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簡介：研究背景與目的SV40大T抗原是由SV40病毒早期編碼區(qū)編碼的一種多功能磷酸蛋白在病毒復(fù)制過程中發(fā)揮著重要作用。SV40大T抗原具有活化宿主細(xì)胞核糖體基因、誘導(dǎo)DNA合成、修飾蛋白質(zhì)合成起始因子等作用并且能結(jié)合、調(diào)控某些關(guān)鍵性的細(xì)胞調(diào)控蛋白如視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白家族成員如PRB、腫瘤抑制因子P53等誘導(dǎo)多種細(xì)胞的永生化。通過對SV40大T抗原介導(dǎo)的永生化細(xì)胞系的深入研究發(fā)現(xiàn)SV40大T抗原基因與宿主細(xì)胞DNA穩(wěn)定整合重組后不但能在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)SV40大T抗原加快轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長速率同時也能保留原始細(xì)胞的許多分化表型具有相對穩(wěn)定的增殖特性和功能狀態(tài)而非原始基因的表達(dá)很少見。因此通過建立SV40大T抗原所介導(dǎo)的永生化細(xì)胞系不僅有助于了解細(xì)胞的增殖與衰老的分子機(jī)制為我們攻克腫瘤和延緩衰老提供理論依據(jù)。同時可多次傳代的永生化細(xì)胞以其具有的相對穩(wěn)定的增殖特性和功能狀態(tài)可以作為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞應(yīng)用在細(xì)胞工程和組織工程等研究領(lǐng)域的。本課題擬構(gòu)建含有重組SV40大T抗原基因的慢病毒表達(dá)載體PLENTIGFPTAG轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞系293FT獲得重組慢病毒通過感染真核細(xì)胞觀察所構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體在宿主細(xì)胞內(nèi)的整合情況及所攜帶的SV40大T抗原的表達(dá)對宿主細(xì)胞傳代的作用為研究和建立SV40大T抗原介導(dǎo)下的永生化細(xì)胞系奠定基礎(chǔ)。方法以含有SV40大T抗原基因的質(zhì)粒為模板通過PCR克隆出SV40大T抗原基因作為靶基因?qū)谢蜻B接到PGEMTEASY載體上以PGEMTTAG克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)ECOLIJM109利用AMP抗性和藍(lán)白篩選試驗篩選出含有所需的PGEMTTAG質(zhì)粒的白色菌落以T7SP6為引物擴(kuò)增靶基因來確認(rèn)所需的陽性克隆并進(jìn)行DNA測序以確認(rèn)克隆的靶基因的準(zhǔn)確性將重組質(zhì)粒PGEMTTAG和慢病毒載體PLENTIGFP同時用BAMHⅠ酶切電泳膠回收純化后對線性載體PLENTIGFP進(jìn)行羥化處理再將線性載體PLENTIGFP與靶基因SV40大T抗原基因連接以重組載體PLENTIGFPTAG轉(zhuǎn)化感受態(tài)ECOLIDH5Α將培養(yǎng)出的菌落以亞克隆鑒定引物L(fēng)1T2為引物鑒定出陽性克隆正插重組子。將篩選出的陽性克隆表達(dá)載體PLENTIGFPTAG與慢病毒輔助包裝載體共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生出慢病毒顆粒。以慢病毒顆粒感染家兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞通過觀察重組慢病毒所攜帶的EGFP基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及進(jìn)行RTPCR的檢測確認(rèn)重組慢病毒與宿主細(xì)胞的整合和SV40大T抗原基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。其后進(jìn)行感染細(xì)胞的連續(xù)傳代培養(yǎng)觀察SV40大T抗原對細(xì)胞傳代生長的作用。結(jié)果1靶基因的擴(kuò)增及電泳分析以含有SV40大T抗原基因的質(zhì)粒為模板目的基因擴(kuò)增引物T1T2為引物通過PCR技術(shù)擴(kuò)增得到與SV40大T抗原基因片段大小相符的約2154BP的基因片段電泳分析證實。2靶基因的克隆及鑒定靶基因與PGEMTEASY載體連接后組成重組質(zhì)粒PGEMTTAG經(jīng)由轉(zhuǎn)化感受態(tài)ECOLIJM109藍(lán)白篩選試驗后隨機(jī)選取其中的4個陽性菌落以克隆鑒定引物T7SP6為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增均得到大小約為2330BP的基因片段為陽性克隆再由DNA測序后確認(rèn)與SV40大T抗原基因序列一致。3靶基因的亞克隆及重組子的鑒定將羥化后的PLENTIGFP雙粘質(zhì)粒與雙粘靶片段SV40大T抗原基因相連接組成重組子PLENTIGFPTAG轉(zhuǎn)化感受態(tài)ECOLIDH5Α后對4個陽性克隆以亞克隆鑒定引物L(fēng)1T2為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增其中有3個克隆的擴(kuò)增產(chǎn)物大小約為2274BP為陽性克隆正插重組子。4重組慢病毒的包裝純化及滴定將篩選出的陽性克隆表達(dá)載體PLENTIGFPTAG與慢病毒輔助包裝載體PΔ82和PVSVG共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞4872小時后離心獲得PLENTIGFPTAG包裝的慢病毒病毒滴度為24106IUML。5重組慢病毒的感染及靶基因的表達(dá)在表達(dá)TAG的慢病毒感染家兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞48小時后觀測到綠色熒光蛋白在細(xì)胞內(nèi)的廣泛表達(dá)空白對照組未發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步通過RTPCR檢測到表達(dá)TAG的慢病毒感染組細(xì)胞內(nèi)有SV40大T抗原MRNA的高水平表達(dá)對照組均為陰性。6SV40大T抗原對細(xì)胞生長的作用表達(dá)TAG的慢病毒感染組細(xì)胞培養(yǎng)至第10代依然生長良好。對照組細(xì)胞5代后全部死亡。表明PLENTIGFPTAG包裝的慢病毒感染兔BMSCS細(xì)胞后可以顯著提高原代培養(yǎng)兔BMSCS細(xì)胞的傳代次數(shù)。結(jié)論本試驗利用分子生物學(xué)方法成功構(gòu)建了攜帶有SV40大T抗原基因的慢病毒表達(dá)載體PLENTIGFPTAG并在包裝成為慢病毒后成功的實現(xiàn)了對真核細(xì)胞感染觀察到SV40大T抗原在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。進(jìn)一步觀察到PLENTIGFPTAG能夠有效延長真核細(xì)胞傳代的次數(shù)。通過此項研究可以為進(jìn)一步研究和建立SV40大T抗原介導(dǎo)下的永生化細(xì)胞奠定基礎(chǔ)。

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文人乳頭病毒16型外殼蛋白高效表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及目的蛋白的表達(dá)；HPV16型病毒蛋白血清學(xué)檢測對宮頸前病變病情監(jiān)測價值的初步探討姓名李楠申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師章文華200151中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士研究生論文感染，病毒僅停留于感染部位的上皮細(xì)胞內(nèi)，不產(chǎn)生病毒血癥，且病毒基因組的高水平表達(dá)及病毒顆粒的產(chǎn)生僅發(fā)生于宮頸復(fù)層鱗狀上皮表層的終末分化細(xì)胞，與免疫系統(tǒng)不能充分接觸，機(jī)體的免疫應(yīng)答輕微；HPV難以在體外培養(yǎng)，目前尚不能在實驗條件下產(chǎn)生足夠用于血清學(xué)分析抗原制備的乳頭瘤病毒，而病變組織中病毒顆粒的含量又很低。雖然大量的工作已部分地克服了以上困難，但血清學(xué)方法用于宮頸癌及C1N病情監(jiān)測的研究結(jié)論卻不甚一致。本文以HPVL6為例就研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。1．抗原來源1．1人工合成的病毒蛋白的多肽【8，91。這方面研究較多的是HPVL6的E6、E7和LL蛋白。一些實驗室分別合成了一系列氨基酸序列首尾重疊的短肽，覆蓋蛋白的全序列，以其免疫動物獲得抗血清，用基因工程表達(dá)的完整蛋白包被ELISA板或轉(zhuǎn)移于纖維素膜上檢測抗血清，或用完整蛋白免疫動物取得的抗血清檢測系列短肽，由此確定該蛋白的B細(xì)胞表位，再以確定含有特定表位的肽或直接以系列短肽檢測人血清，確定某些抗體與疾病的相關(guān)性。然而，覆蓋全長的多個短肽仍有可能無法檢出僅存在于完整蛋白序列中的表位，且合成肽成本較高?1。1．2以基因重組技術(shù)用細(xì)菌表達(dá)的融合或非融合蛋白【IOQ21。這種方法得到的蛋白序列比較完整。由于原核表達(dá)產(chǎn)量高，操作簡便，成本低，產(chǎn)品易于純化，在HPV病毒蛋白，尤其是對晚期蛋白研究的早期，融合蛋白的研究較廣泛，學(xué)者們利用細(xì)菌表達(dá)的蛋白做WESTERNBLOT，以及利用純化的蛋白做ELISA進(jìn)行血清學(xué)研究，但許多實驗室研究結(jié)果差異較大，主要原因是表達(dá)的病毒蛋白的氨基酸序列完整性不同；攜帶的菌體蛋白可能與人體內(nèi)的細(xì)菌抗體產(chǎn)生非特異反應(yīng)融合蛋白多以包涵體形式獲得，使用時為變性蛋白形式，影響了病毒蛋白構(gòu)象表位的形成。1．3體外轉(zhuǎn)錄和翻譯的病毒蛋白113,15,49。這種蛋白接近病毒蛋白的天然構(gòu)

簡介：點擊查看更多CA16病毒的分離鑒定檢測及規(guī)?；囵B(yǎng)與純化方法研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號密級UDC編號10736碩士學(xué)位論文音樂誘發(fā)情緒對認(rèn)知控制的影響研究生姓名張婧指導(dǎo)教師姓名、職稱向玲副教授專業(yè)名稱應(yīng)用心理研究方向臨床心理咨詢與治療二〇一四年五月II鄭重聲明本人的學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立撰寫并完成的，學(xué)位論文沒有剽竊、抄襲、造假等違反學(xué)術(shù)道德、學(xué)術(shù)規(guī)范和侵權(quán)行為，否則，本人愿意承擔(dān)由此而產(chǎn)生的法律責(zé)任和法律后果，特此鄭重聲明。學(xué)位論文作者（簽名）2014年5月30日

簡介：該課題主要目的基質(zhì)降解是目前主動脈疾病研究的一個新熱點該實驗旨在構(gòu)建攜帶抑制血管壁細(xì)胞外基質(zhì)降解的基因基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑2TIMP2的復(fù)制型缺陷型重組腺病毒載體ADTIMP2在體外研究證實其能夠有效轉(zhuǎn)染主動脈平滑肌細(xì)胞SMC成功表達(dá)TIMP2蛋白質(zhì)并對血管SMC具有抑制增殖、侵襲作用的基礎(chǔ)上構(gòu)建大鼠腹主動脈瘤模型將腺病毒溶液直接灌注到主動脈局部觀察到腹主動脈瘤形成過程中細(xì)胞外基質(zhì)降解的作用該課題主要方法1攜載TIMP2基因的腺病毒載體PADEASY1TIMP2的構(gòu)建從含有TIMP2目的基因的質(zhì)粒PGEMTIMP2中純化回收目的基因繼而再將其定向插入到復(fù)制缺陷型腺病毒載體PADEASY1通過酶切鑒定挑選重組正確的克隆應(yīng)用電穿孔法轉(zhuǎn)染感受態(tài)細(xì)胞通過脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組腺病毒轉(zhuǎn)進(jìn)HEK293包裝細(xì)胞進(jìn)一步大量制備重組腺病毒并純化和測定滴度同時對其使用的安全性進(jìn)行評價2ADTIMP2體外轉(zhuǎn)染主動脈平滑肌細(xì)胞及其對靶細(xì)胞的作用分離培養(yǎng)大鼠主動脈SMC以不同MOI值的ADTIMP2轉(zhuǎn)染SMC應(yīng)用免疫熒光染色標(biāo)記被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞測定轉(zhuǎn)染效率以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR和WESTERN雜交分別檢測ADTIMP2轉(zhuǎn)染SMC后TIMP2MRNA的轉(zhuǎn)錄及TIMP2蛋白的表達(dá)以酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中TIMP2蛋白的分泌用MTT法測定ADTIMP2轉(zhuǎn)染大鼠主動脈SMC后TIMP2對細(xì)胞增殖能力的影響采用體外侵襲小室BOYDENCHAMBER的方法研究TIMP2對SMC侵襲能力的影響應(yīng)用凝膠酶譜學(xué)分析ZYMOGRAPHY的方法檢測了ADTIMP2轉(zhuǎn)染后SMC分泌MMPS的改變還檢測了目的基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡程度的改變3ADTIMP2轉(zhuǎn)染抑制主動脈基質(zhì)降解的作用用豬胰腺彈力蛋白酶灌注法建立大鼠腹主動脈瘤模型于主動脈局部灌注高濃度ADTIMP2重組腺病毒溶液注藥后14天測定主動脈直徑改變組織病理學(xué)觀察主動脈炎癥反應(yīng)和基質(zhì)降解程度抗TIMP2、MMP2抗體免疫組織化學(xué)染色檢測TIMP2及MMP2蛋白在主動脈組織中的表達(dá)應(yīng)用組織原位雜交技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后主動脈組織中的TIMP2MRNA及MMP2MRNA的表達(dá)情況該課題主要結(jié)論如下1利用細(xì)菌內(nèi)同源重組的方法能夠高效的構(gòu)建攜載目的基因的重組腺病毒載體重復(fù)性好流程相對簡單所得到的重組腺病毒滴度高、純度好、毒性低2我們構(gòu)建的攜帶TIMP2基因的腺病毒載體能高效地轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的大鼠主動脈SMCSMC能夠表達(dá)、分泌TIMP2蛋白轉(zhuǎn)染后SMC分泌活性MMPS的能力減低TIMP2基因具有明顯抑制血管SMC增殖和遷移的作用3應(yīng)用彈力蛋白酶灌注法建立的大鼠腹主動脈瘤模型更接近人類腹主動脈瘤的病理改變首次應(yīng)用TIMP2基因轉(zhuǎn)染大鼠主動脈并證明其能夠明顯抑制主動脈基質(zhì)降解和動脈瘤形成

簡介：鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文重組人P53腺病毒對胃癌細(xì)胞生長及化療敏感性的實驗研究姓名王晚萍申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師周云樊青霞20070509鄭州大學(xué)2007屆碩士學(xué)位論文摘要重組人P53腺病毒對胃癌細(xì)胞生長及化療敏感性的實驗研究藥性是限制其臨床應(yīng)用的一個主要原因。本研究的目的是研究重組人053腺病毒感染不同P53狀態(tài)胃癌細(xì)胞，觀察外源053基因在胃癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，對腫瘤細(xì)胞周期阻滯與凋亡的影響，以及對胃癌細(xì)胞化療敏感性的作用和機(jī)制。為開辟新的胃癌治療途徑，更好的使用TAD053治療胃癌，提高胃癌的臨床療效尤其是RAD053與化療藥物的科學(xué)聯(lián)合應(yīng)用提供可靠的實驗基礎(chǔ)。材料與方法1．細(xì)胞選用三種攜帶不同P53狀態(tài)人胃癌細(xì)胞系BGC823即含野生型P53基因的細(xì)胞略寫為W、含突變型P53基因的細(xì)胞略寫為M．含空載質(zhì)粒即053基因缺失的細(xì)胞略寫為NEO。2．實驗藥物選用RAD053RECOMBINANTADENOVIRUSP53RAD053、順鉑CIS．DISMINEDIEHOROPLATINUM，DDP，紫杉醇PACLITAXEL，TAX。3．MTT比色法測定不同濃度的單藥及聯(lián)合用藥作用細(xì)胞的生長抑制率，并繪制生長曲線。4．流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的周期分布和凋亡率。5．免疫細(xì)胞化學(xué)與WESTERNBLOTTING法檢測感染TADP53細(xì)胞中053蛋白表達(dá)。6．統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSSL0．0統(tǒng)計軟件，統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差X．4S表示，計量資料滿足正態(tài)性，方差齊時多組均數(shù)間比較行單因素方差分析ONEWAYANOVA，均數(shù)間的兩兩比較采用LSD方法；每組處理前后的比較用配對T檢驗；P≤0．05具顯著性。結(jié)果1．免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測顯示5107VP／MLRADP53感染三種胃癌細(xì)胞48H后，P53蛋白陽性表達(dá)于瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。NEO對照組細(xì)胞未見P53表達(dá)，而W和M對照組細(xì)胞則呈弱陽性表達(dá)。RADP53作用W細(xì)胞48H后，實驗組P53的蛋白表達(dá)的陽性率50．20±4．84％顯著高于對照組14．15_3．44％P0．001；RADP53作用M細(xì)胞48H后，實驗組P53的蛋白表達(dá)的陽性率63．744．21％顯著高于對照組30．80_5．32％P0．001；TAD053作用NEO細(xì)胞前未見P53表達(dá)，RAD053作用NCO細(xì)胞48H后，實驗組P53的蛋白表達(dá)的陽性率48．87±5．88％。Ⅱ

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)RNAI沉默PIK3CA基因?qū)β殉采掀ば园┘?xì)胞株SKOV3增殖和凋亡的影響姓名馮玉環(huán)申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師易建平吳小華20080301中文摘要慢病毒介導(dǎo)RNAI沉默PIK3CA基因?qū)β殉采掀ば园┘?xì)胞株SKOV3增殖和凋亡的影響摘要目的構(gòu)建靶向人PIK3CAP110A基因的RNAI慢病毒載體，體外轉(zhuǎn)染人卵巢上皮性癌細(xì)胞株SKOV3。應(yīng)用REALTIMEPCR檢測PIK3CA基因沉默效果；MTT檢測感染慢病毒后SKOV3細(xì)胞增殖能力的改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測慢病毒感染細(xì)胞后細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的變化。初步探討慢病毒介導(dǎo)RNAI沉默PIK3CA基因在卵巢癌基因治療中的應(yīng)用前景，以開辟治療卵巢癌的新途徑。方法1首先進(jìn)行PIK3CA基因RNAI靶點設(shè)計根據(jù)基本設(shè)計原則再結(jié)合RNAI效率預(yù)測公式，篩選出4條理論上最佳的SIRNA序列，同時選擇一個陰性對照靶點。將設(shè)計好的SIRNA序列編碼成SHRNA框架，化學(xué)合成5個靶點的DNA片段。’2SPAI和XHOI酶切PGCLGFP載體以使其線性化。3將合成的DNA雙鏈直接連入酶切后的PGCLGFP載體。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，PCR鑒定陽性克隆后送測序。4從大腸桿菌中提取陽性克隆PGCLGFPPIK3CA。5XHOI和SACII酶切真核表達(dá)載體PEGFPC1使其線性化。通過PCR從含有PIK3CA片段的質(zhì)?？寺∧０逯刑崛IK3CA片段，并用XHOI和SACII對其進(jìn)行酶切。6將PIK3CA片段酶切產(chǎn)物與酶切后的真核表達(dá)載體

簡介：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文縮略詞表縮寫詞英文全稱中文全稱AGVHDACUTEGRAFTVERSUSHOSTDISEASEACUTEMYELOIDLEUKEMIAACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAALLOGENICBASEPAIRBONEMARROWTRANSPLANTATION0LLLL一ESMLIPMCGVHDCHRONICGRAFTVERSUSHOSTDISEASECHRONICLYMPHATICLEUKEMIACHRONICMYELOIDLEUKEMIACYTOMEGALOVIRUSDEOXYRIBONUCLEICACID14DITHIOTHREITOLETHIDIUMBROMIDECL既CMVDNADTEB卜EDTAETHYLENEDIAMINETETRAACETICACIDGVHDGRAFTVERSUSHOSTDISEASEHRHOURMDSMYELODYSPLASTICSYNDROMEMILLILITERMULTIPLEMYELOMA急性移植物抗宿主病急性公性白血病急性淋巴細(xì)胞白血病異基因的堿基對骨妞移植慢性移植物抗宿主病慢性淋巴細(xì)胞白血病慢性觸性白血病巨細(xì)胞病毒脫氧核搪核酸14二硫代蘇糖醉澳化乙吮乙二胺四乙酸移植物抗宿主病小時骨妞增生異常綜合征毫升多發(fā)性骨髓瘤耐朋軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文異基因造血干細(xì)胞移植患者巨細(xì)胞病毒基因檢A、分型及與移植物抗宿主病的相關(guān)性中文摘要研究目的爵基因造血干細(xì)胞移植作為目前治愈白血病的唯一途徑，其技術(shù)方法日趨完善，移植過程的安全性逐步提高，但是如何降低移植后各種并發(fā)癥所導(dǎo)致的死亡率，提高患者移植后的生存質(zhì)量己成為造血干細(xì)胞移植領(lǐng)域的一項重要研究內(nèi)容。對異基因造血干細(xì)胞移植前后患者人巨細(xì)胞病毒感染的研究，可以用于臨床開展病毒檢測、感染預(yù)防和評價治療效果，從而降低人巨細(xì)胞病毒相關(guān)性疾病的病死率孫IIF人巨細(xì)胞病毒基因分型與臨床發(fā)生急性、慢性移植物抗宿主病相關(guān)性的研究，可作為臨床前瞻性預(yù)防治療的輔助指標(biāo)，降低移植相關(guān)性合并癥提高臨床移植水平。研究內(nèi)容II、人巨細(xì)胞病毒基因的檢測及分型人巨細(xì)胞病毒屬疤疹病毒科0亞科，是該科中最大的DNA病GB蛋自是巨細(xì)胞病毒的包膜搪蛋白，在病毒吸附和感染細(xì)胞過程‘，起重要作用。木實騙采用集式PCR方法擴(kuò)增編碼CMV病毒的GF3蛋自的部分DNA片段。共檢測標(biāo)本87份，對其中28份標(biāo)本用階切法進(jìn)行了基因分型，并對部分標(biāo)本進(jìn)行了基因測序。卜卜

簡介：目的觀察柯薩奇病毒BCVB心肌炎小鼠心肌組織微小RNA1初始體PRIMIRNA1、DICER1MRNA和連接蛋白43CX43表達(dá)變化，探討病毒性心肌炎VMC微小RNA1MIRNA1和CX43的關(guān)系及其意義。方法140只4周齡雄性BALBC小鼠隨機(jī)分為VMC組80只和對照組60只，VMC組根據(jù)不同觀察時間點分為7D亞組、14D亞組、28D業(yè)組、42D亞組各20只，每個VMC亞組設(shè)置相應(yīng)空白對照組各15只。VMC組每只小鼠腹腔注射CVB3NANCY株懸液01ML，對照組每只小鼠腹腔注射不含病毒的RPMI1640培養(yǎng)基01ML。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR檢測心室肌組織PRIMIRNA1、DICERLMRNA、CX43MRNA水平表達(dá)，免疫組織化學(xué)法檢測CX43蛋白水平表達(dá)。結(jié)果1VMC小鼠心室肌組織PRIMIRNA1、DICER1MRNA表達(dá)水平較對照組顯著升高均P001；CVB感染后14D小鼠心室肌組織PRIMIRNA1、DICER1MRNA表達(dá)水平最高；2VMC小鼠心室肌組織炎癥病灶中變性、壞死周圍心肌細(xì)胞CX43蛋白表達(dá)明顯減弱，甚至陰性，分布不規(guī)則；VMC小鼠心室肌組織CX43MRNA和蛋白表達(dá)水平較對照組均顯著降低均P001；3相關(guān)性分析顯示VMC小鼠心室肌組織的PRIMIRNA1與DICER1MRNA水平呈顯著正相關(guān)R0462，P001；與CX43MRNA水平呈顯著負(fù)相關(guān)R0360，P001；與CX43蛋白水平呈顯著負(fù)相關(guān)R0257，P005。結(jié)論CVB心肌炎小鼠心室肌組織PRIMIRNA1、DICER1MRNA水平表達(dá)上調(diào)，CX43蛋白表達(dá)下降，MIRNA1可能參與VMC的發(fā)病過程，并可能抑制CX43蛋白表達(dá)。

簡介：目的人巨細(xì)胞病毒HCMV是皰疹科Β屬病毒具有潛伏激活感染的生物學(xué)特性即通常呈潛伏感染免疫功能低下時出現(xiàn)活動性HCMV感染和HCMV疾病HCMV感染是異基因造血干細(xì)胞移植ALLOHSCT患者發(fā)病和死亡的重要原因該研究采用熒光定量PCR法檢測ALLOHSCT患者HCMVDNA旨在了解ALLOHSCT患者移植后HCMV的感染狀況探討熒光定量PCR方法檢測ALLOHSCT患者HCMV感染的臨床意義比較血漿熒光定量PCR和白細(xì)胞熒光定量PCR檢測有無差別方法2003年9月至2004年3月在華西醫(yī)院就診的20例ALLOHSCT患者采用熒光定量PCR法和血清學(xué)法同時進(jìn)行血漿HCMVDNA、白細(xì)胞HCMVDNA、血清HCMVIGG和HCMVIGM檢測其中6例ALLOHSCT移植后100天內(nèi)患者在移植前后進(jìn)行定點連續(xù)監(jiān)測并采用配對X2法對血漿和白細(xì)胞熒光定量PCR檢測作統(tǒng)計學(xué)比較結(jié)論該研究提示1HCMV感染是ALLOHSCT患者移植后的常見并發(fā)癥之一好發(fā)時間為移植后第二個月2熒光定量PCR法是早期檢測ALLOHSCT患者HCMV感染的有效方法血清學(xué)檢測不如熒光定量PCR法敏感3血漿HCMVDNA和白細(xì)胞HCMVDNA檢測尚無統(tǒng)計學(xué)差異

簡介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文EB病毒LMP1通過轉(zhuǎn)錄因子CJUNETS1間CROSSTALK調(diào)節(jié)金屬蛋白酶9表達(dá)的分子機(jī)制研究姓名曾亮申請學(xué)位級別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師曹亞20030501原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明。作者簽名靜南日期J。。；年‘月1日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。作者簽名摯南導(dǎo)師簽名日期年月日

簡介：學(xué)號2009020199姓名王敏聯(lián)系電話15275136146EMAILNIUMANER所在學(xué)院心理學(xué)院獨創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得（注如沒有其他需要特別聲明的，本欄可空）或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)校學(xué)校可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽字簽字日期20年月日簽字日期20年月日

簡介：分類號R3955密級一般UDC6122編號20061336廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文認(rèn)知行為療法認(rèn)知行為療法對矛盾性失眠的矛盾性失眠的作用作用申請人申請人許艷導(dǎo)師師李建華副教授申請學(xué)位級別申請學(xué)位級別醫(yī)學(xué)碩士年級二零零六級學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向研究方向睡眠論文提交日期論文提交日期2012年4月論文答辯日期論文答辯日期2012年6月學(xué)位類型學(xué)位類型醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)位學(xué)位授予單位學(xué)位授予單位廣州醫(yī)學(xué)院答辯委員會主席答辯委員會主席論文評閱人人二零一二年四月目錄中文摘要1英文摘要3中英文對照詞表6前言7研究對象與方法11結(jié)果17討論29結(jié)論36參考文獻(xiàn)37綜述40附錄45致謝49學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明50學(xué)位論文知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明51關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明51

簡介：目的1評估妊娠中晚期應(yīng)用替比夫定阻斷HBEAG且高病毒載量孕婦母嬰傳播的安全性及有效性。2評價妊娠中晚期替比夫定治療后對胎盤HBV感染的影響。方法1選擇孕20～32周HBEAG且HBVDNA10X107COPIES／ML孕婦按患者意愿分替比夫定組和對照組替比夫定組予替比夫定600MG／D口服抗病毒治療直至產(chǎn)后4周或產(chǎn)后繼續(xù)服用。兩組嬰兒產(chǎn)后均接受主被動聯(lián)合免疫0、15天注射乙肝免疫球蛋白200IU及0、1、6月注射乙肝疫苗20ΜG。嬰兒7月齡時HBSAG及HBVDNA陽性者為HBV宮內(nèi)感染。2收集38例HBEAG陽性且HBVDNA10X107COPIES／ML孕婦其中18例替比夫定治療足月分娩胎盤采用熒光定量PCR方法檢測胎盤組織HBVDNA定量。結(jié)果1共納入220例孕婦其中替比夫定組120例對照組100例。替比夫定治療者均在美國抗逆轉(zhuǎn)錄酶藥物妊娠登記處注冊。治療前兩組孕婦HBVDNA、HBEAG、ALT水平無統(tǒng)計學(xué)差異。分娩前替比夫定組HBVDNA定量降至251±175LOGLOCOPIES／ML明顯低于對照組778±058LOGLOCOPIES／MLP結(jié)論1HBEAGHBVDNA高滴度孕婦妊娠中晚期應(yīng)用替比夫定抗病毒治療能明顯降低母親外周血HBVDNA載量阻斷HBV母嬰傳播。妊娠中晚期應(yīng)用替比夫定具有良好的耐受性和安全性。乙型肝炎病毒攜帶者妊娠期替比夫定抗病毒治療分娩后4周停藥是安全的但需密切隨訪。慢性乙型肝炎患者妊娠期替比夫定抗病毒治療既可以降低孕婦血清HBVDNA載量減少HBV宮內(nèi)感染的發(fā)生；又可以改善患者肝功能異常情況大大增強患者對妊娠及分娩的耐受力。2妊娠中晚期替比夫定治療可以降低胎盤HBVDNA的含量但不能改變已發(fā)生的胎盤HBV感染。

簡介：為了實現(xiàn)激肽釋放酶基因在高血壓動物體內(nèi)長期、穩(wěn)定、安全的表達(dá)從而達(dá)到長期穩(wěn)定降壓的目的并觀察它對各種高血壓并發(fā)癥的預(yù)防作用我們將人類組織型激肽釋放酶基因克隆入重組腺相關(guān)病毒載體中并包裝成病毒顆粒獲得了足夠?qū)崿F(xiàn)生理表達(dá)量的病毒滴度（110PFUML）此后我們引進(jìn)了自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）模型隨機(jī)分成兩組每組6只分別經(jīng)尾靜脈注射RAAVHK（實驗組）和RAAVLACZ（對照組）每只注射110PFU注射后每周監(jiān)測動脈收縮壓每2周收集24小時尿同時觀察動物行為變化實驗周期為19周19周后經(jīng)過度麻醉殺死動物并取心、肝、腎、腦等組織作以下研究用RTPCR和ELISA檢測RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)和分布情況檢測尿中微量白蛋白的含量及變化主要臟器稱重并固定切片作形態(tài)學(xué)分析以觀察腎臟損傷情況和心血管重構(gòu)情況