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文檔簡介
1、目的:
分離并培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并對其生物學特性進行鑒定。通過腎組織病理觀察、生化指標檢測、Western blot技術觀察骨髓間充質干細胞對阿霉素腎病大鼠的治療效果,并探討B(tài)MSC對p38和pp38的影響。
方法:
SD大鼠骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定:頸椎脫臼處死大鼠,無菌條件下剪取雙側股骨和脛骨,采集骨髓
2、,通過密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法,分離并培養(yǎng)BMSCs。體外純化、傳代、擴增。取P3-5代細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。流式細胞儀檢測細胞表面標志物,并進行成軟骨、成脂分化誘導,鑒定其生物學特性。將大鼠分為四組,即空白對照組、阿霉素組、干細胞組、強的松組,空白組不予任何處理,阿霉素組在注射ADR后予生理鹽水靜脈注射,干細胞組予BMSCs以2x106/只靜脈輸注,強的松組給予強的松5mg/d連續(xù)灌胃。于不同時間點采取大鼠靜脈血,測定血肌
3、酐、尿素、白蛋白、總膽固醇、甘油三脂;收集大鼠尿液,進行24h尿蛋白定量;切取大鼠腎臟,經(jīng)染色后置于光鏡及電鏡下觀察腎臟病理變化;western-blot檢測各組大鼠腎臟在不同時間點蛋白p38和pp38表達差異。
結果:
1、獲取的BMSCs為均一的長梭形,呈集落樣生長,純度高、活性強。流式鑒定結果提示其高表達CD29、CD44、CD90,低表達CD11、CD34、CD45、CD106。經(jīng)誘導后能成功向成軟骨細胞、成
4、脂肪細胞分化。
2、各項生化指標顯示:干細胞組、強的松組24h尿蛋白定量較阿霉素組有所下降,而肌酐、尿素等水平則未見明顯下降。
3、腎組織病理觀察:阿霉素組腎小球系膜細胞輕度增生,腎小管內(nèi)有蛋白管型,電鏡下可見足突融合及微絨毛變性。而干細胞組和強的松組腎臟只見足細胞輕度水腫。
4、Western blot提示:各干預組pp38的表達較空白組均有所上調,但干細胞組、強的松組pp38的表達量較阿霉素組少。
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