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1、以通過植物原位真空滲入遺傳轉(zhuǎn)化所獲得的轉(zhuǎn)基因擬南芥(攜帶目的基因CaMV基因Ⅵ和標記基因hpt)為試驗材料,通過自交和雜交,以潮霉素抗性為表型標記性狀,采用遺傳學(xué)分析和PCR檢測相結(jié)合的方法,研究了外源基因的遺傳穩(wěn)定性及遺傳傳遞規(guī)律,包括自交后代的外源基因中分離情況,外源基因?qū)ε渥拥挠绊懞屯庠椿虻恼衔稽c分析等.獲得以下主要結(jié)果:1.29個T<,1>代植株的自交后代(T<,2>代)對潮霉素的抗性分離比例復(fù)雜,只有8個植株的后代符合孟德
2、爾單顯性基因遺傳模式,大多數(shù)偏離3:1的比例,抗性植株比率偏低,說明外源基因以單位點插入,T<,1>代轉(zhuǎn)基因植株在自交繁殖過程中存在轉(zhuǎn)基因的沉默或丟失現(xiàn)象.轉(zhuǎn)基因株系在T<,3>代的遺傳已比較穩(wěn)定,符合孟德爾遺傳,抗性分離比例表現(xiàn)為3:1或1:0.隨著自交世代的增加,外源基因的遺傳性趨于穩(wěn)定.2.將得到的4個純合株系分別與其野生型雜交,正反交結(jié)果均為F<,1>代全顯性,F<,2>代潮霉素抗感比例為3:1,驗證了外源基因的單位點插入,潮霉
3、素抗性性狀由—對顯性基因控制,轉(zhuǎn)基因在雌雄配子中的傳遞無差異,不受細胞質(zhì)的影響.3.來自不同T<,1>代的4個轉(zhuǎn)基因純合株系配組雜交,6個雜交組合中除P2×P4外,其余5個組合的F<,2>代潮霉素抗性分離比為15:1,說明各組合中外源基因插入到非同源染色體上;P2×P4組合的抗性株率為99.43%,說明外源基因在P2和P4中可能插入到同源染色體的不同位點上.4.對隨機選取的潮霉素抗性植株不同世代和雜交后代49株進行PCR檢測,48株都獲
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