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簡介：福建醫(yī)科大學碩士學位論文分類號分類號R73962R73962學校代碼學校代碼1039210392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼105112105112學號21210030102121003010密級級公開公開碩士學位學位論文論文病毒感染及相關免疫因子與鼻內翻性乳頭狀瘤發(fā)病關病毒感染及相關免疫因子與鼻內翻性乳頭狀瘤發(fā)病關系的研究系的研究RRESEARCHOFVIRUSINFECTIONRELATEDIMMUNITYRRESEARCHOFVIRUSINFECTIONRELATEDIMMUNITYFACTFACTSS’SINFLUENCEONNASALINVERTEDPAPILLOMASINFLUENCEONNASALINVERTEDPAPILLOMA二○一五○一五年六月學位類型型臨床型醫(yī)學碩士臨床型醫(yī)學碩士所在學院院第一臨床第一臨床醫(yī)學院學院申請人姓名申請人姓名楊云華楊云華學科學科、專業(yè)專業(yè)耳鼻咽喉科學耳鼻咽喉科學導師師林昶教授教授研究起止日期研究起止日期20142014年6月至月至20142014年1212月答辯委員會主席答辯委員會主席李瑞玉李瑞玉教授教授答辯日期期20152015年6月2日福建醫(yī)科大學碩士學位論文目錄英文縮寫英文縮寫1

簡介：探討慢加急性重型乙型病毒性肝炎ACUTEONCHRONICHEPATITISBLIVERFAILURE，ACHBLF患者血清干擾素Γ（IFNΓ）水平及其與病情嚴重指標的關系，并研究IFN?；騿幼蛹谆癄顟B(tài)對IFNΓ分泌水平的影響，以明確二者在慢加急性重型乙型病毒性肝炎發(fā)病機制中的作用。慢加急性重型乙型病毒性肝炎ACUTEONCHRONICHEPATITISBLIVERFAILURE，ACHBLF患者20例，慢性乙型肝炎CHRONICHEPATITISB，CHB患者15例，為2008年6月至2009年12月在山東大學齊魯醫(yī)院肝病科住院和門診患者。慢加急性重型乙型病毒性肝炎診斷符合2006年肝衰竭診療指南，慢性乙型病毒性肝炎診斷符合2000年第十次全國病毒性肝炎及肝病學術會議修訂的病毒性肝炎防治方案中的診斷標準。正常對照10例，來自健康人群志愿者。用酶聯(lián)免疫吸附法ELISA測定研究對象血清中的IFNΓ的水平，并將IFNΓ的水平與病情嚴重指標TBIL、PTA、ALT、HBVDNA及MELD評分進行相關分析；用甲基化特異性PCR法METHYLATIONSPECIFICPCR，MSP測定IFNΓ基因啟動子的甲基化狀態(tài)，分析甲基化對IFNΓ水平的影響。統(tǒng)計學分析采用SPSS130軟件包進行，結果用均數±標準差（X±S）表示，組間差異采用兩組獨立樣本資料的T檢驗或卡方檢驗，相關分析采用PEARSON線性相關分析。P1ACHBLF患者組與CHB患者組比較，血清IFNΓ水平明顯升高P2在ACHBLF患者組中，血清IFNΓ水平與血清TBIL水平呈明顯正相關R0804，P3在ACHBLF患者組中，血清IFNΓ水平與MELD評分呈明顯正相關R0645，P4ACHBLF患者組與CHB患者組相比，IFN?；騿幼蛹谆潭让黠@降低P5在ACHBLF患者組及CHB患者組中，甲基化組與非甲基化組相比，血清IFNΓ水平明顯降低P1在慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者中，血清IFNΓ水平明顯高于CHB患者，并且血清IFNΓ水平與血清總膽紅素TBIL呈明顯正相關，與PTA呈明顯負相關，與MELD評分呈明顯正相關。提示IFNΓ可能參與慢加急性重型乙型病毒性肝炎的發(fā)病，并且可能是慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者病情嚴重程度的指標之一。2慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者及慢性乙型肝炎患者的IFN?；騿幼拥募谆潭让黠@高于正常對照者。提示IFN?；騿幼蛹谆瘏⑴c慢性HBV感染的疾病進程。在慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者組及慢性乙型病毒性肝炎患者中，甲基化組與非甲基化組相比，血清IFNΓ水平明顯降低P3ACHBLF患者組與CHB患者組相比，IFNΓ基因啟動子甲基化程度明顯降低P005，提示IFNY基因啟動子的異常甲基化，可能參與了慢加急性重型乙型病毒性肝炎的發(fā)病。

簡介：乳頭瘤病毒PAPILLOMAVIRUSPV感染宿主皮膚和粘膜上皮能引起多種惡性及良性增生PV主要晚期蛋白L1能誘導宿主產生中和性、針對衣殼蛋白的特異性抗體是進行預防性免疫的主要靶抗原在該研究中我們探討了優(yōu)化密碼對BPVL1基因蛋白表達和免疫原性的影響為PV相關疫苗乃至其它病原體有效疫苗的研制進行初步探索該研究構建野生型和優(yōu)化密碼的人源化牛乳頭瘤病毒BPV晚期基因L1GFP融合基因真核表達質粒通過檢測在人角質形成細胞HACAT等不同哺乳動物細胞中的表達狀況自細胞水平探討優(yōu)化密碼對晚期基因L1蛋白表達的影響綜上所述該研究選用人角質形成細胞為主要研究對象首次探討了優(yōu)化密碼L1基因在HACAT細胞中的表達狀況并在幾種不同的哺乳動物細胞中較為全面地進行了研究得到了一致的結論即優(yōu)化密碼能提高PVL1基因在哺乳動物細胞中的表達水平同時對優(yōu)化密碼的機制進行了初步探討認為在人角質形成細胞中L1蛋白表達水平的提高可能主要是由于翻譯的增加所致通過此項研究為有效的PVL1預防性疫苗的研制奠定了實驗基礎及有效的PVL1基因DNA免疫途徑的探索提供了實驗基礎

簡介：江南卷柏SELAGINELLAMOELLENDFIIHIERON是卷柏科卷柏屬植物江南卷柏的干燥全草，為常用中草藥與民族藥1。具有清熱解毒、抗癌、止血之功效，用于癌癥、肺炎、急性扁桃體炎、眼結膜炎和乳腺炎等癥2。云南彝族主要用于治療黃疸型肝炎、肺結核咯血、全身浮腫等癥。鄂西土家族尚用于癌癥、腹瀉、淋病、小兒驚風、吐血、便血、崩漏、痔瘡出血，外用則治燒燙傷、外傷出血。并且，以本品為原料制得的江南卷柏片對原發(fā)性血小板減少性紫癲、過敏性紫癲、繼發(fā)性紫癲及多種出血癥均有良效3。目前，中外植物化學工作者已從卷柏屬植物中分離出黃酮類、生物堿類、酚類、有機酸類、氨基酸及多糖類等多種化學成分4。其研究工作主要集中在植物的乙酸乙酯及正丁醇萃取部位，并從前者中成功分離了幾十個黃酮類化合物，且除芹菜素外大多為雙黃酮類5。其中，穗花杉雙黃酮AMENTOFLAVONE不僅含量通常為最高，且最早即被1971年OKIGAWA，等人從卷柏中分離得到6。我們課題組從卷柏屬植物分離得到19個雙黃酮化合物、1個黃酮類化合物和1個黃酮苷化合物，其中5個為新化合物，15個成分為首次從這些植物中發(fā)現，它們都具有一定程度抑制XOD、LOX或和COX2的活性；發(fā)現穗花衫雙黃酮、羅波斯塔黃酮和羅波斯塔黃酮4ˊ甲醚3種雙黃酮成分為卷柏屬植物共同的特征性成分，它們具有不同程度的抗氧化、抗病毒或抗腫瘤活性，是共同的活性指標成分。其中從江南卷柏的活性部位分離得到了6個雙黃酮類化合物，經鑒定為雞毛松雙黃酮A7，4′，7″TRIOMETHYLROBUSTAFLAVONE，Ⅰ、雞毛松雙黃酮B7，7″DIOMETHYLROBUSTAFLAVONE，Ⅱ、羅波斯塔黃酮4′甲醚4OMETHYLROBUSTAFLAVONE，Ⅲ、羅波斯塔黃酮ROBUSTAFLAVONE，Ⅳ，扁柏雙黃酮HINOKIFLAVONE，Ⅴ和穗花杉雙黃酮AMENTOFLAVONE，Ⅵ。其中，化合物ⅠⅤ為首次從江南卷柏中分離得到，化合物Ⅰ和Ⅱ雞毛松雙黃酮A和B屬于羅波斯塔黃酮類，只被報道發(fā)現于裸子植物羅漢松科羅漢松屬的雞毛松PODOCARPUSIMBRICATUS，這是首次從其它植物和卷柏屬植物中分離得到7。研究中還發(fā)現，卷柏屬植物江南卷柏、細葉卷柏及薄葉卷柏等均具有良好的體外抗柯薩奇病毒效果8。其中，江南卷柏的乙酸乙酯提取物不僅可直接殺死病毒，還能有效抑制病毒的生物合成9。而乙酸乙酯部位的主要特征成分之一是黃酮類化合物，故我們從江南卷柏藥材中提取出有效部位總黃酮成分，并考察其工藝和質量，從而初步制定江南卷柏總黃酮提取物的制備工藝與質量標準。然后，以此提取物進行了多次體外和體內抗柯薩奇病毒CVB3和單純皰疹病毒HSVⅠ的研究，取得了肯定且可靠的效果。首先，在江南卷柏提取物制備工藝方面，我們通過單因素試驗考察其粗提方法，確定為乙醇回流法；再以總黃酮提取量和浸膏得率為考察指標，用正交試驗法對乙醇回流提取工藝進行考察，確定其最佳工藝條件為藥材9倍量的85％乙醇回流提取2次，每次1小時；接著以穗花杉雙黃酮提取量和浸膏得率為考察指標，用正交試驗法對醇提物的石油醚脫脂工藝進行考察，確定其最佳工藝條件為用原藥材6倍量的石油醚回流提取2次，每次1小時；脫脂后以低濃度稀醇溶液溶解過濾，再用大孔樹脂進行純化分離，得到最終產品總黃酮粉末。具體即以總黃酮的含量和回收率為考察指標，通過單因素試驗對樹脂的型號、藥材上樣量、洗脫劑濃度和體積、洗脫流速及樹脂重復使用次數進行考察，確定其最佳工藝為用D101型大孔樹脂對其進行吸附純化，樹脂量藥材量為31，以8BV70％乙醇溶液在2BVH的流速進行洗脫，樹脂的重復使用次數為3次。在江南卷柏提取物質量標準方面，以紫外分光光度法和高效液相色譜法對提取物的總黃酮含量及穗花杉雙黃酮含量進行測定，并進行方法學考察，規(guī)范以上述制備工藝所制得總黃酮提取物，其總黃酮含量不少于500％，穗花杉雙黃酮含量不少于350％。同時，我們還制定了江南卷柏藥材的質量標準，確定其名稱、來源、性狀，鑒別、含量測定、炮制、性味歸經、功能與主治、用法與用量及貯藏。在含量測定中，是以穗花杉雙黃酮為對照品，采用高效液相色譜法，測定穗花杉雙黃酮的含量，并進行了方法學考察。最后暫定本品以干燥品計含穗花杉雙黃酮不得少于030％。接著，對江南卷柏提取物的體外抗病毒作用進行了研究。我們選擇柯薩奇病毒CVB3及單純皰疹病毒HSVⅠ，根據其復制周期，設計藥物抗病毒作用的三種途徑抗病毒吸附、對病毒直接滅活、對病毒增殖的抑制作用，分三個處理組進行試驗。細胞毒性試驗表明，江南卷柏提取物的TC50為60ΜGML。故在此范圍內確定5，10，20，30，40，50ΜGML作為藥物終濃度進行抗病毒試驗。實驗結果顯示，抗CVB3效果方面，其直接滅活病毒作用的IC50為36ΜGML，最高病毒抑制率為60％，TI為17；其抑制病毒增殖作用的IC50為16ΜGML，最高病毒抑制率為70％，TI為38。抗HSVⅠ效果方面，其直接滅活病毒作用的IC50為21ΜGML，最高病毒抑制率為80％，TI為29；其抑制病毒增殖作用的IC50為12ΜGML，最高病毒抑制率為90％，TI為51。實驗結果說明江南卷柏提取物不僅細胞毒性較低，且具有較好的直接殺死病毒和抑制病毒生物合成的作用，其生物效價較高。最后，我們對江南卷柏提取物在體內抗柯薩奇病毒的療效進行了重點研究。小鼠的動物急性毒性試驗表明，當以02ML10G一次性灌胃、給藥濃度依次為40，50，63，79，10MGG時，其死亡率分別為10％，30％，60％，80％，100％，故確定江南卷柏標準提取物的LD50為62MGG。則在此范圍內確定09，03，01MGG作為高、中、低三種藥物濃度進行抗病毒治療。選取小鼠KMSPF級雄性，體重10±2G作為試驗動物，用02MLCVB3原液TCID50為107腹腔注射建立了病毒感染誘發(fā)小鼠病毒性心肌炎致病模型，然后分別設立高、中、低三種濃度的藥物治療組，正常對照組，病毒模型對照組和阿昔洛韋陽性藥物對照組，于病毒感染后24H開始治療，采取灌胃給藥形式，每日一次，其余各組則采用生理鹽水灌胃，每日一次，連續(xù)治療15天。結果表明，當藥物濃度為01MGG時，其治愈率為30％，死亡率為50％；當藥物濃度為03MGG時，其治愈率為50％，死亡率為20％；當藥物濃度為09MGG時，其治愈率為70％，死亡率為10％。綜合各項考察指標，結果顯示總黃酮提取物能有效抑制柯薩奇病毒在小鼠體內的增殖，保護其臟器組織，明顯減輕發(fā)病癥狀，推遲死亡時間，降低死亡率，治療呈現明顯的量效關系。本文研究發(fā)現，江南卷柏提取物的細胞毒性TC50為60ΜGML和動物毒性LD50為62MGG均較小，在體外有顯著抑制柯薩奇病毒和單純皰疹病毒增殖的作用，體內能有效地治療柯薩奇病毒感染誘發(fā)的病毒性心肌炎小鼠，是一種新的潛在性有效的抗柯薩奇病毒和單純皰疹病毒的藥物。江南卷柏在民間已經用于多種病毒性疾病，本研究為治療危急性的病毒性心肌炎提供了新的依據和希望，為抗病毒藥物的研究開發(fā)，提供了新的選擇。

簡介：同型半胱氨酸是體內一種含硫氨基酸，同型半胱氨酸被認為是與老化相關的疾病，如心血管疾病的風險因子，因此研究同型半胱氨酸對預防和治療這些疾病具有重要的意義。糖尿病和認知功能障礙都隨著年齡增大患病率提高，研究表明糖尿病和認知功能障礙可能存在共同的發(fā)病機理，但是糖尿病和認知功能障礙的這種相關性缺少流行病學研究證據。已有研究表明高同型半胱氨酸血癥可能提高認知功能障礙和糖尿病的發(fā)病率，但研究結果并不一致。飲食和營養(yǎng)因素對疾病的預防起重要作用，合理的膳食可能會減少疾病的發(fā)生率。鑒于以上幾點，本博士課題以臺灣老人營養(yǎng)和健康調查受試者為研究對象，采用前瞻性隊列研究，橫斷面研究等人群研究方式，運用COX比例風險模型，回歸模型等營養(yǎng)流行病學研究方法，研究認知功能障礙是否提高2型糖尿病的發(fā)生風險研究血漿同型半胱氨酸濃度對認知功能障礙，對2型糖尿病的發(fā)生及死亡風險的影響并研究飲食及B族維生素等在其中可能起的作用。主要研究結果發(fā)現1女性如果患認知功能障礙，2型糖尿病發(fā)生風險明顯提高，校正相關變量后，女性患認知功能障礙受試者糖尿病的發(fā)生風險為正常認知功能受試者的243倍（風險比為243，95％的可信區(qū)間為127463）。膳食多樣化，適當運動可以降低女性認知功能障礙患糖尿病的風險2血漿同型半胱氨酸濃度和認知功能障礙的發(fā)生不存在顯著相關性。以血漿同型半胱氨酸濃度＜93ΜMOLL為對照組，血漿同型半胱氨酸濃度＞145ΜMOLL患認知功能障礙的比值比為14，95％可信區(qū)間為050393糖尿病患者血漿同型半胱氨酸平均濃度并沒有比非糖尿病患者高3血漿同型半胱氨酸濃度與認知功能狀態(tài)對死亡風險存在顯著性交互作用4血漿同型半胱氨酸與2型糖尿病對死亡風險存在交互作用。以無糖尿病且血漿同型半胱氨酸濃度＜15ΜMOLL為對照組，2型糖尿病患者血漿同型半胱氨酸濃度＜15ΜMOLL死亡風險為對照組的137倍風險比為137，95％的可信區(qū)間為103181，2型糖尿病患者血漿同型半胱氨酸濃度≥15ΜMOLL時，死亡風險為對照組的173倍（風險比為173，95％的可信區(qū)間為118246）。5魚類攝取，血漿葉酸、維生素B6水平和血漿同型半胱氨酸濃度顯著負相關膳食多樣性，維生素B2和B6的攝取及血漿維生素B1和B2的濃度與認知功能顯著相關。結論臺灣老人營養(yǎng)和健康調查研究結果發(fā)現血漿同型半胱氨酸濃度與認知功能障礙和2型糖尿病發(fā)生不存在顯著相關性，但血漿同型半胱氨酸濃度和認知功能障礙以及血漿同型半胱氨酸濃度和2型糖尿病對死亡風險存在顯著交互作用，共同影響死亡風險的大小，膳食多樣化和適量B族維生素可以降低血漿同型半胱氨酸濃度，可以降低認知功能障礙的發(fā)生及降低死亡風險。

簡介：點擊查看更多加減甘露消毒丹抗鴨乙型肝炎病毒的實驗研究.pdf精彩內容。

簡介：杭州師范大學碩士學位論文多媒體學習條件下信念對元認知監(jiān)控的影響多媒體學習條件下信念對元認知監(jiān)控的影響論文評閱人評閱人2評閱人3評閱人4評閱人5論文作者簽名指導教師簽名答辯委員會主席霎暈壘墊煮嵫委員1委員2委員3委員4委員5答辯日期邊魚杭州師范大學碩士學位論文多媒體學習條件下信念對元認知監(jiān)控的影響致謝從研L哥LJ入校開始，我的導師程素萍老師就一直給予我學習上的幫助。猶記得我第一次參加組會的時候，師姐們報告論文，程老師對她們進行指導。當時我對心理學研究所知甚少，她們的專業(yè)和嚴謹給我留下很深的印象，也在我的心中樹立了學術研究的榜樣。之后我也開始在組會上報告自己的想法和看到的文獻，程老師常啟發(fā)我思考，督促我閱讀更多的文獻，這對我最終找到自己的畢業(yè)論文選題幫助很大。在我找到選題之后，也曾走過彎路，也曾停滯不前，這時候程老師總會把我混亂的思路理清，使我漸漸明確自己想要表達和解決的問題。除了程老師之外，我的室友李揚、郭瑞雪和張曉霞也在我做研究的過程中給我很多幫助。我找選題的時候，她們是我隨時可以請教的朋友；我做試驗的時候，她們是我義無反顧的測試員；我寫論文的時候，她們是我并肩作戰(zhàn)的同志。在她們的幫助下，我在做研究的道路上感到了被陪伴和被溫暖。還有，我的朋友丁云、何濤和宋曉偉也在研究中給了我許多意見和建議。在他們的幫助下，我學會了使用眼動儀。在實驗和寫論文的過程中跟我遇到了一些問題，他們都熱心的幫我解答，讓我最終克服了困難，順利完成實驗。在這些老師、朋友和同學的幫助下，我完成了我的論文。更重要的是，因為有了他們，我的三年研究生生涯得以圓滿和完整。

簡介：點擊查看更多人乳頭瘤病毒E6與p53家族成員的作用及其致癌機理的研究.pdf精彩內容。

簡介：浙江大學醫(yī)學院碩士學位論文宮頸癌人乳頭瘤病毒基因型分布及與臨床病理關系的研究姓名陳仲波申請學位級別碩士專業(yè)婦產科學指導教師呂衛(wèi)國20090401浙江大學碩I學位論文摘要感染型別。因此，深入研究各地區(qū)HPV基因型流行狀況，有助于確定宮頸癌發(fā)生的高危因素、高危人群，為政府制定預防政策提供依據，也為本地區(qū)HPV疫苗的推廣、研發(fā)提供理論依據。臨床分期、淋巴結轉移、宮旁或陰道浸潤、病理類型、組織分化、脈管累及和深聞質浸潤是影響宮頸癌預后的重要臨床病理指標，目前已有部分研究發(fā)現HPV基因型與宮頸癌患者的預后有關，但相關研究尚少，且國內未見該方面的研究報道。本研究以病理證實的宮頸癌患者為研究對象，利用導流雜交基因芯片技術HYBRIMAX對上述研究對象的宮頸脫落細胞進行HPV基因型的分型檢測，探討本地區(qū)官頸癌HPV感染的型別分布及各基因型感染與宮頸癌臨床病理特征關系。二、材料與方法選擇2007年1月～2008年12月在浙江省腫瘤醫(yī)院就診并經病理學確診的1169例浸潤性宮頸癌患者為研究對象，均為漢族婦女。對上述研究對象的宮頸脫落細胞用導流雜交基因芯片技術進行21種HPV基因型的分型檢測，并分析HPV基因型與宮頸癌患者臨床病理特征之問的關系。三、結果1，1169例宮頸癌中共檢測到1072例存在HPV感染，HPV陽性率為91。70％，其中高危HPV陽性率為9153％，低危HPV陽性率為488％。經檢測902例被單一HPV基因型感染，占77，16％；170倒樣本存在多重HPV基因型的混合感染，占1454％；其中二重感染143例，占1223％；三重感染15例，占128％；四重感染9例，占O。77％；五重感染3例，占O。26％。在檢測到的19種HPV基因型中，HPVL6是感染最多的基因型，共726例，占6210％，HPVL8是該組病例中位于第二位的基因型，共128例，占1095％，其次是HPV58，占1052％123／1169，JV

簡介：目的感染乙型肝炎病毒（HBV）者可產生不同的結局如病毒攜帶狀態(tài)、慢性肝炎、肝硬化和肝癌導致這些差異的機制不僅與遺傳和HBV感染引起的免疫狀態(tài)有關而且與病毒基因變異關系密切HBV基因組變異可使機體產生不同的病理變化而HBV基本核心啟動子（BCP）基因區(qū)NT1762A→T和NT1764G→A聯(lián)合變異的發(fā)生率高其臨床和生物學意義也較重要已成為近年研究熱點有關BCP區(qū)雙變異的報道不少而得出的結論存在爭議已知TNFΑ為一重要肝損因子可介導一系列炎癥反應與肝病的發(fā)生、發(fā)展密切相關BCP區(qū)雙變異的致病是否由TNFΑ介導與TNFΑ有無相關性國內外尚無有關報道為探討二者的關系該研究檢測了HBVBCP雙變異情況并分析戎有關文獻同時檢測了血清TNFΑ值并作相關分析結論（1）該地區(qū)慢乙肝患者HBVBCP雙變異與病變程度有關BCP區(qū)雙變異并未終止HBEAG的生成卻增加了HBV復制（2）TNFΑ與肝功損傷及病變程度呈正相關與HBVBCP區(qū)雙變異有顯著相關性（3）檢測HBVBCP區(qū)雙變異和TNFΑ值對病情估計、預后推測、重癥肝炎的防治可能有一定參考價值

簡介：目的1從2008年7月至2009年3月濟南市手足口病患者的臨床糞便標本中分離得到病原體并對其進行鑒定。2對所分離到的EV71分離株的5’UTR區(qū)基因序列VP4蛋白基因編碼序列和VP1蛋白基因編碼序列進行序列測定對所獲得的核酸序列所進行比對分析其基因特征并進行基因分型。3為了提供疫苗研究和免疫學檢測試劑的研發(fā)基礎對EV71的VP1進行原核表達并對其進行初步鑒定。方法1EY71的分離和鑒定標本的采集和處理均按照中國疾控中心的手足口病標本采集及檢測技術方案進行操作使用三種細胞系MA104、VERO和RD對標本中的病毒進行分離。分離獲得的病毒毒株使用RTPCR法進行分子生物學鑒定鑒定時使用腸道病毒通用引物、腸道病毒71型特異性引物和柯薩奇病毒A16型特異性引物進行鑒定。2EVT1的基因分型和基因特征分析使用引物EVP1S和EVP1A對VP1編碼基因進行RTPCR擴增使用引物EVG1S和EVG1A對5’UTR區(qū)和VP4編碼基因進行RTPCR擴增將擴增后獲得的DNA克隆至PMD18T載體上后進行測序。所獲得的基因序列使用BIOEDIT和MEGA4軟件進行分析并構建進化樹。3重組EV71VP1蛋白的原核表達使用引物EVPLA和EVPLS對VP1編碼基因進行擴增并構建重組載體PET30AVP1將其轉化大腸桿菌TRANSETTA后獲得工程菌。使用IPTG對工程菌進行誘導獲取基因工程蛋白使用WESTERNBLOT法和抗HIS標簽單克隆對工程蛋白進行初步鑒定。結果1EV71的分離與鑒定共從13例糞便標本中使用細胞分離共獲得了7株病毒經RTPER鑒定后其中6株為腸道病毒71型1株為柯薩奇病毒A16型。2EV71的基因分型和核酸序列分析獲得了6株EV71分離株的VP1編碼基因序列和2株EV71分離株的5’UTR及VP4編碼基因序列序列分析結果表明所分離得到的6株病毒與中國大陸流行的大部分EV71病毒相對應的核酸序列具有極高的同源性在進化樹上與大部分中國大陸地區(qū)的EV71分離株均位于同一大的分支上屬于C4亞型但與早期的EV71C4亞型分離株位于不同的小進化分支上。3重組EV71VP1蛋白的原核表達經IPTG誘導后在含有重組載體的大腸桿菌中表達了工程蛋白并使用抗6HIS抗體對該蛋白進行了鑒定鑒定結果呈陽性。結論1在2008年7月至2009年3月期間流行手足口病流行期間腸道病毒71型為主要病原體但并非唯一病原體在此期間流行的EV71主要為C4亞型但已經與早期中國大陸地區(qū)分離的C4亞型分離株有了一定的分化。2重組EV71VP1蛋白在大腸桿菌TRANSETTA獲得了成功表達。

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簡介：流感病毒是嚴重危害人類的呼吸道傳染病原體曾多次引起世界流感大流行。它是單鏈負鏈RNA病毒其基因由8段RNA組成編碼11種蛋白血凝素HA神經氨酸酶NA基質蛋白M1離子通道蛋白M2非結構蛋白NS1和NS2核蛋白NUCLEOPROTEINNP凋亡前體蛋白PB1F2和RNA依賴性RNA聚合酶PAPB1和PB2等。核蛋白NP為流感病毒顆粒的重要組成部分由498個氨基酸組成分子質量約56KD的多肽是甲型流感病毒RNA的第5節(jié)段基因編碼的RNA結合蛋白與多聚酶蛋白及病毒單鏈的RNA相互作用形成螺旋對稱的RNP復合體。RNP復合體與依賴RNA的多聚酶一起成為病毒基因組復制與轉錄必不可少的結構。NP也是細胞毒性T淋巴細胞識別的主要抗原。所以甲型流感病毒核蛋白基因可以作為防治流感病毒的一個主要靶點目的本實驗通過構建甲型流感病毒APR834H1N1核蛋白基因的真核表達質粒轉染HELA細胞并檢測HELA細胞內NP的表達情況為進一步研究核蛋白的功能和相關理化作用及對核蛋白的影響奠定基礎。方法根據NCBI數據庫已發(fā)表的甲型流感病毒APR834H1N1GENBANKNCBGI8486129毒株的核蛋白基因全長序列用PRIMERPRIMIER5軟件設計兩條NP的特異引物并加酶切點用特異引物從甲型流感病毒CDNA中采用PCR技術克隆出NP基因酶切后將其插入到真核表達質粒PCDNA31。構建好的重組質粒PCDNA31NP經酶切、PCR、測序鑒定。將構建好的PCDNA31NP用脂質體轉染法轉染HELA細胞用甲型流感病毒檢測試劑盒FLUARAPIDTESTKIT檢測檢測HELA細胞內外NP的表達情況。結果經PCR克隆出的甲型流感病毒APR834H1N1NP基因經酶切連接后構建一個新的重組質粒PCDNA31NP該質粒經酶切、PCR、測序鑒定均表明成功構建了PCDNA31NP。構建的質粒含一個核苷酸長度為1432BP的基因和APR834H1N1GENBANKNCBGI8486129有98％的同源性。重組質粒轉染HELA細胞后用甲型流感病毒檢測試劑盒檢測到24H、48H、72H細胞內外NP的蛋白表達。結論成功構建甲型流感病毒APR834H1N1核蛋白基因的真核表達質粒PCDNA31NP。并且通過試劑盒檢測能在HELA細胞中表達。為進一步研究理化因素對該基因的影響和該基因的結構和功能打下基礎。

簡介：南京醫(yī)科大學碩士學位論文逆轉錄病毒載體介導的CD自殺基因對KSHV腫瘤轉化基因K12誘導NIH3T3轉化細胞的殺傷作用姓名唐桂霞申請學位級別碩士專業(yè)微生物學指導教師盧春20050420南京醫(yī)科大學碩士學忙淪史檢測結果顯示，5FC作用后的N爪12／FF細胞的凋亡率與作用前相比增加了46％；同時，經5FC作用后的N／K12／FF細胞的生長周期發(fā)生了明顯變化，表現為GOG1期細胞比率降低，S和G2一M期細胞比率增高。5FC使N／K12／FF細胞的增殖主要阻滯在S期。IHC檢測結果表明，N／K12／FF細胞在5FC使用后的FAS和FASL表達水平均明顯高于5FC使用前的水平。上述研究結果表明，KSHVK12基因具有體外轉化細胞和體內誘導腫瘤形成的能力；CD／5FC在體外對KSHV腫瘤轉化基因K12誘導的NIH3T3轉化細胞具有殺傷作用，凋亡有可能介導了部分殺傷過程。提示，CD／5一FC系統(tǒng)有可能成為治療KS的一種新的有效的方法?！娟P鍵詞】卡波濟肉瘤相關皰疹病毒KSHV，腫瘤轉化基因K12，CD／5一FC系統(tǒng)，逆轉錄病毒載體，凋亡

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