷的動脈。HE染色觀察不同時間點血管SMC的移行、增殖及內(nèi)膜、中膜增厚情況。免疫組化及WESTERNBLOT分析CREG及平滑肌細胞標(biāo)志物SMΑACTIN、SMMHC的表達。研究結(jié)果成功構(gòu)建重組腺病毒載體ADCREG；體外研究發(fā)現(xiàn)，腺病毒能夠高效感染人VSMC細胞，使外源性基因在被目的細胞內(nèi)高效表達。CREG轉(zhuǎn)染能促進VSMC分化，抑制VSMC增殖。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，在兔頸動脈球囊損傷修復(fù)過程中CREG表達與平滑肌細胞分化狀態(tài)相關(guān)，免疫組織化學(xué)和WESTERNBLOT結(jié)果顯示，CREG在正常VSMC中高度表達，在球囊損傷后3D，血管中CREG顯著下降，到第7D表達開始恢復(fù)，在此后的14D，28D一直保持高表達狀態(tài)。VSMC分化標(biāo)記物SMΑACTIN和MHC在球囊損傷兔頸動脈中的表達趨勢與CREG相似，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示SMΑACTIN和MHC在正常的VSMC中高度表達，而在球囊損傷后3D和7D表達顯著降低，球囊損傷后14D后表達逐漸恢復(fù)到正常水平。而細胞增殖指標(biāo)BRDU染色則表現(xiàn)出相反的趨勢，在正常動脈中BRDU陽性細胞很少，在損傷后3D和7DBRDU陽性細胞大量出現(xiàn)，至14D再次降低到接近未損傷水平。形態(tài)學(xué)分析結(jié)果顯示，兔頸動脈球囊損傷后有明顯的新生內(nèi)膜形成，ADCREG轉(zhuǎn)染顯著減少新生內(nèi)膜形成，與對照組和ADGFP組相比，ADCREG組的內(nèi)膜面積在動脈球囊損傷后28D降低了約50％，而IM分別也降低了50％以上。雙側(cè)頸動脈造影顯示，ADCREG組術(shù)后28D的最小管腔內(nèi)徑明顯高于鹽水對照組和ADGFP組，而管腔狹窄率低于鹽水對照組和ADGFP組。以上數(shù)據(jù)都說明，CREG轉(zhuǎn)染可明顯抑制頸動脈損傷后的新生內(nèi)膜增生，防止再狹窄發(fā)生。免疫組織化學(xué)染色顯示，對照組和ADGFP組在損傷后3D和7D可見大量BRDU陽性細胞，而ADCREG組BRDU陽性細胞明顯減少。與BRDU染色結(jié)果相反，在血管損傷后7D，ADCREG治療組血管SMΑACTIN，MHC表達水平顯著高于生理鹽水對照組和ADGFP組。這些結(jié)果表明，在動脈損傷修復(fù)的過程中，CREG能夠促使平滑肌細胞保持在穩(wěn)定的分化狀態(tài)。免疫組織化學(xué)CD31染色表明，球囊損傷后14D，損傷動脈新生內(nèi)膜表面內(nèi)皮細胞覆蓋不完全，ADCREG組與對照組和ADGFP組相比，內(nèi)皮細胞覆蓋率各組間無顯著性差異；球囊損傷后28D，CD31染色顯示各組動脈內(nèi)皮覆蓋完全，各組間無差別。以上結(jié)果表明，CREG轉(zhuǎn)染在抑制VSMC增殖的同時并不抑制內(nèi)皮細胞的增殖。結(jié)論在血管急性損傷后進行CREG轉(zhuǎn)染，能夠抑制細胞增殖，促進細胞分化，從而抑制新生內(nèi)膜的形成。CREG轉(zhuǎn)染對于PCI術(shù)后再狹窄的預(yù)防有重要的研究價值。

簡介：CLASSIFIEDINDEX855CONFIDENTIALYES／NONOCODE10224NO．110041DISSERTATIONFORTHEDOCTORALDEGREECONSTRUCTIONANDIMMUNOLOGICALEXPERIMENTSTUDYOFVIRUSLIKEPARTICLESVACCINEANDDNAVACCINEOFEEEV／WEEVCANDIDATEMAJINZHU’’。XIAXIANZHUSUPERVLSORLANZLAUDEGREECATEGORYDOCTOROFAGRICULTURECOLLEGECOLLEGEOFVETERINARYMEDICINEFIRSTLEVELDISCIPLINEVETERINARYSCIENCESECONDLE。VELDISCIPLINEPREVENTIVEVETERINARYSCIENCEHARBINCHINAJUNE2014東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)博士學(xué)位論文3．5．1核酸疫苗存在的優(yōu)點????????????????????????233．5．2核酸疫苗存在的問題????????????????????????．243．6核酸疫苗的展望????????????????????????????244實驗一、EEEV／WEEV假病毒中和試驗的建立??????????????????．264．1材料???????????????????????????????????????????．264．1．1主要試劑?????????????????????????????264．1．2細菌、質(zhì)粒、細胞?????????????????????????264．1．3設(shè)備和儀器????????????????????????????264．2方法???????????????????????????????????????????．274．2．1重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定???????????????????????一274．2．2假病毒的包裝與鑒定????????????????????????294．2．3假病毒感染滴度的測定???????????????????????．304．2．4假病毒感染的抑制實驗???????????????????????．304．2．5假病毒中和試驗的建立???????????????????????．304．3結(jié)果???????????????????????????????????????????．304．3．1目的基因擴增結(jié)果?????????????????????????304．3．2重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果????????????????????????3243．3假病毒的獲得與鑒定????????????????????????324．3．4假病毒感染滴度的測定???????????????????????．334．3．5假病毒感染的抑制實驗??????．?????????????????．344．3．6假病毒中和試驗的建立???????????????????????．374．4討論????．?．??????????????????????．??????????????．．．374．5小結(jié)??????????????????????????????????????一385實驗二、EEEV病毒樣顆粒疫苗的構(gòu)建、鑒定與實驗免疫研究???????????395．1材料???????????????????????????????????????????．395．1．1菌種、質(zhì)粒和細胞?????????????????????????．395．1．2主要試劑?????????????????????????????395．1．3家蠶細胞培養(yǎng)基??????????????????????????395．1．4設(shè)備和儀器????????????????????????????405．1，5實驗動物?????????????????????????????405．2方法???????????????????????????????????????????．405．2．1重組桿狀病毒基因組的獲得?????????????????????．405．2．2細胞轉(zhuǎn)染與重組桿狀病毒的獲得???????????????????．415．2．3病毒樣顆粒的表達與鑒定??????????????????????．4芝5．2．4動物免疫?????????????????????????????425．2，5免疫檢測?????????????????????????????43II

簡介：汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的腺病毒介導(dǎo)的人干擾素干擾素?；蛑委熁蛑委熞认侔┑膶嶒炑芯恳认侔┑膶嶒炑芯垦芯可x發(fā)君導(dǎo)師師陳瑋瑩陳瑋瑩副教授副教授溫博貴溫博貴教授專業(yè)業(yè)生物化學(xué)與分生物化學(xué)與分子生物學(xué)子生物學(xué)研究方向研究方向腫瘤分子生物學(xué)腫瘤分子生物學(xué)培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院入學(xué)時間入學(xué)時間20042004年9月論文完成時間論文完成時間20072007年5月汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本人的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中作了明確說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。作者簽名日期學(xué)位論文知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬說明學(xué)位論文知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬說明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的論文，知識產(chǎn)權(quán)歸屬學(xué)校。學(xué)校享有以任何方式發(fā)表、復(fù)制、公開閱覽、借閱以及申請專利等權(quán)利。本人離校后發(fā)表或使用學(xué)位論文或與該論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果，署名單位仍然為汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院。論文作者簽名日期年月日導(dǎo)師簽名日期年月日

簡介：貴陽醫(yī)學(xué)院2011屆研究生碩士學(xué)位論文0中國圖書資料分類法單位代碼10660分類號R7433學(xué)號S080211貴陽醫(yī)學(xué)院貴陽醫(yī)學(xué)院20112011屆碩士學(xué)位論文屆碩士學(xué)位論文臨床論文部分臨床論文部分原發(fā)性低血壓和體位性低血壓對原發(fā)性低血壓和體位性低血壓對老年人認(rèn)知功能的影響老年人認(rèn)知功能的影響研究生黃海俠導(dǎo)師劉芳教授劉偉民教授年級2008級專業(yè)神經(jīng)病學(xué)2011年5月30日貴陽醫(yī)學(xué)院2011屆研究生碩士學(xué)位論文2原發(fā)性原發(fā)性低血壓、低血壓、體位性低血壓對老年人認(rèn)知功能的影響體位性低血壓對老年人認(rèn)知功能的影響專業(yè)神經(jīng)病學(xué)研究生黃海俠導(dǎo)師劉芳、劉偉民教授【摘要】【摘要】目的目的通過對患有原發(fā)性低血壓和體位性低血壓的老年人進行蒙特利爾認(rèn)知評估量表（MONTREALCOGNITIVEASSESSMENT，MOCA）的檢查，評估原發(fā)性低血壓、體位性低血壓（THOSTATICHYPOTENSION，OH）與老年人認(rèn)知功能損害的相關(guān)關(guān)系，為尋找癡呆病因及臨床上防治原發(fā)性低血壓及體位性低血壓所導(dǎo)致的認(rèn)知障礙提供重要參考依據(jù)。方法方法本研究通過對貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收集的正常血壓、高血壓、原發(fā)性低血壓、體位性低血壓的174例老年人進行MOCA、簡易智能精神狀態(tài)量表（MINIMENTALSTATEEXAM，MMSE）檢查，并比較其頭顱核磁共振成像（MAGENTICRESONANCEIMAGING，MRI）、頸部血管超聲結(jié)果。結(jié)果結(jié)果1、高血壓、原發(fā)性低血壓、體位性低血壓組MOCA、MMSE評分均低于正常血壓組，而認(rèn)知功能下降率高于正常血壓組（P005），三組的MOCA延遲回憶、語言、抽象三個子項的評分均低于正常血壓組（P005），三組間MOCA、MMSE評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）。2、MOCA與MMSE總分有高度相關(guān)性R0922（P005），MOCA檢測認(rèn)知功能下降率高于MMSE（P005）。3、高血壓、體位性低血壓組頭顱MRI異常率均高于正常血壓、原發(fā)性低血壓組（P＜005），高血壓與體位性低血壓組、原發(fā)性低血壓與正常血壓組之間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005）。4、高血壓組頸部血管超聲異常率高于正常血壓、原發(fā)性低血壓、體位性低血壓組（P＜005），后三組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005）。5、體位性低血壓的變性病組MOCA評分低于正常血壓的變性病組（P＜005）。結(jié)論結(jié)論體位性低血壓、原發(fā)性低血壓的老年人認(rèn)知功能較正常血壓者下降，以延遲回憶、語言、抽象損害為主。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞低血壓體位性低血壓蒙特利爾認(rèn)知評估量表輕度認(rèn)知認(rèn)知功能障礙

簡介：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文博士學(xué)位論文論文題目學(xué)校代碼10023學(xué)號B2007052雙鏈腺相關(guān)病毒載體構(gòu)建及單鏈腺相關(guān)病毒介導(dǎo)外源性血管生成素一1基因治療大鼠腦缺血的療效評價THECONSTMCTIONOFDOUBLE．STMDEDADENO．ASSOCIATEDVILUSVECTORANDTHEPILOTSTLLDYOFSIN91ESTRANDEDADENOASSOCIATEDVIMSMEDIATEDGENEOVEREXPRESSIONOFANGIOPOIETIN1INRATCEREBRALISCHEMIAMODEL所姓院名中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院趙英杰指導(dǎo)教師王任直教授導(dǎo)師小組王任直教授馬文斌教授學(xué)科專業(yè)神經(jīng)外科學(xué)研究方向缺血性腦血管疾病的基因治療完成日期二零壹零年四月中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院英文縮寫刪ANG1ANOVAAOIAPSAQP4BBBBSACBFCCACDNACICMVCNSCSFCVDDAB帆0N。EB英文全稱縮略詞ADENO．ASSOCIATEDVIMSANGIOPOIETIN1ANALYSISOFV撕ANCEAREA0FINTEREST鋤MONIUMPERSULF亂EAQU印ORIN4BRAINBLOODBARTIERBOVINESELLLMALBUMINCEREBRALBLOODFLOWCOMMONCAR．OTIDARTERYCOMPLEMEI她巧DEOX徊BONUCLEICCEREBRALINF函RCTIONCYTOMEGALOVIMSCENTRALNERVOUSSYST鋤CEREBROSPINALFLUIDCEREBRALVASCULARDISEASEDIAMINOBENZIDINEDOUBLE．S仃ANDEDADENO．ASSOCIATEDEVANSBLUE．3．

簡介：點擊查看更多腺病毒介導(dǎo)的BMP-2基因轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合納米羥基磷灰石體外構(gòu)建組織工程骨的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文VEGFASIRNA和CXCR4SIRNA慢病毒載體的構(gòu)建及對卵巢癌的基因治療姓名康楷申請學(xué)位級別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師胡麗娜20080501重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文結(jié)果1成功構(gòu)建了抗VEGF和CXCR4的SIRNA慢病毒表達載體系統(tǒng)，測序證實序列正確。2體外實驗中，通過REALTIMEPCR和WESTERNBLOT，在人卵巢癌細胞株SW626中，VEGF和CXCR4慢病毒表達載體能明顯抑制靶基因的表達；CCK8顯示，當(dāng)VEGF受抑制后，腫瘤細胞增殖受抑；重建基底膜實驗證實CXCR4表達受抑后細胞體外侵襲能力顯著降低。3體內(nèi)實驗中，VEGF和CXCR4被抑制后可減緩瘤體增長，腫瘤組織MVD下降，細胞凋亡增加。結(jié)論1針對VEGF和CXCR4基因的SII塒A慢病毒表達載體能夠顯著抑制靶基因的表達2當(dāng)VEGF受抑制后，腫瘤細胞增殖受抑，MVD降低，腫瘤體積顯著減小，細胞凋亡增加。3當(dāng)CXCR4受抑后，腫瘤細胞侵潤能力明顯下降，腫瘤組織增殖受抑，MVD下降，凋亡增加。關(guān)鍵詞RNA干擾，VEGF，CXCR4，慢病毒，卵巢癌

簡介：丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV是一種正鏈小RNA病毒，由HCV感染引起的丙型肝炎是一種常見的慢性肝臟疾病，6080％左右的持續(xù)感染者最終會發(fā)展成肝硬化或肝癌。干擾素ΑIFNΑ可用于慢性丙型肝炎治療，IFNΑ的臨床應(yīng)用可使得病人血清和肝臟中的HCVRNA持續(xù)清除，達到對慢性感染的治愈效果。宿主細胞是HCV生命過程的載體，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)很多宿主細胞因子能夠參與到HCV的生活周期中去。由于HCV是一種RNA病毒，這些細胞因子中很大一部分是RNA結(jié)合蛋白（RNABINDINGPROTEIN，RBP），這些RBP能與病毒基因組上的順勢元件結(jié)合而發(fā)揮對病毒的效應(yīng)。POLYCBINDINGPROTEIN2PCBP2，HNRNPE2或ΑCP2是屬于HNRNPE家族的一種RBP，可以特異性地與單鏈POLYC富含區(qū)結(jié)合。在正常的細胞功能中，PCBP2可參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、蛋白相互作用及MIRNA的誘騙等機制中，發(fā)揮其細胞中對MRNA的穩(wěn)定性影響和調(diào)控翻譯的作用。PCBP2還可參與到許多RNA病毒的復(fù)制和翻譯過程，包括脊髓灰質(zhì)炎病毒POLIOVIRUS、柯薩奇病毒COXSACKIEVIRUS、鼻病毒RHINOVIRUS等，這些RNA病毒都是與HCV結(jié)構(gòu)相似的微小核糖核酸病毒。研究證實PCBP2能結(jié)合HCV基因組的5’UTR和3’UTR區(qū)域，提示PCBP2和HCV之間也有著某種聯(lián)系，然而PCBP2對HCV生命過程所起的作用還并不確切。HCV復(fù)制子（REPLICON）細胞模型的建立對HCV的體內(nèi)分子機制研究起到了重要的推動作用，該系統(tǒng)中遺傳修飾后的HCVRNAREPLICON可在人肝癌細胞系中有效地擴增，從而可反映病毒在細胞中的生命活動。在我們的初期研究中發(fā)現(xiàn)PCBP2不同于其它與HCV有相互作用的RBP，在HCV復(fù)制子細胞R1B中表達下調(diào)而不是上調(diào)。通過對HCVNS蛋白在野生型HUH751細胞中的異位表達發(fā)現(xiàn)，HCVNS4B和NS5A蛋白的表達能顯著地抑制PCBP2的表達水平，REALTIMEPCR結(jié)果表明NS4B對PCBP2的抑制可能發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平，而NS5A則可能在轉(zhuǎn)錄水平抑制PCBP2的表達。R1B細胞中對PCBP2的抑制可以通過IFNΑ的作用而回復(fù)。我們用IFNΑ處理R1B細胞后發(fā)現(xiàn)HCV的RNA和蛋白表達都受到抑制，而PCBP2的表達則逐漸回復(fù)，具有劑量依賴性，并且在IFNΑ治愈的R1B細胞中PCBP2的表達不再回調(diào)。這種回復(fù)作用在其它肝臟細胞系中沒有發(fā)生，進一步說明PCBP2在R1B細胞中的抑制是由于HCVNS蛋白造成的。為了研究PCBP2對HCV的真正作用機制，我們在R1B細胞中分別過表達和敲低了PCBP2，結(jié)果表明過表達和敲低PCBP2對HCV的復(fù)制都沒有顯著影響。有意思的是，我們在過表達PCBP2的細胞中發(fā)現(xiàn)IFNΑ對HCV的抑制活性顯著增強，同時對IFNA和利巴韋林聯(lián)合作用也有相同的效應(yīng)，而對利巴韋林單獨作用沒有影響。在PCBP2敲低的細胞中也有相應(yīng)的效應(yīng)。這些結(jié)果證實PCBP2能夠增強IFNA的作用而對利巴韋林無效。PCBP2對IFNA的作用機制研究中，我們利用RNA免疫沉淀RNAIMMUNOPRECIPITATION技術(shù)來研究IFNΑ信號通路分子中是否有PCBP2的作用底物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT1和STAT2的MRNA能富集在PCBP2的蛋白RNA復(fù)合體中，與陽性底物ΑGLOBIN相當(dāng)，表明STAT1和STAT2的MRNA可能是PCBP2的靶MRNA，且PCBP2對STAT1和STAT2MRNA的結(jié)合可導(dǎo)致其總蛋白及其磷酸化水平的上調(diào)。進一步通過RNAPULLDOWN技術(shù)，在STAT1和STAT2MRNA的3’UTR中，分別找到了PCBP2的結(jié)合位點，其結(jié)合區(qū)域中都含有富含POLYC的片段以及PCBP2識別的核心序列。通過REALTIMEPCR和RNA酶保護試驗RNASEPROTECTIONASSAY，RPA，我們進一步證實PCBP2能上調(diào)STAT1和STAT2的MRNA水平。其機制是結(jié)合MRNA后，可增強兩者MRNA的穩(wěn)定性，大大延長其半衰期。STAT1和STAT2MRNA的穩(wěn)定性延長使得兩者總蛋白的表達上調(diào)，從而增強IFNΑ對HCV的抑制活性。本研究揭示了PCBP2對IFNΑ的抗HCV活性中起著重要的作用，并有可能指導(dǎo)臨床上使用IFNΑ對HCV感染的個體治療。同時我們揭示了RNA結(jié)合蛋白與HCV病毒之間一種相互作用的新機制，即通過增強IFNΑ的效應(yīng)而不是直接作用于病毒基因組，這些對于我們更好地理解HCV在體內(nèi)的分子機制有著重要的啟示。

簡介：目的本研究制備攜帶人凝血因子VIIIHFVIII基因的重組慢病毒，并肌肉注射到正常大鼠股四頭肌，觀察體內(nèi)的表達。方法將含HFVIII基因的慢病毒載體與包裝質(zhì)粒CMV△R874、包膜質(zhì)粒VSVG轉(zhuǎn)染產(chǎn)毒細胞293T細胞，以制備包含EPOCDNA的重組慢病毒。將制備好的重組慢病毒感染HELA細胞，檢測培養(yǎng)上清中HFVIII的表達量；直接肌肉注射正常大鼠后，檢測血漿中HFVIII抗原濃度和抗體。取注射部位組織中提取DNA進行PCR。結(jié)果48H后取上清測定HFVIII抗原高表達07±01NGML。將制備好的重組慢病毒110IUML直接肌肉注射到正常大鼠后血清中可檢測到高水平的HFVIII抗原，最高達331±01NGML，持續(xù)時間長達20周。血清HFVIII抗體第1周最高達1331±56BUML，持續(xù)到實驗期間。除在注射部位組織外，其它主要臟器均未觀察到HFVIII基因的存在。結(jié)論制備的重組慢病毒在培養(yǎng)細胞中高水平表達，肌肉注射后在正常大鼠體內(nèi)能構(gòu)建并長時間穩(wěn)定表達，為血友病A基因治療提供理論和實驗依據(jù)。

簡介：目的腺病毒重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2ADRHBMP2轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細胞BMSCS復(fù)合同種異體脫鈣骨基質(zhì)構(gòu)建復(fù)合材料的生物相容性觀察。方法復(fù)蘇保存于液氮罐中的骨髓間充質(zhì)干細胞BMSCS，取相同代數(shù)細胞運用腺病毒重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2ADRHBMP2進行轉(zhuǎn)染，進行轉(zhuǎn)染后免疫組化觀察轉(zhuǎn)染后骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BMP2表達情況。BMSCS轉(zhuǎn)染48H后與同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)復(fù)合，掃描電鏡觀察脫鈣骨基質(zhì)上細胞生長、貼附情況，MTT法檢測細胞增殖情況。結(jié)果腺病毒轉(zhuǎn)染48H后，BMSCS在熒光顯微鏡觀察下，轉(zhuǎn)染后的細胞狀態(tài)較好，鏡下可見綠色熒光表達，肉眼觀察轉(zhuǎn)染效率達到95％以上，免疫組化實驗檢測結(jié)果表明（ADRHBMP2）轉(zhuǎn)染后棕黃色顆粒性染色可以在細胞胞漿中觀察到，呈陽性表達，未轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)BMP2蛋白含量較少。細胞復(fù)合同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)體外培養(yǎng)48H后，倒置顯微鏡下可見脫鈣骨基質(zhì)材料具有良好孔隙與三維結(jié)構(gòu)，熒光顯微鏡下ADEGFP轉(zhuǎn)染細胞與脫鈣骨基質(zhì)復(fù)合組可觀察到支架材料上細胞正常生長發(fā)出明亮綠色熒光。細胞計數(shù)法檢測，細胞與脫鈣骨基質(zhì)復(fù)合6H后，細胞粘附率約（70±37）％復(fù)合12H后粘附率為（77±46）％復(fù)合24H后粘附率為（80±38）％。掃描電鏡下觀察可見脫鈣骨基質(zhì)呈現(xiàn)疏松多孔結(jié)構(gòu)，孔徑大小不一，形狀不規(guī)則并相互交通。脫鈣骨基質(zhì)的孔隙直徑為215±86ΜM，孔隙率達76±351％。體外培養(yǎng)7天后掃描電鏡觀察細胞與脫鈣骨基質(zhì)材料復(fù)合可見脫鈣骨表面的細胞粘連成片，細胞布滿孔隙，呈伸展?fàn)?、立體狀生長。MTT檢測結(jié)果顯示，種植于脫鈣骨基質(zhì)上的轉(zhuǎn)染后細胞增殖情況正常，與正常轉(zhuǎn)染后細胞增殖情況無明顯差異P＞005。結(jié)論同種異體脫鈣骨基質(zhì)具有良好的三維立體結(jié)構(gòu)。ADRHBMP2能夠?qū)MSCS成功、高效的轉(zhuǎn)染。ADBMP2轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞與同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)的生物相容性良好。

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文慢病毒導(dǎo)入的CDC25B3SIRNA對胰腺癌細胞CFPAC1生物學(xué)行為的影響姓名楊正平申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師湯文浩石欣20080501EFFECTSOFLENTIVIRALDELIVEREDCDC2583SIRNAONBIOLOGICALBEHAVIOROFHUMANPANCREATICCANCERCELLLINECFPAC1SCHOOLOFCLINICALMEDICINESOUTHEASTUNIVERSITYGRADUATEYANGZHENGPINGSUPERVISORTANGWENHAOANDSHIXINABSTRACTOBJECTIVEBYTHEUSEOFRECOMBINANTLENTIVIRUSTHATSTABLYSUPPRESSCDC2583INHUMANPANCREATICCANCERCFPAC一1CELLS，TOESTABLISHCFPACLCELLLINESDEFICIENTINCDC2583ANDTOINVESTIGATETHEROLEOFTHISGENEMETHODSAFTERCFPACLCELLSWERETRANSDUCEDWITHRECOMBINANTLENTIVIRUSPRODUCINGCDC2583SIRNA，STABLYTANSDUCEDCELLSWITHGREENFLUORESCENTPROTEINGFPWERESELECTEDBYFLOWCYTOMETERFCMNEMRNAANDPROTEINEXPRESSIONOFCDC2583WASEXAMINEDBYRTPCRANDWESTEMBLOTANALYSIS111EEFFECTOFTHELENTIVIRUSONTHECELLPROLIFERATION，CELLCYCLE，COLONYFORMINGMIGRATIONANDINVASIONABILITYWASANALYZEDBYMTTMETHOD，F(xiàn)CM，PLATECOLONYFORMINGASSAYANDTRANSWELLMIGRATIONANDINVASIONASSAYRESPECTIVELYRESULTSCDC2583SILU寸AKNOCKEDDOWNCDC2583EXPRESSIONINCFPACLCELLSOBVIOUSLYTHESILENCEEFFICIENCYOFSIRNATRANSDUCEDBYRECOMBINANTLENTIVIRUSWASVERYHIGHPROLIFERATIONCOLONYFORMING，MIGRATIONANDINVASIONABILITYOFHUMANPANCREATICCANCERCELLLINECFPAC一1WERESIGNIFICANTLYINCREASED，WHILECELLCYCLEWASNOTAFFECTEDCONCLUSIONOURRESEARCHFOUNDTHATCDC2583PLAYEDANIMPORTANTROLEINCELLPROLIFERATIONCOLONYFORMING，MIGRATIONANDINVASIONOFPANCREATICCANCERANDPROVIDESEXPERIMENTALEVIDENCESFORTARGETINGCDC2583INGENETHERAPYAGAINSTPANCREATICCANCERKEYWORDSPANCREATICCANCER；CDC2583；LENTIVIMS；SIRNA；BIOLOGICALBEHAVIORIL

簡介：點擊查看更多NF-κB RNA適體重組腺病毒的制備及其體外生物學(xué)活性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：背景哮喘是全球范圍的慢性疾病約有3億患者正在遭受疾病帶來的危害且在近20年其發(fā)病率不斷的增加尤其是在兒童。目前哮喘尚不能根治其治療目標(biāo)在于達到并長期維持臨床癥狀的控制。全球關(guān)于支氣管哮喘控制現(xiàn)狀的AIRASTHMAINSIGHTSREALITY系列調(diào)查發(fā)現(xiàn)在西歐哮喘患者達到全球哮喘防治創(chuàng)議GINA所定義的哮喘控制的比例僅5％在亞太地區(qū)采用吸入型糖皮質(zhì)激素治療的哮喘患者的比例為9而在中國北京、上海、廣州的調(diào)查則僅6。新近在8個歐盟國家完成的另一項關(guān)于已采用吸入激素或聯(lián)合治療作為維持治療的哮喘患者控制現(xiàn)狀和疾病認(rèn)知程度的調(diào)查INSPIRE發(fā)現(xiàn)74的患者仍需每日使用緩解藥物依據(jù)ACQ評分僅30的患者達到良好控制47的患者一年內(nèi)至少一次需要醫(yī)療干預(yù)并且患者高估了哮喘的控制水平。但在另一項全球多中心臨床研究GOAL發(fā)現(xiàn)按照指南進行分級和維持治療在一年的研究期間近50的患者可以達到完全控制近80的患者可以達到良好控制。如此巨大的反差則提示哮喘長期管理的重要性。調(diào)查意義目前還沒有關(guān)于長沙哮喘患者疾病控制情況的系統(tǒng)調(diào)查與分析本項調(diào)查工作的重要意義在于1了解長沙市城區(qū)哮喘患者疾病控制現(xiàn)狀和對疾病的認(rèn)知程度對近年推廣規(guī)范化治療的效果進行評估并為進一步開展哮喘防治工作提供參考依據(jù)2本次調(diào)查的資料可作為基線資料對今后的再評估和隨訪有重要價值。3本研究可為今后開展大規(guī)模的流行病調(diào)查和防治工作積累經(jīng)驗。調(diào)查對象與方法為了解長沙城區(qū)哮喘患者疾病控制的情況和對疾病的認(rèn)知程度進行問卷調(diào)查。選擇2007年7月1日2008年3月30日在中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院、中南大學(xué)湘雅醫(yī)院、湖南省人民醫(yī)院、湖南省老年病醫(yī)院就診的門診患者符合2003年中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)年齡≥14歲診斷哮喘一個月以上在本市城區(qū)居住一年以上的哮喘患者。通過問卷采用醫(yī)生與患者面對面的調(diào)查方法。參照AIR、INSPIRE、哮喘控制測試ACT等項研究結(jié)合我國實際情況補充和增加相關(guān)內(nèi)容設(shè)計完成調(diào)查表主要內(nèi)容包括一般資料、哮喘控制情況、藥物治療情況、哮喘發(fā)作征兆的感知和自我管理。完成問卷共148份。結(jié)果調(diào)查患者的平均年齡為487±1731478歲男女比例為11236681小學(xué)以上文化程度的患者占892。有吸煙史的占284。平均病程146±161年。有各種社會保障的患者占683。哮喘控制情況257的患者在過去的一年內(nèi)曾因哮喘加重而住院385的患者在過去的一年內(nèi)曾因哮喘加重而看過急診47例在職人員中11例234有過請假誤工15例學(xué)生中有11例733曾因哮喘加重而請假誤學(xué)。按照控制水平分級調(diào)查患者中達到控制的占279部分控制的占397未控制的占324。調(diào)查患者中只有82的患者使用過峰流速儀在使用者中375的患者每天使用峰流速儀正在使用峰流速儀的患者中有167的患者進行監(jiān)測數(shù)值的記錄。257的患者有呼吸專科醫(yī)生制定的長期治療計劃527的患者長期每日規(guī)律使用吸入型糖皮質(zhì)激素。按照哮喘控制測試ACT評分判斷哮喘控制情況達到完全控制的僅占42總分達到25分良好控制的占322總分2024分未控制的患者占636總分小于20分。藥物治療情況調(diào)查的哮喘患者中未每日規(guī)律使用的控制藥物者22例149每日規(guī)律使用藥物包括ICSLABA的占512。哮喘發(fā)作的征兆和自我管理近半數(shù)401患者在過去的一年中哮喘的發(fā)作變得不規(guī)律哮喘惡化時736的患者限制了日?；顒?13的患者表示在哮喘癥狀即將惡化時對于不去就醫(yī)而能自己控制哮喘有信心。757的患者表示在哮喘發(fā)作前有征兆主要的征兆有胸悶716、咳嗽723和氣促770出現(xiàn)征兆到哮喘急性發(fā)作的平均時間為144±241小時中位時間為10小時。有630的患者表示在哮喘發(fā)作時首先使用解痙藥物。疾病的認(rèn)知程度534的患者認(rèn)為哮喘是一種氣道炎癥性疾病有439的患者在哮喘持續(xù)期時首選吸入激素治療784的患者認(rèn)為短效Β2激動劑的氣霧劑是在哮喘急性加重時短暫使用有706的患者表示尚未使用峰流速儀的原因是醫(yī)生從來沒有介紹過有251的患者表示在以往的治療中曾經(jīng)使用過“偏方”797的患者表示不會再使用“偏方”治療哮喘703的患者都能夠正確的認(rèn)識到哮喘治療的目標(biāo)是長期良好控制。338的患者曾經(jīng)參加過醫(yī)院舉辦的哮喘防治知識講座迫切需要及希望參加哮喘知識講座的有385及507?；颊弑硎精@取哮喘防治知識的主要渠道是醫(yī)生其次是書籍。僅有61的患者登陸過中國哮喘聯(lián)盟網(wǎng)站。結(jié)論長沙城區(qū)哮喘患者疾病控制現(xiàn)狀與全國相比仍存在差距但控制用藥的比例較以往有所提高。醫(yī)務(wù)工作者的工作取得了一定的成果但是患者對疾病的認(rèn)知程度有待改善。長沙城區(qū)的哮喘防治工作者需要加強哮喘相關(guān)知識的教育及普及。

簡介：點擊查看更多新藥SGL-2治療病毒性心肌炎的藥理機制及新藥SGL-3對心力衰竭治療作用的研究.pdf精彩內(nèi)容。