1、目的：
　　大量研究表明煙草煙霧能引起機體各個系統(tǒng)的疾病，而機體的疾病狀態(tài)往往與細胞線粒體的損傷有關。線粒體在介導細胞凋亡的過程中起著至關重要的作用，在細胞凋亡的過程中，線粒體的膜通透性的異常，能引起線粒體膜電位的降低，相關凋亡蛋白表達水平改變，細胞的氧化和抗氧化水平的失衡。研究線粒體在介導細胞凋亡過程中的具體機制，對于進一步研究細胞凋亡的調控機制具有重要意義。
　　本文旨在探索煙草煙霧凝集物(cigarette smoke

2、 condensate,CSC)對永生化人支氣管上皮細胞(immortalized human bronchial epithelial,BEAS-2B)的線粒體損傷機制，為進一步研究CSC的毒作用機制以及預防煙草煙霧引發(fā)機體疾病提供科學依據。
　　方法：
　　1.用CSC對融合至70％左右的BEAS-2B細胞進行染毒，染毒持續(xù)24小時，染毒后的BEAS-2B細胞即為實驗所用細胞。
　　2.設立二甲基亞砜組（Dimet

3、hyl Sulfoxide，DMSO）為溶劑對照組、正常未染毒BEAS-2B組（空白對照組）、CSC染毒組，通過細胞形態(tài)學觀察、劃痕實驗、流式細胞儀、ELISA、CCK-8技術檢測各組細胞形態(tài)變化、細胞凋亡率以及功能改變。
　　3.運用ELISA、Western blot、RT-qPCR技術檢測各組細胞的線粒體膜電位是否改變以及各組細胞凋亡相關基因、蛋白的相對表達。
　　結果：
　　1.CSC染毒對BEAS-2B細胞形

4、態(tài)及功能的影響
　　CSC染毒后抑制了 BEAS-2B細胞活性，且隨CSC染毒終濃度的增加，BEAS-2B細胞存活率不斷下降，呈現出劑量效應關系；
　　與空白對照組BEAS-2B細胞相比，DMSO溶劑對照組細胞形態(tài)上沒有明顯變化；0.02mg/mLCSC染毒組細胞及胞核的形態(tài)均無明顯改變，但少數細胞內出現空泡，0.04mg/mL組細胞出現腫脹變形，細胞核開始增大變形，核仁增大，出現核畸形；0.06mg/mL組開始胞膜形態(tài)開始

5、變形，胞膜間出現了針刺樣突起，胞內出現大量空泡；0.08mg/mL組細胞面積增大，細胞及胞核明顯變形，一些細胞膜出現輪廓變形模糊，胞膜結構開始崩解，少量細胞出現核碎裂等特征；
　　在6h、12h、24h、48h檢測點時，溶劑對照組及各CSC濃度組細胞的遷移距離差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。DMSO組與正常BEAS-2B細胞組遷移距離的差異均無統(tǒng)計學意義(均P?0.05)。
　　2.染毒后各組細胞ROS的檢測
　

6、　激光共聚焦顯微鏡下觀察到隨著CSC染毒濃度的提高，細胞內ROS熒光信號強度也隨之增強。熒光酶標儀檢測結果顯示 DMSO組與各CSC染毒組整體ROS水平具有差異，且差異有統(tǒng)計學意義（F=143.390，P﹤0.05）；DMSO組與0組（空白對照）組間差異沒有統(tǒng)計學意義（P?0.05）；各不同濃度CSC染毒組細胞間ROS水平差異均有統(tǒng)計學意義（均P﹤0.05）。
　　3.SOD活性檢測
　　以DMSO組為對照，各組細胞整體SO

7、D活力水平差異具有統(tǒng)計學意義（F=195.680，P﹤0.05），除空白對照組外，各CSC染毒組細胞與DMSO組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05）。隨著CSC染毒濃度的提高，SOD活力單位逐漸降低。
　　4.細胞凋亡率的檢測
　　以DMSO組為對照，使用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。結果顯示：DMSO溶劑對照組與空白對照組比較，凋亡率差異無統(tǒng)計學意義(均P?0.05)。不同濃度CSC處理后，細胞的凋亡率上升。CSC染毒組細

8、胞凋亡率均大于DMSO組細胞(均P<0.05)，且隨著CSC染毒濃度的升高，細胞凋亡率逐漸升高。
　　5.線粒體膜電位的檢測
　　激光共聚焦顯微鏡下觀察到隨著CSC染毒濃度的提高，細胞內紅綠熒光比明顯下降，提示CSC染毒BEAS-2B細胞引起其線粒體膜電位下降，且膜電位下降程度隨CSC染毒濃度的升高而增強。
　　6.各組細胞Bcl-2、Bax、Cyt-C和caspase-3基因mRNA的檢測
　　熒光定量qPCR

9、檢測結果顯示0組（空白對照組）細胞與DMSO組間mRNA的表達量相比，差異無統(tǒng)計學意義（P?0.05），而其余各CSC濃度染毒組Bcl-2、Bax、Cyt-C和caspase-3基因mRNA表達量與DMSO組表達量間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；
　　Bcl-2基因：0.02組、0.04組、0.06組、0.08組的表達量均低于DMSO組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且隨CSC染毒濃度的提高，Bcl-2表達量逐漸降低；B

10、ax、Cyt-C和caspase-3基因：各CSC組表達量均高于DMSO組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），隨著CSC染毒濃度的提高，Bax、Cyt-C和caspase-3基因表達量逐漸升高。
　　7.Bcl-2、Bax和活化的caspase-3蛋白表達情況的檢測
　　Western Blot檢測細胞蛋白結果顯示：空白對照組與DMSO組的Bcl-2蛋白表達量相比，差異無統(tǒng)計學意義（P?0.05），而CSC染毒組的Bcl-2

11、蛋白表達量低于DMSO組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），空白對照組的Bax和活化的caspase-3蛋白的表達量與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P?0.05）；CSC組Bax和活化的caspase-3蛋白表達量均高于DMSO組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：
　　CSC誘導BEAS-2B細胞產生氧化損傷，導致細胞活力降低、細胞形態(tài)改變以及遷移能力改變，引起細胞內氧化與抗氧化水平的失衡，線粒體在氧化