1、背景與目的:
　　心肌纖維化（ cardiac fibrosis, CF）指在致病因素作用下，細胞外基質（extracellular matrix, ECM）過量沉積，最終導致心臟收縮舒張功能受損的病理性改變。其中活性氧（reactive oxygen species，ROS）與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）是導致心肌纖維化的重要因素。ROS能夠通

2、過直接作用或者間接通過多種信號途徑引起心肌纖維化。血管緊張素II（angiotensin II，Ang II）是重要的致纖維化因子，它能夠激活還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH）氧化酶，誘導 ROS的大量生成。ROS的大量生成和抗氧化反應的失衡造成機體發(fā)生氧化損傷，引起ECM表達和代謝發(fā)生改變，造成膠原纖維的大量沉積，導致心肌纖維化。

3、r>　　轉錄因子NF-E2相關因子2（nuclear factor-erythroid related factor-2，Nrf2）是細胞內重要的抗氧化因子。在正常生理情況下， Nrf2和它的胞質接頭蛋白Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein1，Keap1）偶聯(lián)，被泛素化后降解，保持Nrf2在細胞內的低濃度、低活性狀態(tài)。當氧化應激發(fā)生時，Keap1與Nrf2解偶聯(lián)，Nrf2轉

4、移入核。進入細胞核內的Nrf2與肌腱膜纖維肉瘤蛋白（musculoaponeurotic fibrosarcoma protein, Maf）等小分子蛋白形成異二聚體，與抗氧化反應元件（antioxidant responsive element，ARE）結合，啟動下游受Nrf2所調控的抗氧化酶和II相解毒酶的表達，增強細胞的抗氧化應激能力。
　　丹參酮IIA（tanshinone IIA，Tan IIA）是我國傳統(tǒng)中藥丹參的重要

5、活性成分。丹參酮IIA磺酸鈉（sodium tanshinone IIA sulfonate, STS）是丹參酮IIA經磺化而得到的水溶性藥物，具有更高的生物利用度。因 STS具有抗氧化應激、抗纖維化、抗動脈粥樣硬化、抗血小板聚集、保護心肌等作用而被廣泛用于心血管疾病的治療。但是其具體的抗纖維化、抗氧化機制尚未完全闡述清楚。
　　本實驗通過皮下植入微量滲透泵緩釋Ang II構建大鼠心肌纖維化模型，給予不同劑量STS干預，觀察STS

6、對Ang II誘導的心肌纖維化的影響，以及STS抗纖維化的機制是否依賴于Keap1-Nrf2信號通路。
　　方法:
　　40只SD大鼠隨機分為5組，分別為對照組，模型組，低、中、高劑量STS組。采用皮下植入微量滲透泵緩釋Ang II建立大鼠心肌纖維化模型，各STS組給予不同劑量STS干預。3周后，采用蘇木精伊紅和馬松染色法觀察心肌纖維化程度；采用RT-qPCR和Western blot檢測心肌組織中I型膠原（Collagen

7、 I）、III型膠原（Collagen III），Nrf2和它的胞質接頭蛋白Keap1,以及Nrf2所調控的抗氧化酶和II相解毒酶mRNA水平及其蛋白水平；采用比色法檢測心肌組織中丙二醛、谷胱甘肽水平及超氧化物歧化酶活性。
　　結果:
　　對照組大鼠心肌組織未見明顯炎性細胞浸潤、心肌細胞壞死，心肌纖維排列均勻致密；模型組大鼠心肌組織可見明顯灶狀壞死、心肌纖維斷裂、大量炎性細胞浸潤；各STS組心肌損傷程度隨著STS劑量的增加逐

8、漸減輕，于高劑量STS組改善更為明顯。
　　對照組大鼠未見明顯藍色膠原纖維沉積，紅色的細胞質、心肌纖維排列正常；模型組可見明顯密集、融合的藍色膠原纖維纖維，CVF值顯著升高，表明Ang II能夠誘導膠原纖維的異常增生、沉積，導致心肌纖維化的發(fā)生；各 STS組藍色膠原纖維分布稀疏，融合程度隨STS劑量增加逐漸減低，CVF值逐漸減少。模型組心肌組織中Collagen I與Collagen III的mRNA含量顯著增加。中、高劑量STS

9、組Collagen I和Collagen III的mRNA表達水平下調。與模型組、低劑量STS組相比，高劑量STS可以顯著降低Collagen I和Collagen III的蛋白表達水平（分別為P<0.001，P<0.001和P<0.05，P<0.05）。
　　模型組Keap1與Nrf2 mRNA水平均輕度增加。隨著STS劑量的增加，各組Keap1 mRNA表達水平逐漸減低，Nrf2 mRNA表達水平逐漸增加。模型組Keap1、細

10、胞核 Nrf2蛋白水平與對照組相比輕度增加（P<0.01，P<0.05），細胞質 Nrf2蛋白表達水平沒有明顯改變（P>0.05）。與模型組相比，中劑量STS組Keap1和細胞質Nrf2蛋白含量輕度減低（P<0.01，P<0.05），細胞核Nrf2蛋白含量輕度增加（P<0.01）。高劑量STS組與模型組、低劑量STS組相比，Keap1和細胞質Nrf2蛋白含量顯著減低（P<0.001，P<0.01和P<0.01，P<0.01），細胞核Nr

11、f2蛋白含量顯著增加（P<0.001，P<0.05）。與對照組相比，模型組HO-1 mRNA含量輕度增加（P<0.05），NQO1和GCLC mRNA含量沒有顯著變化。與模型組、低劑量STS組相比，高劑量STS組HO-1、NQO1、GCLC mRNA含量均顯著增加。
　　與對照組相比，模型組MDA含量顯著增加，SOD活性顯著降低（P<0.01， P<0.01）。各STS組MDA含量隨STS劑量的增加而逐漸減低，SOD活性逐漸增加。