高山被孢霉△6脂肪酸脫飽和酶基因的克隆及表達分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、γ-亞麻酸(γ-Linolenic acid,GLA)屬于n-6系列多不飽和脂肪酸,是合成前列腺素E1和E2的前體,在維持人的正常生理功能中起著重要作用。高山被孢霉是花生四烯酸高產菌株,在其生物合成途徑中含有γ-亞麻酸合成的關鍵酶-△6脂肪酸脫飽和酶。
   本文利用高山被孢霉W15為材料,克隆了△6脂肪酸脫飽和酶基因全長和△6脂肪酸脫飽和酶的cDNA序列,并對克隆的△6脂肪酸脫飽和酶基因進行了表達分析?!?脂肪酸脫飽和酶基因的

2、全長為2202bp,該序列長度在高山被孢霉中是國內外最新報道,與已報道的序列同源性最高達99%;結構分析表明,該序列含有兩個內含子,分別處于17-229bp和410-1024bp位置。以高山被孢霉W15 RNA為模板,通過RT-PCR擴增出可能的△6脂肪酸脫飽和酶基因,該基因全長為1374bp,推導的蛋白質序列編碼457個氨基酸,與報道的高山被孢霉△6脂肪酸脫飽和酶基因的同源性達到95%,其編碼的蛋白質N端具有典型的細胞色素b5結構域。

3、將該可能的△6脂肪酸脫飽和酶基因連接到畢赤酵母表達載體pPIC9K上,通過電穿孔法轉化到巴斯德畢赤酵母GS115中,1%的甲醇誘導轉化子表達外源基因,通過對轉化子油脂的氣相色譜分析,與γ-亞麻酸標準品做對照,有γ-亞麻酸峰的出現,證明插入的基因為△6脫飽和基因酶?!?脂肪酸脫飽和酶基因的克隆與成功表達,為進一步篩選到高產γ-亞麻酸的菌種并應用于工業(yè)化生產,或轉入油菜、大豆等油料作物中,以改變其脂肪酸組成,培育新型的作物品系提供前提和基礎

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