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簡介：本文研究了SARS病毒基因組主要編碼的蛋白質(zhì)有RNA聚合酶蛋白聚合酶1A，1B，S蛋白SPIKEPROTEIN，E蛋白SMALLMEMBRANEPROTEIN，N蛋白NUCLEOCAPSIDPROTEIN，主蛋白酶3CLIKEPROTEINASE等，利用先進的生物信息學(xué)分析軟件從已知結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫PDB中搜尋到豬冠狀病毒TGEV和人感冒冠狀病毒HCOV主蛋白酶與SARS病毒主蛋白酶序列具有很高相似性，以TGEV的主蛋白酶三維晶體結(jié)構(gòu)為模板來同源模建了SARS冠狀病毒的主蛋白酶三維結(jié)構(gòu)，分析了其結(jié)構(gòu)和活性位點特征。本文利用同源模建方法得到了S蛋白的三維結(jié)構(gòu)，并利用蛋白質(zhì)對接軟件得到了S蛋白與其功能性受體ACE2蛋白的結(jié)合模式，從而確定了S蛋白中與受體結(jié)合的關(guān)鍵部位及其結(jié)構(gòu)特征，這為SARS病毒疫苗的研究提供了一些有價值的線索。

簡介：華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文脫唾液酸糖蛋白受體介導(dǎo)的雞貧血病毒VP3基因靶向性治療肝癌的研究姓名王宇哲申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師屈伸200141華中科技大掌同濟醫(yī)掌院攻讀博士掌位畢業(yè)論文一2。凋亡的，所以VP3的后兩種特性強有力地表明了VP3作為一種抗腫瘤生物制劑具有極大的應(yīng)用潛力。最近，NOTEBORN小組也驗證了CAVVP3的體內(nèi)抑瘤效應(yīng)，進一步驗證了我們的觀點?；蜣D(zhuǎn)移是NNN療中N個關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其中目的基因的靶向性作用是制約基因治療的主要因素之一。目前，受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移逐漸引起人們的重視。它是將偶聯(lián)了受體特異性配體的DNA結(jié)合分子，如多聚左旋賴氨酸POLY．L．LYSINE，PLL，與DNA結(jié)合形成可溶性復(fù)合物，然后利用受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，將DNA靶向性導(dǎo)入特定的細胞。配體和受體的特異性結(jié)合以及受體的內(nèi)吞作用是一種生理過程。因而與其它基因轉(zhuǎn)移技術(shù)相比具有獨特的優(yōu)勢，尤其適用于體內(nèi)的基因轉(zhuǎn)移。WUGY研究小組將肝細胞表面特有受體，脫唾液酸糖蛋白受體ASIALOGLYCOPROTEINRECEPTOR，ASGPR的天然配體人血清類脫唾液酸粘蛋白ASIALOOROSOMUCOID，ASOR同報道基因連接一起，在體內(nèi)外證明了ASOR受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的肝細胞靶向性。且以此受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移將低密度脂蛋白受體LDLR基因?qū)肴狈Υ嘶虻牡母啧パY動物模型體內(nèi)，使高酯血癥得到了部分糾正。近幾年該技術(shù)亦成功地在人體內(nèi)應(yīng)用，治療了多例家族性高膽固醇血癥患者。文獻報道，ASOR受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移在許多疾病的基因治療，尤其是肝臟酶缺陷有關(guān)的遺傳性疾病的基因治療中發(fā)揮了重要作用，然而將其應(yīng)用于肝癌的基因治療國內(nèi)、外尚未見報道。因而，利用ASOR受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，實現(xiàn)CAVVP3基因的靶向性轉(zhuǎn)移，研究CAVVP3在體內(nèi)、外特異誘導(dǎo)肝組織中瘤細胞的凋亡效應(yīng)無疑具有重要意義。此方面的研究在國內(nèi)、外均無類似報道。本研究無疑對肝癌的特異性基因治療提供了一個新的途徑和思路，若研制成功將對肝癌患者的臨床治療帶來福音，而且將來進一步作為產(chǎn)品開發(fā)也具有廣闊的市場前景。

簡介：乙型肝炎病毒的感染不僅引起急慢性病毒性肝炎，而且與肝纖維化、肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，然而對于HBV感染目前尚無特效的治療技術(shù)和方法，這主要是由于HBV感染引起的病毒性肝炎發(fā)病機制還有諸多方面沒有研究清楚。近年來，隨著對HBV致病機制研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)在HBV致病機制中存在著其與肝細胞間復(fù)雜的相互作用關(guān)系。為此，本研究所篩選了肝細胞內(nèi)能與E抗原相互結(jié)合的蛋白，并將其中一個未知功能新基因命名為乙型肝炎病毒E抗原結(jié)合蛋白2HBEBP2。本研究即以此為基礎(chǔ)，通過以下研究內(nèi)容，試圖闡釋該基因的生物學(xué)功能1提取HEPG2細胞總RNA，利用RTPCR方法在HBEBP2基因的兩端分別引入BAMHI和ECⅠ酶切位點，獲得目的基因片段，連接至PGEMT載體，測序正確后插入至綠色熒光真核表達載體PEGFPC1中，轉(zhuǎn)染HEPG2細胞，24HR后在熒光倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)細胞核出現(xiàn)明顯的綠色熒光信號，提示HBENP2主要定位于胞核內(nèi)。2利用相同方法將引入ECⅠ和SACⅠ酶切位點的HBEBP2基因片段插入至原核表達載體PET32A中，轉(zhuǎn)化BL21宿主菌，1MMMLIPTG、37℃誘導(dǎo)45HR獲得了帶有組氨酸標(biāo)簽的重組融合蛋白的優(yōu)化表達。隨后應(yīng)用WESTERNBLOT對表達蛋白的特異性進行了驗證。3將引入ECⅠ和BAMHⅠ酶切位點的HBEBP2基因片段插入至酵母細胞表達載體PGBKT7中，轉(zhuǎn)化AH109酵母菌株并獲得表達。再與含有肝細胞文庫質(zhì)粒的Y187酵母菌株配合，進行酵母雙雜交篩選獲得與HBEBP2相互結(jié)合的已知功能蛋白4種，包括人線粒體蛋白基因、人Α2糖蛋白1、人甘露糖P長醇利用缺陷1基因和人絲氨酸蛋白酶抑制劑等蛋白基因。結(jié)果提示該蛋白可能與糖基化作用、脂類代謝、細胞增殖等密切相關(guān)。此外還篩選得到2個新基因，分別命名為HBEBP2結(jié)合蛋白BHBEBP2BPBGENBANKACEESSIONDQ499598和結(jié)合蛋白CITBEBP2BPCGENBANKAEEESSIONDQ499599。4隨后，我們又對HBEBP2BPB進行了克隆化研究，并用生物信息學(xué)方法對其作了進一步分析。以上結(jié)果，對深入研究HBEBP2生物學(xué)功能的后續(xù)工作奠定了基礎(chǔ)。

簡介：大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文聚合酶鏈反應(yīng)檢測角膜內(nèi)皮炎淚液及房水中單皰病毒DNA姓名范松濤申請學(xué)位級別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師孫洪臣200151率為O，二者有顯著性差異PO05；16例角膜內(nèi)皮炎淚液中3例檢測到HSVIDNA，陽性率為1875％，20例老年性白內(nèi)障對照組淚液中1例檢測到HSVIDNA，陽性率為5％，二者無顯著性差異PO05；角膜內(nèi)皮炎患眼房水中檢測到HSVIDNA的陽性率6875％與淚液中檢測到HSVIDNA、的陽性率187596有顯著性差異P005。4／結(jié)論用PCR技術(shù)檢測角膜內(nèi)皮炎房水中單皰病毒DNA可以對角膜內(nèi)皮炎做出病原學(xué)診斷，并有早期、快速的優(yōu)點，可進一步指導(dǎo)臨床治療；用PCR技術(shù)檢測角膜內(nèi)皮炎淚液中單皰病毒DNA雖然操作方便，患者也易接受，但其陽性率低187596，與房水檢測陽性率6875％有顯著性差異，不足以診斷角膜內(nèi)皮炎本研究觀察病例較少16例且未設(shè)計其它相關(guān)病毒的特定引物來進行特異性擴增，故所得結(jié)論僅限于單皰病毒，是否有其他感染原，需進一步研究。關(guān)鍵詞角膜內(nèi)皮炎聚合酶鏈反應(yīng)單純皰疹病毒

簡介：該論文主要研究了漢坦病毒疫苗株Z10和Z37核蛋白體內(nèi)、體外表達核蛋白與基因組末端反向重復(fù)序列相互作用以及核蛋白對鼠源性巨噬細胞生長的影響核蛋白相對保守常作為漢坦病毒分子進化親緣性分析的依據(jù)為了解漢坦病毒疫苗株Z10與Z37基因分型及與其他毒株在進化上的親緣性克隆并序列測定了Z10和Z37核蛋白全基因為了獲得純化的可溶性重組核蛋白構(gòu)建了Z10和Z37株核蛋白原核表達載體并在大腸桿菌中表達我們發(fā)現(xiàn)在較低的溫度18℃和較低濃度IPTG100MM條件下誘導(dǎo)表達過夜可提高可溶性核蛋白的產(chǎn)量為了解內(nèi)源性核蛋白的表達及細胞內(nèi)的分布情況構(gòu)建了漢坦病毒Z10株核蛋白基因與鼠干細胞反轉(zhuǎn)錄病毒MSCV重組載體通過磷酸鈣轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入產(chǎn)病毒的包裝細胞系BOSC23中產(chǎn)生完整的重組MSCVFLAGNP病毒然后以重組病毒直接感染NIH3T3細胞利用PUROMYCIN對感染細胞進行連續(xù)壓力篩選獲得了轉(zhuǎn)核蛋白抗性細胞互補可形成雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)為了研究該雙鏈結(jié)構(gòu)在核蛋白包裝病毒基因組RNA中的作用與功能以T4DNA激酶同位素標(biāo)記一對人工合成互補的18個核苷酸反向重復(fù)序列制備雙鏈探針以模擬基因片段末端反向重復(fù)序列形成的雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)為了解核蛋白在漢坦病毒感染巨噬細胞時的作用分析了Z10和Z37核蛋白細胞外刺激或細胞內(nèi)大量表達對鼠源性巨噬細胞系J774的影響

簡介：點擊查看更多巨細胞病毒感染致室性心律失常與射頻消融的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：背景A型流感病毒NONSTRUCTRUALPROTEIN1NS1能與宿主細胞內(nèi)眾多蛋白相互作用表現(xiàn)為對宿主的免疫抑制作用并影響信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)合成。NS1蛋白含有約230個氨基酸片段C末端4個氨基酸被稱為PDZ結(jié)合基序PDZBINDINGMOTIF。突觸后密度蛋白POSTSYNAPTICDENSITYPROTEINSPSD95主要存在于神經(jīng)元細胞含有3個PDZ結(jié)構(gòu)區(qū)域PDZDOMAIN。PSD95作為神經(jīng)元細胞鷹架蛋白結(jié)合了眾多功能蛋白。PSD95在神經(jīng)元細胞離子平衡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)N甲基D門冬氨酸受體NMETHYLDASPARTATERECEPTNMDAR聚集等方面均發(fā)揮著重要作用。目的為了研究A型流感病毒NS1與PSD95蛋白之間存在的相互作用及不同亞型流感病毒NS1與PSD95相互作用的差異檢測這兩種蛋白結(jié)合作用對神經(jīng)元細胞功能的影響。利用基因克隆技術(shù)通過GSTPULLDOWN酵母雙雜交免疫共沉淀免疫熒光定位等技術(shù)來確定不同亞型流感病毒NS1蛋白與神經(jīng)元突觸后密度蛋白PSD95之間的相互作用。通過測定NITRICOXIDENO含量變化來證實NS1與PSD95相互結(jié)合后對神經(jīng)元細胞功能的影響。方法通過GSTPULLDOWN證實NS1與PSD95在體外的相互結(jié)合酵母雙雜交及Α半乳糖苷酶活性測定模擬NS1與PSD95在體內(nèi)的相互作用免疫共沉淀免疫熒光定位確定NS1與PSD95在哺乳動物細胞內(nèi)相互結(jié)合情況通過GRIESSREAGENT檢測亞硝酸鹽確定細胞內(nèi)NO產(chǎn)物含量。結(jié)果ASHANTOU1692006ST169H1N1、ASHANTOU60206ST602H3N2、AGUANGDONG12005GD05H5N1、AQUAILHONGKONGG197G1H9N2各亞型病毒中僅H5N1亞型流感病毒的NS1NS51能夠與PSD95相互作用酵母雙雜交XGALΑ半乳糖苷酶活性檢測中轉(zhuǎn)染PGADNS51PGBKPSD95的酵母菌AH109能在ADELEUTRPHIS培養(yǎng)基QUADRUPLEOUTMEDIUMQDO平板上生長XGAL強陽性Α半乳糖苷酶活性單位為3504±0082MILLUNITML轉(zhuǎn)染PGADNS11PGBKPSD95的AH109在QDO僅極少菌落生長XGAL弱陽性Α半乳糖苷酶活性單位為0184±0112MILLUNITML陽性對照1252±0065MILLUNITML陰性對照0061±0023MILLUNITMLGSTPULLDOWN免疫共沉淀試驗中僅NS51與PSD95存在相互結(jié)合NO產(chǎn)物檢測確定NS51與PSD95相互作用后對神經(jīng)元功能的影響。結(jié)果表明使用慢病毒LENTIVIRUSNS51感染大鼠海馬神經(jīng)元NO產(chǎn)生被抑制PCDNANS51PCDNANS11分別轉(zhuǎn)染人神經(jīng)瘤細胞系SHSY5YNS51組NO產(chǎn)生被抑制NS11組NO產(chǎn)生顯著增加。結(jié)論實驗發(fā)現(xiàn)了H5N1亞型流感病毒NS1與神經(jīng)元突觸后密度蛋白PSD95之間存在相互作用而其它亞型NS11NS32NS92則不能與PSD95結(jié)合說明不同亞型流感病毒與PSD95結(jié)合特性上存在差異另外NS1與神經(jīng)元PSD95相互結(jié)合能夠抑制神經(jīng)元NO的產(chǎn)生。材料與方法選取由本實驗室提供的A型流感病毒ASHANTOU1692006ST169H1N1ASHANTOU60206ST602H3N2AGUANGDONG12005GD05H5N1AQUAILHONGKONGG197G1H9N2選用流感病毒分離鑒定細胞系MADINDARBYCANINEKIDNEYMDCK細胞通過空斑形成試驗PLAQUEFMINGASSAY得到流感病毒ASHANTOU1692006ST169、ASHANTOU60206ST602、AGUANGDONG12005GD05、AQUAILHONGKONGG197G1的空斑形成單位PLAQUEFMINGUNITPFU分別為12107PFUML、42107PFUML、11106PFUML、10106PFUMLMDCK細胞使用含10％FBS的DMEM進行培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細胞則使用含10?S1?7的NEUROBASAL培養(yǎng)基進行培養(yǎng)構(gòu)建相應(yīng)載體PGADNS11PGADNS32PGADNS51PGADNS92PGBKPSD95FLAGPSD95PCDNANS11PCDNANS32PCDNANS51PCDNANS92PCDNAPSD95慢病毒LENTIVIRUSNS51NS11表示ST169的NS1NS32表示ST602的NS1NS51表示GD05的NS1NS92表示G1的NS1進行包括GSTPULLDOWN、酵母雙雜交、免疫共沉淀COIP在內(nèi)的試驗以檢測不同亞型流感病毒NS1與突觸后密度蛋白PSD95之間的相互作用其它相關(guān)試劑包括兔抗PSD95抗體小鼠抗NS1抗體PROTEINGMAGICBEADSHRP標(biāo)記的二抗以及CY3和ALEXA488標(biāo)記的羊抗兔羊抗小鼠二抗使用碧云天的總NITRICOXIDENO檢測試劑盒檢測NS1與PSD95相互結(jié)合后對細胞內(nèi)NO含量的影響。結(jié)果1空斑形成試驗測得ST169H1N1、ST602H3N2、GD05H5N1、G1H9N2的空斑形成單位PFU分別為12107PFUML42107PFUML11106PFUML10106PFUML2酵母雙雜交試驗表明流感病毒NS51與PSD95能夠相互結(jié)合NS11與PSD95不存在或僅存在微弱的相互結(jié)合NS32NS92與PSD95則不存在相互結(jié)合XGAL試驗表明NS51NS11與PSD95能夠相互作用而NS32NS92與PSD95則不存在相互作用Α半乳糖苷酶活性單位檢測表明NS51與PSD95能夠相互作用3GSTPULLDOWN結(jié)果顯示NS51與PSD95能夠相互結(jié)合而NS11與PSD95不存在相互結(jié)合4COIP結(jié)果顯示僅NS51與PSD95存在相互結(jié)合5免疫熒光結(jié)果表明神經(jīng)元SHSY5Y細胞中NS51與PSD95存在共定位6NO檢測顯示慢病毒LENTIVIRUSNS51感染神經(jīng)元細胞NS51能夠抑制NO產(chǎn)物的產(chǎn)生SHSY5Y細胞中NS51能夠抑制NO產(chǎn)物的產(chǎn)生而NS11則促進NO產(chǎn)物的產(chǎn)生結(jié)論1不同亞型流感病毒NS1與PSD95存在不同的結(jié)合特性NS51與PSD95能夠相互結(jié)合而其它亞型流感病毒NS1NS11NS32NS92與PSD95不存在相互結(jié)合2流感病毒NS1與PSD95蛋白的相互結(jié)合能夠抑制人神經(jīng)母細胞瘤細胞系SHSY5Y及神經(jīng)元細胞中NO的產(chǎn)生和釋放。

簡介：第一部分、2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)急性下呼吸道感染住院患兒腺病毒流行病學(xué)調(diào)查目的連續(xù)4年監(jiān)測湖南地區(qū)兒童急性下呼吸道感染ACUTELOWRESPIRATYTRACTINFECTION，ALRTI中腺病毒HUMANADENOVIRUSADV的感染情況，揭示不同年份ADV在湖南地區(qū)所致兒童ALRTI的臨床流行病學(xué)特征。對象及方法12007年9月～2011年8月收集湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心診斷為ALRTI的住院患兒鼻咽抽吸物NASOPHARYNGEAASPIRATESSAMPLES，NPAS標(biāo)本。2采用聚合酶鏈反應(yīng)PCR，對NPAS標(biāo)本進行ADV病毒檢測。將陽性PCR產(chǎn)物直接測序，弱陽性標(biāo)本進行膠回收，連接，轉(zhuǎn)化，挑克隆，然后將菌液送測序。所得測序結(jié)果與美國國立生物技術(shù)中心NCBIGENEBANK中的序列進行BLAST比對證實。3對ADV在兒童ALRTI中的流行病學(xué)特點進行分析。結(jié)果12007年9月～2011年8月共收集3140例患兒的NPAS標(biāo)本，242份ADV檢出陽性，總檢出率為771％。2242例ADV檢測陽性患兒①平均年齡為25月，3～4歲患兒檢出率高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。P＜001②男性檢出144例719％，女性檢出98例901％，男女性別之比為147∶1，性別之間ADV陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005③研究期間ADV全年均有檢出，發(fā)病高峰期在每年的4～8月，11月份。四季檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001，以夏季為高。研究期間檢出率逐年增加。結(jié)論1ADV是2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)兒童ALRTI的重要病毒病原之一，檢出率逐年上升。2本資料中3～4歲患兒檢出率高，在各年齡段之間檢出率有統(tǒng)計學(xué)差異檢出率在性別之間比較無差異以夏季檢出率高。3ADV陽性的重癥肺炎以3歲以下嬰幼兒多見。第二部分、2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)急性下呼吸道感染住院患兒腺病毒分子流行病學(xué)調(diào)查目的了解2007年9月～2011年8月ADV在湖南地區(qū)ALRTI住院兒童中的分子流行病學(xué)特點。對象及方法1242例ADV檢出陽性的ALRTI住院兒童NPAS標(biāo)本。2使用2對可擴增所有ADV血清型的通用引物，對ADV陽性的NPAS標(biāo)本再次進行巢氏擴增ADVHEXONLOOP1基因片段。將巢式PCR陽性擴增產(chǎn)物直接測序，弱陽性標(biāo)本進行膠回收，連接，轉(zhuǎn)化，挑克隆，然后將菌液送測序，結(jié)果與GENBANK上的序列比對，確定其血清型。3對ADV在兒童ALRTI中的分子流行病學(xué)特點進行分析。結(jié)果1242份ADV陽性標(biāo)本中，共檢出血清型11個，其中半數(shù)以上為3型132242，5454％，其次依次為7型65份，占2686％，1型22份，占909％，2型10份，占413％，6型5份，占207％，11型3份，占124％，5型，21型，37型，40型，41型各1份，占041％。3型是一直是研究期間主要優(yōu)勢血清型而2010年9月～2011年8月7型檢出增多，與3型一起成為該年度優(yōu)勢血清型。22010年9月～2011年8月7型檢出增多，該年度7型檢出陽性的ALRTI其熱程，住院時間，需要機械通氣比例，需要住ICU的比例等均高于其他型別。3型以及7型在重癥肺炎患兒中所占比例重，以7型更為常見。3所檢出血清型中①性別檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義②1～3型ADV，年齡檢出差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001③3型秋季多見，7型夏季多見（P均＜001），其余血清型無季節(jié)流行特點。4結(jié)論1研究期間，共檢出ADV血清型11個，2007年9月～2010年8月3型是主要優(yōu)勢血清型。2010年9月2011年8月以3、7型為主要優(yōu)勢血清型。2不同血清型具有各自分子流行病學(xué)特點。3ADV陽性重癥肺炎患兒中以3型、7型常見，7型檢出陽性的ALRTI病情重于其他型別。第三部分、重癥腺病毒肺炎的臨床特點及診治體會目的提高對腺病毒肺炎的認識，對重癥腺病毒肺炎的臨床特點以及診治情況進行分析總結(jié)。對象及方法1研究對象2007年9月～2011年8月在湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心住院的65例確診為重癥腺病毒肺炎患兒。同期確診的28例難治性支原體肺炎以及13例典型川崎病患兒。2方法收集以上65例患兒臨床資料包括包括一般情況，臨床表現(xiàn)，實驗室檢查，影像學(xué)檢查，治療，預(yù)后等），對其臨床特點及診治情況進行分析。并與28例難治性支原體肺炎患兒，13例典型川崎病患兒的臨床表現(xiàn)進行比較。結(jié)果165例重癥腺病毒肺炎患兒平均年齡1717月，最小1月，最大120月。5歲以下63例，占9692％，其中6月～2歲38例。65例患兒中男性41例，女性24例，男女性別之比為171∶1。2臨床表現(xiàn)所有患兒均有咳嗽、肺部羅音，其次為持續(xù)高熱9692％，6365、熱程長（28例熱程＞7天，20例熱程＞14天）、喘息5165，7846％、肝腫大5231％，3465、脾腫大2769％，1865、川崎病樣改變（口腔黏膜充血、淺表淋巴結(jié)腫大、楊梅舌、手足硬腫、蛻皮）19例2923％，1965等。并出現(xiàn)合并癥，其中合并呼吸衰竭12例1846％，中毒性肝炎10例1538％，中毒性腦病12例1846％，中毒性心肌炎16例2462％，中度貧血17例2615％，心力衰竭6例923％，死亡4例。3影像學(xué)特點為由早期肺部斑片狀影迅速融合成大片影，雙肺多灶多葉侵潤22例，左肺實變19例，右肺實變8例，其中雙肺多灶多葉侵潤22例中以左肺實變明顯，實變以外的肺組織可有明顯氣腫節(jié)段性肺不張8例胸腔積液氣胸12例，皮下氣腫1例，肺門或縱隔淋巴結(jié)腫1例。4同難治性支原體肺炎相比，重癥腺病毒肺炎發(fā)病年齡以嬰幼兒多見，熱程＞14天發(fā)生率多，肝功能受損、意識改變、貧血以及肝脾增大表現(xiàn)較難治性支原體更常見，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。并可出現(xiàn)川崎病樣改變，合并癥發(fā)生率高。纖維支氣管鏡鏡下粘膜糜爛剝脫發(fā)生率較對照組高。兩組患兒均有肺部實變，但是重癥腺病毒肺炎肺部實變以左下肺多見，而難治性支原體肺炎患兒以右下肺以及左舌葉多見，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。519例不同程度川崎病樣改變的重癥腺病毒肺炎患兒同13例典型川崎病患兒臨床對比研究發(fā)現(xiàn)，兩組患兒均有高熱，嬰幼兒多見，可見楊梅舌，口腔黏膜充血，肝功能受損。但是重癥腺病毒肺炎患兒較對照組相比更易出現(xiàn)貧血，肺部大片實變表現(xiàn)。而淺表淋巴結(jié)腫大、手足硬腫、皮疹、肛周脫皮、冠脈擴張、白細胞、CRP以及ESR升高在對照組更常見，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。典型川崎病患兒對丙種球蛋白沖擊治療效果好。6纖維支氣管鏡下檢查發(fā)現(xiàn)粘膜糜爛剝脫的患兒容易出現(xiàn)呼吸功能不全及肺外心、腦、肝并發(fā)癥。765例患兒經(jīng)綜合治療后，大部分好轉(zhuǎn)出院，4例死亡。32例患兒1年的隨訪中發(fā)現(xiàn)患兒可遺留不同程度后遺癥表現(xiàn)為肺不張2例，閉塞性細支氣管炎8例，肺氣腫2例。結(jié)論重癥腺病毒肺炎具有以下特征年齡多見于6月到24月之間患兒持續(xù)高熱，咳喘較劇烈，感染中毒癥狀重，肝腫大，肺部由早期斑片狀影迅速融合成大片影，并容易出現(xiàn)呼吸功能不全及肺外并發(fā)癥。有著與與細菌性肺炎、難治性支原體肺炎不同的臨床特點。

簡介：該研究首先采用RTPCR方法分別擴增了中國登革2型病毒43株E蛋白III區(qū)的基因和4型病素B5株E蛋白III區(qū)基因然后將其融合并克隆到原核表達載體PYX102D24中隨后在減毒鼠傷寒沙門氏菌平衡致死系統(tǒng)中進行表達試圖構(gòu)建新型雙價登革疫苗該研究對含有中國登革24型病毒株嵌合E基因片段的重組質(zhì)粒DNA的免疫原性進行了初步觀察為了構(gòu)建中國登革24型病毒株嵌合的E基因應(yīng)首先確定病毒E基因的核苷酸序列同源進化分析表明中國D4B5株的基因型為I型與登革型病毒菲律賓分離株親緣關(guān)系較近這是首次報道的中國登革4型病毒分離株基因組全序列該研究對了解登革病毒基因結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系研制新型登革多價疫苗具有一定的意義

簡介：該論文分為三部分第一部分對中藥復(fù)方的化學(xué)研究現(xiàn)狀進行綜述對近10年一有關(guān)銀翹散的研究概況包括其組方中各單味藥的化學(xué)成分以及全方現(xiàn)代藥理學(xué)研究進展進行綜述共引用文獻191篇第二部分詳細論述了銀翹散抗流感病毒有效部位群EFY的物質(zhì)基礎(chǔ)化學(xué)成分的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定并對所得的部分化合物進行了初步的活性測定探討了EFY的HPLC指紋圖譜建立可以此作為EFY質(zhì)量控制的定性指標(biāo)對EFY中的主要化學(xué)成分類別及指標(biāo)性成分進行了定量分析可以此作為對EFY質(zhì)量控制的定量指標(biāo)同時也探討了組方中各單味藥對EFY的貢獻第三部分采用不同分組方案以探討EFY抗病毒效應(yīng)的可能機理

簡介：點擊查看更多人類新型皰疹病毒(HumanHerpesvirus)感染及其對宿主基因組表達狀態(tài)的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的1研究不同地區(qū)旱獺對WHV的易感性了解不同毒株、不同劑量的WHV接種旱獺后的自然經(jīng)過完善WHV感染的旱獺模型。2建立旱獺T淋巴細胞免疫應(yīng)答的檢測方法。3研究恩替卡韋聯(lián)合DNA疫苗PWHCIM對WHV感染的早期干預(yù)作用。方法1捕獲來自不同地區(qū)的旱獺靜脈接種含有WHV病毒的血清觀察其對WHV的易感性用不同的WHV毒株接種易感地區(qū)的旱獺觀察不同毒株的影響分別用高中低劑量的WHV59毒株接種易感地區(qū)的旱獺觀察不同劑量的WHV接種后的自然經(jīng)過。2分離旱獺PBMC建立旱獺T細胞應(yīng)答的檢測方法包括CFSE染色檢測旱獺PBMC增殖CD107A檢測旱獺特異性CTL應(yīng)答PD1PDL1FOXP3染色及其免疫應(yīng)答相關(guān)分子MRNA表達的REALTIMERTPCR的方法。3野外捕獲的成年旱獺24只體重在23KG。經(jīng)足背靜脈接種含有WHV59病毒的血清病毒接種后24小時18只旱獺分別經(jīng)過如下三種處理口服抗病毒藥物恩替卡韋05MGKGDAY持續(xù)服用8周在接種病毒后的第147周用表達WHV核心抗原的質(zhì)粒免疫口服恩替卡韋聯(lián)合質(zhì)粒免疫。余下6只旱獺作為空白對照。20周后旱獺接種WHV0908毒株。選擇2只健康旱獺作為此次病毒接種的對照。應(yīng)用ELISA、REALTIMEPCR檢測旱獺血清WHV感染標(biāo)志物的動態(tài)變化WHSAG、WHSAB、WHCAB和WHVDNA。REALTIMERTPCR檢測旱獺PBMC中免疫應(yīng)答相關(guān)分子的表達。結(jié)果1來自13地區(qū)的喜馬拉雅旱獺對WHV易感病毒呈現(xiàn)高復(fù)制WHV59毒株使喜馬拉雅旱獺出現(xiàn)急性感染而WHV59的傳代毒株STOCK0908和STOCK0925使旱獺同樣出現(xiàn)急性感染中劑量WHV59接種后旱獺出現(xiàn)病毒血癥的時間延遲而低劑量WHV接種旱獺后不能出現(xiàn)病毒血癥。2新鮮分離的旱獺PBMC進行CFSE染色5ΜGML的CONA刺激旱獺淋巴細胞5天CFSEDIMCD4細胞百分比高達9215％。新鮮分離急性WHV感染旱獺的PBMC2ΜGMLWHC96110的肽段特異性刺激3天后CD3CD4CD107A的表達為398％相比2ΜGMLCMV無關(guān)多肽刺激085％和空白對照067％有明顯的增高。在病毒血癥高峰期CD4細胞的PD1表達達到高峰陽性細胞百分比達到1377％CD4細胞的FOXP3的表達為444％PDL1在病毒血癥晚期CD4和CD4T細胞均有短暫上調(diào)其百分比分別為217％和605％病毒清除后降至正常水平。324只成年旱獺初次WHV感染后所有僅用DNA疫苗免疫的旱獺均出現(xiàn)病毒血癥和核心抗體與未處理的對照旱獺相似。除僅用恩替卡韋處理的2只旱獺未出現(xiàn)WHCAB外恩替卡韋聯(lián)合質(zhì)粒免疫及僅用恩替卡韋處理的所有旱獺均出現(xiàn)WHCAB而未出現(xiàn)病毒血癥。再次病毒接種后所有的質(zhì)粒免疫旱獺恩替卡韋聯(lián)合質(zhì)粒免疫的旱獺以及未處理的對照動物及其部分僅用恩替卡韋處理的旱獺46均不出現(xiàn)病毒血癥。結(jié)論1旱獺的遺傳背景及病毒的接種劑量影響WHV感染的結(jié)局傳代病毒接種產(chǎn)生與原代病毒感染類此的感染結(jié)局。2建立了旱獺T細胞應(yīng)答的檢測方法為旱獺WHV感染模型應(yīng)用于HBV感染的免疫發(fā)病機制研究及評估免疫治療策略提供研究手段。3早期應(yīng)用抗病毒藥物和或抗病毒藥物聯(lián)合DNA疫苗可以抵御WHV的初次感染且部分或全部旱獺產(chǎn)生了有效的保護性免疫應(yīng)答可以抵御WHV的再次感染。本研究的創(chuàng)新點及意義1旱獺廣泛分布在我國西北特別是青藏高原與土撥鼠種系線粒體DNA序列分析發(fā)生十分接近近年已經(jīng)報道中國旱獺對WHV有易感性因此WHV感染旱獺模型非常適合于研究嗜肝病毒的急慢性感染。2首次在旱獺WHV感染模型體內(nèi)建立T淋巴細胞應(yīng)答的檢測方法包括CFSE染色檢測淋巴細胞增殖CD107A及流式細胞術(shù)分析特異性CTL應(yīng)答REALTIMERTPCR檢測細胞因子表達為旱獺模型的進一步推廣應(yīng)用提供研究手段。3首次利用WHV感染旱獺模型研究早期應(yīng)用抗病毒藥物和或抗病毒藥物聯(lián)合DNA疫苗對WHV感染過程的影響為探討HBV感染后的早期免疫應(yīng)答及保護性免疫應(yīng)答的產(chǎn)生提供重要的實驗依據(jù)并為HBV意外或針刺暴露者提供新的干預(yù)方案。

簡介：目的巨噬細胞炎性蛋白1?。∕IP1?。┦勤吇蜃又蠧C亞家族成員，可特異性地趨化單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞向炎癥部位遷移，參與許多炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展過程。本實驗研究MIP1Α在病毒性心肌炎（VM）小鼠心肌和血清中表達的動力學(xué)特征，探討其在VM發(fā)病學(xué)中的作用。方法取BALBC小鼠75只，隨機分為兩組，心肌炎組65只，對照組10只。心肌炎組小鼠每只腹腔注射01ML內(nèi)含1102TCID50柯薩奇B3病毒（CVB3）的EAGLE’S培養(yǎng)液，對照組小鼠每只腹腔注射不含病毒的EAGLE’S培養(yǎng)液01ML。心肌炎組分別于接種病毒后3、7、15、30D隨機取10只小鼠，對照組小鼠于接種后30D，稱體重（BW）后處死，摘取心臟并稱重（HW），計算HWBW，并留取血清標(biāo)本。HE染色觀察心肌病理改變，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）及WESTERNBLOTTING分別檢測各組小鼠心肌MIP1ΑMRNA及蛋白表達，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清MIP1Α濃度及心肌白細胞介素1Β（IL1Β）、腫瘤壞死因子?。═NFΑ）含量，并對心肌炎組MIP1Α蛋白表達及血清MIP1Α濃度與心肌病變積分進行相關(guān)性分析。結(jié)果1心肌炎組小鼠死亡率為3846％（2565），對照組小鼠無死亡。2對照組小鼠心肌組織形態(tài)正常；心肌炎組感染后3D心肌無炎性細胞浸潤，7、15、30D心肌組織均出現(xiàn)心肌壞死、炎性細胞浸潤等病理改變，其中以7D最明顯。3心肌炎組730D各時點HWBW均明顯高于對照組，而3D與對照組比較，差異無顯著性。4心肌炎組接種病毒后7、15、30D血清MIP1Α濃度均顯著高于對照組，而3D與對照組比較，差異無顯著性。5對照組小鼠心肌組織有一定量的MIP1ΑMRNA表達，心肌炎組接種病毒后7、15、30D其表達水平升高，與對照組比較，差異均有顯著性，3D與對照組相比變化不明顯。6對照組MIP1Α蛋白呈弱表達，心肌炎組小鼠于感染后7DMIP1Α表達最明顯，1530D其表達逐漸下降，但仍高于對照組，而3D與對照組比較，差異無顯著性。7心肌MIP1Α蛋白表達水平與心肌病理積分的相關(guān)性心肌炎組心肌MIP1Α蛋白表達水平與心肌病理積分呈顯著正相關(guān)。8血清MIP1Α濃度與心肌病理積分的相關(guān)性心肌炎組小鼠血清MIP1Α濃度與心肌病理積分呈顯著正相關(guān)。9心肌炎組730D各時點心肌IL1Β、TNFΑ含量較對照組顯著升高，但3D與對照組比較，差異無顯著性。結(jié)論1MIP1Α可能參與VM發(fā)病過程，其機制可能與促進炎癥細胞向心肌浸潤及增加IL1Β、TNFΑ分泌有關(guān)；2血清MIP1Α濃度能反映心肌炎的嚴重程度，可作為心肌炎病情判斷的一個血清學(xué)指標(biāo)。

簡介：目的構(gòu)建編碼縫隙連接蛋白CONNEXIN30CX30的致病基因GJB6及其3種突變體的慢病毒過表達載體，并分析其在人永生化角質(zhì)形成細胞HACAT中的表達。資料與方法構(gòu)建GJB6基因及其突變體G11R、A88V、V37E的過表達慢病毒載體，轉(zhuǎn)染入293T細胞，應(yīng)用熒光倒置顯微鏡、REALTIME定量PCR法QPCR、WESTERNBLOT等檢測其表達情況，并轉(zhuǎn)染HACAT細胞，在熒光倒置顯微鏡下觀察熒光表達及蛋白的初步定位。結(jié)果成功構(gòu)建了該基因野生型及突變體慢病毒表達載體，并將G11R和A88V突變體成功轉(zhuǎn)染HACAT細胞。構(gòu)建及轉(zhuǎn)染過程中發(fā)現(xiàn)野生型重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞后有強熒光顯示，WB檢測強陽性條帶3種突變型重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞后，A88V突變型轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)觀察到較強熒光，G11R有弱熒光，而V37E突變型未觀察到熒光或較弱，但WB檢測均有弱陽性條帶，說明目的基因有表達但較野生型低。將構(gòu)建的G11R和A88V突變體慢病毒表達載體轉(zhuǎn)染HACAT細胞，可觀察到弱的熒光V37E突變型未觀察到熒光或較弱，且有HACAT細胞大量死亡現(xiàn)象。結(jié)論野生型GJB6轉(zhuǎn)染HACAT細胞后蛋白能夠定位于細胞膜，3種突變體中只有G11R和A88V突變體可定位于細胞膜但其編碼的CX30表達量較少，初步推測不同GJB6突變體或不能定位于角質(zhì)形成細胞膜或不能形成功能性的CX30，影響了角質(zhì)形成細胞正常的增殖和分化。

簡介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文EB病毒VCA和EBNAI重組抗原的表達及其在鼻咽癌診斷中的應(yīng)用EXORES“OFRECOMBINANTANTIG“～CAANDEBNALDRESSIONOLRECOMDINANTANUGENOIV乙GENESOFEPSTEINBARRVIRUSANDAPPLICATIONOFTHEPRODUCTSINASCREENINGTESTFORPATIENTSWITHNASOPHARYNGEAL●CARCINOMA專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)博士研究生胡波導(dǎo)師朱振宇教授答辯委員會主席答辯委員會成員本課題獲廣東省科技攻關(guān)項目2007年4月廣州夕夕資助中山大學(xué)博士論文中文摘要有的片段特異性較高，但靈敏度不夠，導(dǎo)致漏檢。因此，正確認識各片段在NPC中的診斷價值，去除特異性差的片段以避免假陽性，合理組合特異性高的片段，通過檢測不同的NPC特異性抗體，利用檢測信號的疊加使靈敏度得以提高，是制備高質(zhì)量NPC血清學(xué)診斷試劑的關(guān)鍵。2、由于EBV抗體檢測試劑的質(zhì)量不如人意，所有該類檢測試劑均未能取得國家藥監(jiān)部門的批準生產(chǎn)文號，無法實現(xiàn)檢測的標(biāo)準化和檢測結(jié)果的評價。檢測質(zhì)量管理長期以來處于空白狀態(tài)，嚴重影響到檢測結(jié)果的準確性。為克服以往NPC試劑檢測抗原的缺點，在靈敏度和特異性兩個指標(biāo)上達到理想的檢測效果，我們選擇VCA蛋白復(fù)合物中的GPL25和P18的編碼基因BALF4和BFRF3以及EBNAI基因作為目的基因，采用大腸桿菌和畢赤酵母表達系統(tǒng)分別構(gòu)建表達VCABALF4、EBNALAA390641和VCABFRF3的工程菌株，以期獲得具有免疫反應(yīng)性的重組抗原，同時使用表達的重組抗原作為包被抗原制備ELISA試劑檢鋇INPC病人VCA／IGA和EBNAI／IGA抗體，并比較單獨和聯(lián)合使用重組抗原檢測NPC病人VCA／IGA和NAL／IGA抗體的靈敏度和特異性，如靈敏度和特異性仍無法滿足要求，我們將在此基礎(chǔ)上，嘗試根據(jù)抗原表位預(yù)測和多肽合成的方法對EBV抗原表位進行篩選并選用含有主要抗原決定簇的抗原片段研制EBV抗體檢測試劑以期能改善檢測抗原質(zhì)量，提高NPC血清學(xué)檢測的靈敏度和特異性，并探討重組抗原在NPC免疫檢測中的應(yīng)用。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下第一部分EB病毒VCA和EBNAI基因片段在大腸桿菌中的表達、純化及初步應(yīng)用以EBVDNA為模版，通過PCR獲得目的基因片段BALF4S1008BP，BFRF3531BP和EBNAL759BP，與原核表達載體PGEX一5X一1連接，成功構(gòu)建PGEX5XBALF4S、PGEX一5XBFRF3和PGEX一5XEBNAL的工程菌株，在大腸桿菌BL21DE3中表達GST／BALF4S、GST／BFRF3和GST／EBNAL重組融合蛋白，重組蛋白的分子量分別為63KDA、44KDA、54KDA。產(chǎn)物經(jīng)SDSPAGE、免疫印II