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簡介：中南大學碩士學位論文小檗堿對EPSTEINBARR病毒DNA復(fù)制的抑制作用姓名孟菁菁申請學位級別碩士專業(yè)臨床檢驗診斷學指導教師唐發(fā)清20090501碩士學位論文中文摘要培養(yǎng)基中LDH含量與空白對照組無明顯差異。0“10ITMOL／1確為BBR細胞無毒性濃度范圍NCC，下部實驗采用該濃度進行實驗。3巢式熒光定量PCR分析EBVDNA拷貝數(shù)結(jié)果表明，當BBR的濃度為401TMOL／1、10ITMOL／1、125KTMOL／L時處理RAJI細胞，細胞中EBVDNA拷貝數(shù)顯著降低尸O05。結(jié)論1MTT結(jié)果和LDH檢測結(jié)果均提示，0“10LAMOL／L為BBR的對RAJI細胞的細胞無毒性濃度。2BBR可以抑制RAJI細胞中EVBDNA的復(fù)制。3BBR在O～10LAMOL／1范圍對RAJI細胞生長分裂和細胞生理活動無明顯影響，在此濃度下BBR仍可以抑制RAJI細胞中EBVDNA的復(fù)制，這可能是BBR確切的藥理學作用而非毒性作用。這為使用BBR或者含BBR的中藥復(fù)方來防治鼻咽癌的提供了新的實驗依據(jù)。關(guān)鍵詞小檗堿EBVDNARAJI細胞鼻咽癌LI

簡介：手足口病HFOOTMOUTHDISEASEHFMD是由腸道病毒感染引起的一種嚴重的傳染病并呈現(xiàn)逐年高發(fā)態(tài)勢。近年發(fā)現(xiàn)HFMD主要病原體為腸道病毒71型ENTEROVIRUS71EV71兒童為EV71易感人群。兒童感染EV71后臨床表現(xiàn)形式多樣除典型的HFMD外還常表現(xiàn)出嚴重的中樞神經(jīng)疾病及肺水腫和或肺淤血等并發(fā)癥嚴重的甚至導致死亡。目前對于EV71感染引發(fā)HFMD的發(fā)生發(fā)展過程尚不清楚且缺乏有效的預(yù)防及治療方法常導致臨床醫(yī)療嚴重后果的發(fā)生因此明確HFMD病原全面分析EV71感染后病理改變探討發(fā)病機理以及研發(fā)安全、有效的HFMD疫苗成為預(yù)防和控制HFMD疾病暴發(fā)的有效手段之一。據(jù)此本論文從一例疑似HFMD的死亡案例出發(fā)從法醫(yī)病理學、分子病毒學、動物實驗等幾個方面對該病例及其致病病原EV71進行了深入的研究具體內(nèi)容有以下五個章節(jié)。第一章以文獻綜述的形式介紹了HFMD及EV71的研究背景主要包括HFMD的流行情況其主要病原體EV71的病毒學特點流行病學研究致病機理研究EV71感染的臨床診斷和治療疫苗的研究現(xiàn)狀實驗動物的選擇以及桿狀病毒表達系統(tǒng)的原理、技術(shù)路線及其作為基因工程疫苗載體的研究進展等。最后說明了本論文研究的內(nèi)容及意義。第二章利用常規(guī)法醫(yī)病理學分析方法對一例疑似HFMD致死案例進行了分析發(fā)現(xiàn)CNS病變明顯神經(jīng)細胞壞死、膠質(zhì)小結(jié)形成、炎細胞呈袖套樣浸潤肺水腫顯著、炎癥突出確認死因為病毒性腦炎及病毒性肺炎導致的急性呼吸、循環(huán)功能衰竭。在此基礎(chǔ)上利用RTPCR技術(shù)以國家CDC指導的EV71通用檢測引物證實病原體為EV71。隨后針對EV71保守區(qū)設(shè)計特異性引物進行巢式PCR擴增檢測了各病理組織的病毒載量利用抗EV71VP1蛋白的特異性多克隆抗體對石蠟切片進行免疫組織化學染色檢測了病毒抗原的組織分布。結(jié)果顯示此病例腦組織EV71病毒載量相對較高其中腦干和頸髓最高病毒抗原檢測陽性主要集中在CNS的神經(jīng)細胞及炎細胞為病毒感染復(fù)制的主要部位肺組織雖病變明顯水腫淤血突出但病毒核酸及抗原陰性并非病毒主要感染復(fù)制部位第三章自病毒載量最高的腦干組織出發(fā)在體外RD細胞上進行病毒的分離、傳代及空斑純化通過一步法生長曲線的方法了解不同株純化病毒的感染性差異同時利用EV71VP1基因的序列對病毒株進行基因分型。篩選出一株純化病毒擴增出核酸序列進行分段克隆獲得EV71病毒的全基因組并提交GENBANK。結(jié)果顯示腦干組織能成功分離到EV71XF活病毒在RD細胞上能產(chǎn)生腸道病毒特異性致細胞病變效應(yīng)CYTOPATHICEFFECTCPE透射電鏡能觀察到大小均勻、形態(tài)一致、直徑約2030NM的EV71病毒粒子。經(jīng)空斑純化后的四株病毒在體外RD細胞上感染性基本無差別VP1測序結(jié)果顯示均為C4亞型完成了一株病毒的全基因組測序基因組全長為7405BPGENBANK登錄號ACCESSIONNUMBER為JQ804832基因組序列提示此次感染病毒仍為國內(nèi)流行株C4亞型全基因組序列的測定將有利于后續(xù)的深入研究。第四章對純化的EV71XF病毒進行了建立小動物感染模型的初步摸索。通過顱腔注射INTRACRANIALINJECTIONIC的途徑使1日齡BALBC小鼠感染EV71XF病毒觀察其表現(xiàn)隔周采血對血清特異性抗體IGG及中和抗體進行檢測同時分離鼠腦組織中病毒再次接種1日齡小鼠獲得鼠適性毒株。結(jié)果發(fā)現(xiàn)1日齡BALBC小鼠能通過IC途徑感染EV71XF但無明顯的神經(jīng)系統(tǒng)受累表現(xiàn)血清抗體IGG在感染兩周后較高但仍處于亞中和抗體水平IC二次感染可以刺激小鼠產(chǎn)生更高濃度IGG并在RD細胞上表現(xiàn)出較好的特異性及交叉性中和保護作用母傳抗體的中和保護作用較強但時間短暫約4W齡時其保護作用消失反復(fù)多次鼠腦適應(yīng)可以得到感染性增強的鼠適株EV71XFAJQ但其毒力情況還需進一步研究。第五章利用桿狀病毒表達系統(tǒng)開展了EV71基因工程疫苗的初步研究。將編碼EV71XF的P1和3CD蛋白的基因分別克隆至PFASTBACDUAL載體的啟動子PPH和PP10下游的多克隆位點構(gòu)建重組PFASTBACDUALEV71XF3CDP1質(zhì)粒。重組質(zhì)粒與桿狀病毒BAC轉(zhuǎn)座后獲得重組BACBACEV71XF3CDP1。提取重組BACDNA轉(zhuǎn)染昆蟲SF9細胞獲得重組病毒重組病毒感染昆蟲細胞后表達的前體蛋白P1在蛋白水解酶3CD的剪切后自組裝為病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLEVLPS經(jīng)蔗糖及氯化銫密度梯度離心進行初步的純化WESTERNBLOT檢測目的蛋白表達與剪切透射電鏡觀察VLPS顆粒另外還構(gòu)建了新的穩(wěn)定表達3CD的細胞系SF93CD用于VLPS的構(gòu)建策略。結(jié)果顯示重組桿狀病毒ACBACEV71XF3CDP1在SF9細胞內(nèi)能同時表達前體蛋白P1和蛋白水解酶3CD3CD能正確剪切P1蛋白成為VP1等結(jié)構(gòu)蛋白并自組裝為VLPS經(jīng)蔗糖及氯化銫密度梯度離心等初步純化后WESTERNBLOT顯示VLPS具有VP1的抗原表位透射電鏡觀察VLPS的形態(tài)、大小及構(gòu)象均類似于天然的EV71病毒粒子可以作為EV71疫苗的候選物。SF93CD細胞系能穩(wěn)定表達3CD蛋白并剪切P1形成VLPS可以作為構(gòu)建VLPS的新途徑。綜合以上研究內(nèi)容本研究完成了一例疑似HFMD案例的法醫(yī)病理學分析確定了其致病病原為腸道病毒EV71并從病理組織中分離、純化到一株高活性的EV71XF病毒完成了該病毒株的病毒感染活性檢測、全基因組序列測定、小鼠感染性試驗以及基因工程疫苗等初步研究。該研究為致死性EV71病毒感染的組織病變過程的解析和機理研究提供了重要的實驗數(shù)據(jù)也為EV71病毒的基因工程疫苗研究奠定了基礎(chǔ)對預(yù)防和控制HFMD的工作作出了重要貢獻。

簡介：福建醫(yī)科大學碩士學位論文睡眠剝奪對大鼠血漿去甲腎上腺素、多巴胺、五羥色胺及認知功能的影響姓名鐘靜瑜申請學位級別碩士專業(yè)老年醫(yī)學指導教師黃俊山20100301結(jié)論1、睡眠剝奪影響體內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量，使血漿中NE、5一HT水平明顯升高，DA水平下降。2、睡眠剝奪使機體的認知功能下降。3、體內(nèi)NE、DA、5一HT含量的改變可能與睡眠一覺醒周期存在一定的聯(lián)系。4、睡眠剝奪對認知功能的影響可能與體內(nèi)NE、DA、5一HT含量的改變相關(guān)。關(guān)鍵詞睡眠剝奪去甲腎上腺素多巴胺五羥色胺認知功能6

簡介：研究背景越來越多的研究證據(jù)表明慢性病毒感染性疾病抗病毒免疫應(yīng)答過程中CD127在CD8T細胞上的表達提示效應(yīng)CD8T細胞中有效分化成為了記憶細胞的亞群。CD127在CD8T細胞上的表達可作為一個預(yù)測慢性病毒感染性疾病進展狀況的重要標記。研究目的本研究的目的是檢測慢性乙型肝炎CHB患者各種CD8T細胞亞群上的CD127的表達水平探究記憶性CD8T細胞CD127的表達水平與血清病毒載量HBVDNA及乙型肝炎病毒E抗原HBEAG之間的關(guān)系。同時探究聚乙二醇干擾素Α2A和替比夫定抗病毒治療對CHB患者記憶性CD8T細胞CD127分子表達的影響。方法120例HBEAG陽性慢性乙肝患者接受聚乙二醇干擾素Α2A治療每周180ΜG皮下注射持續(xù)治療至48周并隨訪24周。20例HBEAG陽性的慢性乙型肝炎患者HLAA2陽性服用替比夫定每天600MG口服共48周。2新鮮采集外周靜脈血EDTAK2抗凝24H內(nèi)進行外周血分離PBMC四色直接免疫熒光標記法檢測CD8、CD45RA、CD27、CD127在淋巴細胞上的表達。外周血CD8T細胞根據(jù)CD45RA、CD27的表達情況分類。3檢測HBV特異性CD8T細胞頻率全血或PBMCCD3設(shè)門檢測CD8中HBVCE1827ENV183191特異性T淋巴細胞頻率以及HBV特異性CD8T細胞CD127表達頻率。結(jié)果1慢性乙肝患者在CD45RACD27中心記憶性CD8T細胞上CD127的表達較正常對照相比明顯降低P＜005其表達水平與慢性血清HBVDNA水平和HBEAG呈負相關(guān)。2聚乙二醇干擾素Α2A抗病毒治療后療效較佳者隨著HBVDNA和HBEAG水平下降記憶性CD8T細胞表面的CD127分子表達明顯增加而療效不佳者則無明顯變化P＜005。320例替比夫定治療CHB48周時檢測結(jié)果6例應(yīng)答充分HBVDNA陰轉(zhuǎn)和HBEAG血清轉(zhuǎn)換中心記憶性CD8T細胞的CD127表達逐漸增加至治療48周達到較高水平與無應(yīng)答者相比差異顯著。10例部分應(yīng)答HBVDNA在103拷貝ML和104拷貝ML之間或較治療前下降≥LOG2HBEAG陽性或陰性。中心記憶性CD8T細胞的CD127表達介于應(yīng)答充分者和無應(yīng)答者之間。4例無應(yīng)答HBVDNA≥105拷貝MLHBEAG仍陽性。中心記憶性CD8T細胞的CD127沒有明顯增加?？共《局委煈?yīng)答充分的CHB病毒特異性CD8T細胞重新獲得CD127的表達較治療前和無應(yīng)答者有顯著差異。結(jié)論1慢性乙型肝炎患者外周血中心記憶型CD8T細胞CD127表達顯著下降是慢性乙型肝炎患者細胞免疫缺陷的潛在機制之一。2CHB中心記憶性CD8T細胞CD127分子的表達與血清HBVDNA水平和HBEAG呈負相關(guān)。3有效的聚乙二醇干擾素抗病毒治療能使CHB患者有較多的CD8T細胞向記憶性細胞轉(zhuǎn)化增加記憶性CD8T細胞CDL27分子的表達。4替比夫定具有同樣的作用并能增加HBV特異性CD8T細胞CD127分子的表達。5檢測CHB病人記憶型CD8T細胞或HBV特異性CD8T細胞CD127分子的表達可以作為判斷抗病毒治療療效的重要指標可以幫助臨床醫(yī)師更好的制定抗病毒治療療程。

簡介：目的觀察在辨證論治、內(nèi)服湯藥扶正解毒合劑基礎(chǔ)上含化咽炎糖對病毒性心肌炎VMC“氣陰兩虧、熱毒內(nèi)蘊”型病例臨床治療效果的影響。方法選擇符合要求的病例其中有咽部病變者45例無咽部病變者45例分別隨機分配至甲乙丙三組每組病例總數(shù)30例。甲組給予西藥常規(guī)治療乙組給予扶正解毒合劑治療丙組給予扶正解毒合劑及含化咽炎糖治療。治療三個月后觀察治療前后臨床綜合療效、臨床表現(xiàn)療效、心電圖及左心室功能的變化。結(jié)果臨床綜合療效、臨床表現(xiàn)療效、心功能療效方面均顯示丙組明顯優(yōu)于乙組乙組明顯優(yōu)于甲組咽部癥狀療效甲乙兩組無明顯差異丙組較乙組療效明顯期前收縮療效甲組不理想乙組與甲組無顯著性差異丙組與甲組有顯著性差異。結(jié)論扶正解毒合劑對病毒性心肌炎VMC“氣陰兩虧、熱毒內(nèi)蘊”型患者療效良好配合咽炎糖含化治療后療效進一步顯著提高說明咽炎糖配合扶正解毒合劑咽心同治內(nèi)外并調(diào)是臨床治療VMC的有效途徑。

簡介：第二軍醫(yī)史學碩士學位論文NEURITIN慢病毒修復(fù)大鼠受損視神經(jīng)和RGC5的作用及機制PROFECTIVEEFFECTSANDMECHANISMOFNEURITIN。’、‘REPAIRINGINJ1RATOPTICUVEREXPRESSIONONREPINUREARATOPTICNERVEANDRGC5碩士研究生曹文珞碩士生導師許家軍教授導師組劉芳副教授張傳森教授楊向群教授專業(yè)名稱人體解剖與組織胚胎學培養(yǎng)單位第二軍醫(yī)大學解剖學教研室本課題受國家自然科學基金31271282資助二O一三年五月目錄摘要1ABSTRACT3縮略詞表一6第一部分NEURITIN在視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中的表達變化8】LL一、日U吾8二、實驗材料10三、實驗方法12一組織學切片一12二免疫組織化學一13三免疫熒光組織化學13四動物模型的制作一14五伊紅蘇木素皿染色15六視神經(jīng)順行束路追蹤15TZ透射電子顯微鏡觀察16八免疫印跡法WESTERNBLOT16九實時熒光定量PCR一18一十統(tǒng)計學分析一19四、結(jié)果一20一一NEURITIN在正常視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中的表達定位20二動物模型的建立一23一三NEURITIN在視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中的表達變化26五、討論一27一一NEURITIN在正常視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中的表達定位27。二建立視神經(jīng)不完全損傷模型一29三NEURITIN在視神經(jīng)受損后視網(wǎng)膜及視神經(jīng)中的表達變化29第二部分NEURITIN慢病毒對受損視神經(jīng)和RGC5的修復(fù)作用及機制31一、前言31一一、日U舌’JL一二、實驗材料一3L一三、實驗方法一36一目的基因片段獲取36一二慢病毒載體及NML基因的酶切連接和轉(zhuǎn)化37一三NML基因慢病毒質(zhì)粒的抽提及鑒定39

簡介：含氮化合物廣泛存在于自然界中，一些具有生物活性的天然產(chǎn)物、藥物等往往含有氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)。近年來，銅、鐵催化的ULLMANN偶聯(lián)反應(yīng)越來越受到研究者的關(guān)注，成為有機合成化學研究領(lǐng)域的熱點之一。用銅、鐵催化的ULLMANN偶聯(lián)反應(yīng)來構(gòu)建CN鍵進而合成氮雜環(huán)類化合物的研究引起了研究者廣泛的興趣。本文在ULLMANN偶聯(lián)反應(yīng)研究的基礎(chǔ)上，合成了三類氮雜環(huán)化合物。本文對氮雜環(huán)類抗病毒藥物合成方法進行了研究。主要內(nèi)容及成果如下⑴建立了一種合成苯并咪唑和1，2二取代苯并咪唑衍生物的新方法，原料分別是鄰鹵代乙酰苯胺和常見的脒類化合物，催化劑為CUBR，堿為CS2CO3，溶劑為DMSO，不加入任何配體，反應(yīng)體系簡單、高效。⑵建立了一種合成1，2，4苯并噻二嗪1，1二氧化合物的新方法，原料分別是鄰鹵代苯磺酰胺和常見的脒類化合物，催化劑為CUBR，堿為CS2CO3，溶劑為DMF，不加入任何配體。⑶建立了一種合成喹唑啉酮和1，2，4苯并噻二嗪1，1二氧化合物的新方法，原料分別是鄰鹵代苯磺酰胺與鄰溴苯甲酸的衍生物和常見的脒類化合物，催化劑為FECL3，堿為CS2CO3，溶劑為DMF，不加入任何配體，操作簡單，高效，環(huán)境友好，比以前的方法更加具有實用價值。⑷分別發(fā)現(xiàn)乙酰基、苯磺?；汪然摹班徫恍?yīng)”可以使該類CN鍵構(gòu)建的ULLMANN反應(yīng)在無配體條件下進行。⑸在優(yōu)化反應(yīng)條件的過程中，發(fā)現(xiàn)了無配體條件下，鐵催化氮芳基化反應(yīng)來構(gòu)建氮雜環(huán)的催化體系。這是目前為止首次報道該類無配體條件下的鐵催化氮芳基化反應(yīng)。

簡介：該研究的目的為探討治療慢性乙型肝炎的有效方法根據(jù)其本虛標實的病機特點提出治療慢性乙型肝炎健脾養(yǎng)肝、解毒活血之大法并精心選藥組方研制成參杞苡甘苓顆粒在臨床實驗取得較好療效的基礎(chǔ)上進一步探討該藥的治療機理方法采用反相間接血凝集實驗法觀察參杞苡甘苓顆?？挂腋尾《镜淖饔脤嶒炐孕∈蟾螕p傷進行保肝降酶及組織病理學觀察研究并與復(fù)方益肝靈片進行對照結(jié)果參杞苡甘苓顆粒對乙肝病毒有一定的抑制作用對CCL誘導的肝損傷有較好的保護作用可明顯降低ALT的釋放組織病理學觀察對肝損傷有明顯的改善且優(yōu)于對照組結(jié)論該文對乙肝病毒有一定的抑制作用在降酶降脂、保護肝臟、防止肝纖維化方面有良好的作用是治療慢性乙型肝炎的有效方劑

簡介：點擊查看更多細小病毒B19結(jié)構(gòu)蛋白VP1獨特區(qū)和VP1-VP2共同區(qū)主要抗原片段的原核表達、純化及血清學應(yīng)用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的流感作為一種病毒性急性呼吸道傳染疾病，嚴重威脅著全球范圍內(nèi)人類的健康，給國家和社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔。近年來，高致病性禽流感在全球范圍內(nèi)人群中的不斷爆發(fā)，使流感成為全球關(guān)注的首要公共衛(wèi)生問題之一。流感病毒神經(jīng)氨酸酶是存在于A型和B型流感病毒表面的一種包膜糖蛋白突起，在流感病毒的復(fù)制和感染周期中起著重要作用，其活性位點氨基酸殘基的高度保守性使之成為抗流感病毒藥物研究極具吸引力的分子靶標，是目前流感藥物研究開發(fā)的熱點之一。本研究從已有神經(jīng)氨酸酶抑制劑的構(gòu)效關(guān)系出發(fā)，設(shè)計并合成了一系列酰基硫脲衍生物，尋找具有較高抗病毒活性的先導化合物。方法苯甲酸衍生物是類具良好流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制活性的化合物，由于藥代動力學等問題限制了這類化合物的體內(nèi)活性。為尋找具有適當?shù)乃幋鷦恿W性質(zhì)、新型結(jié)構(gòu)骨架、活性較強的高選擇性流感NA抑制劑，利用基于片斷的藥物設(shè)計和骨架遷越方法，以取代苯甲酸為先導物，設(shè)計并合成了兩個系列的?；螂逖苌铩Ｒ栽敲醉f為參照配體，運用分子對接程序?qū)λ心繕嘶衔镞M行活性虛擬篩選。結(jié)果設(shè)計并合成了5個N′46二甲基嘧啶2基N取代苯甲?；螂逖苌锖?個N′46二甲基嘧啶2基N2E3取代苯基2丙烯?；螂逖苌铮渲?0個未見文獻報道。所有新化合物的結(jié)構(gòu)均經(jīng)1HNMR、MS和元素分析確證。虛擬篩選結(jié)果表明，除化合物YK5和YH3外，其余10個化合物在理論上均與流感病毒神經(jīng)氨酸酶有較好的結(jié)合能力。其中YK4、YH4、YH5和YH6的估計抑制常數(shù)KI與扎那米韋的接近或相當。對目標化合物與流感病毒NA作用模式的研究發(fā)現(xiàn)，目標化合物結(jié)構(gòu)中的?；傲螋驶c嘧啶環(huán)之間的氨基均與活性位點的氨基酸殘基形成氫鍵；取代的嘧啶環(huán)處于活性腔內(nèi)，與活性位點形成疏水作用。初步討論目標化合物的構(gòu)效關(guān)系發(fā)現(xiàn)，化合物結(jié)構(gòu)對活性有影響，以空間效應(yīng)為主。目標化合物苯環(huán)對位若連有較大體積的取代基，化合物對酶的抑制活性降低；間位引入疏水性給電子取代基，活性明顯增強。結(jié)論N′46二甲基嘧啶2基N取代?；螂逖苌锱c流感病毒神經(jīng)氨酸酶有較好的結(jié)合能力，具有潛在的神經(jīng)氨酸酶抑制活性。

簡介：人類免疫缺陷病毒HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS，HIV感染人體后，主要侵犯機體的免疫系統(tǒng)，引起其免疫功能缺失和崩潰，最終導致艾滋病ACQUIREDIMMUREDEFICIENCYSYNDROME，AIDS的發(fā)生。高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療（HIGHLYACTIVEANTIRETROVIRALTHERAPYHAART）通過抑制HIV病毒復(fù)制從而使患者免疫功能得到一定程度的恢復(fù)。本文觀察了HAART治療1年的HIVAIDS患者免疫重建效果以及相應(yīng)細胞因子的變化。本研究包括以下二部分第一部分高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療1年對HIVAIDS的免疫重建效果的觀察目的觀察HAART治療一年對HIV感染者和艾滋病患者抗病毒效果及免疫重建的效果。方法隨機選取經(jīng)HAART治療的HIVAIDS患者35例，同時選取35例健康志愿者為對照，分別于治療0、6、12月采集靜脈血，并相應(yīng)監(jiān)測治療對象的病毒載量和T細胞亞群的變化。結(jié)果35例患者在HAART治療半年病毒載量均降至檢測值以下。此外，CD4童貞細胞在治療6月、12月分別較基線升高了8個ΜLP＞005、77個ΜLP＜001，但仍低于健康對照組CD4記憶細胞在治療6月、12月分別較基線升高了57個ΜLP＜001、93個ΜLP＜001，但仍低于健康對照組CD8激活細胞在治療6月、12月分別較基線下降了122個ΜLP＜001、170個ΜLP＜001，但仍高于健康對照組。結(jié)論HAART治療不僅可以快速抑制病毒復(fù)制，還可以使CD4童貞細胞、CD4記憶細胞逐漸上升，CD8激活細胞逐漸下降，從而促進HIVAIDS患者免疫重建。第二部分高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療1年的HIVAIDS的血IL12、IFNΓ、IP10的變化及其與免疫重建的關(guān)系目的觀察我國HIVAIDS患者IL12、IFNΓ、IP10在1年HAART抗病毒治療中的動力學變化，分析三者與主要的免疫重建指標和免疫激活指標的變化相關(guān)性及其意義。方法隨機選取經(jīng)HAART治療的HIVAIDS患者35例，同時選取35例健康志愿者為對照，分別于治療0、6、12月采集靜脈血，并相應(yīng)監(jiān)測治療對象的IL12、IFNΓ、IP10的變化，分析其與相關(guān)T細胞亞群的關(guān)系。結(jié)果HIVAIDS在HAART治療前、治療6月、12月及正常人的血清IL12水平分別為（2524±1388）、（2527±1057）、（2991±857）、（3315±832）PGML，IFNΓ水平分別為（2784±1306）、2881±1196、（3238±237）、（3455±1367）PGML，IP10分另為429±17252、（320±15695）、236±12067、（9029±3806）PGML。血清IL12水平與其CD4童貞細胞、CD4記憶細胞呈正相關(guān)，與其CD8激活細胞CD8CD38無明顯相關(guān)性血清IFNΓ與其IL12水平呈正相關(guān)，與CD8T淋巴細胞無明顯相關(guān)性血清IP10與外周血CD8激活細胞CD8CD38呈正相關(guān)、與其CD4T淋巴細胞水平呈負相關(guān)。結(jié)論HIV感染導致IL12、IFNΓ、IP10的分泌紊亂，HAART治療可以一定程度地糾正其異常水平。此外，IL12、IFNΓ、IP10作為免疫重建和免疫激活相關(guān)的細胞因子，也可作為觀察HAART治療效果的有效指標。

簡介：山東中醫(yī)藥大學博士學位論文脂欣康益智作用臨床觀察及干預(yù)APOE基因敲除小鼠認知功能障礙的研究姓名楊秀麗申請學位級別博士專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合臨床指導教師張文高20070420障礙，出現(xiàn)氧化應(yīng)激與膽堿能神經(jīng)損害。3脂欣康能夠改善APOEKO小鼠的認知功能、減輕神經(jīng)損害，拮抗氧化應(yīng)激、改善膽堿能功能、維護突觸結(jié)構(gòu)以及調(diào)控突觸重建可能是其潛在的作用機制。4脂欣康療效優(yōu)于相應(yīng)西藥維生素E，與維生素E間存在協(xié)同作用。關(guān)鍵詞脂欣康膠囊；認知功能；血管性癡呆；輕度認知功能障礙；載脂蛋白E基因敲除小鼠

簡介：點擊查看更多骨髓間充質(zhì)干細胞核糖體DNA區(qū)非病毒基因打靶平臺的建立.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：弓形蟲TOXOPLASMAGONDII是一種專性細胞內(nèi)寄生原蟲，能引起人獸共患的弓形蟲病。由于弓形蟲生活史復(fù)雜，傳播途徑多樣，對弓形蟲的治療，特別是弓形蟲包囊，迄今尚未有理想藥物。因此弓形蟲疫苗已成為弓形蟲病防治研究的重點。為構(gòu)建表達弓形蟲SAG1基因的重組偽狂犬病病毒，本研究利用PCR技術(shù)擴增弓形蟲主要保護性抗原基因SAG1，將其克隆入真核表達載體PCDNA31，將含有SAG1基因的表達盒克隆入偽狂犬病病毒基因缺失轉(zhuǎn)移載體，經(jīng)同源重組獲得了表達弓形蟲SAG1基因的重組偽狂犬病病毒。真核表達載體的構(gòu)建利用PCR技術(shù)擴增出弓形蟲主要保護性抗原基因SAG1，克隆入真核表達載體PCDNA31，經(jīng)酶切鑒定及序列分析，構(gòu)建真核表達載體PCDNASAG1。重組偽狂犬病毒的構(gòu)建真核表達載體PCDNASAG1經(jīng)雙酶切獲得SAG1基因表達盒上游為CMV啟動子，下游為BGHPLOYA信號，并將其克隆入偽狂犬病病毒轉(zhuǎn)移載體P8KD，構(gòu)建中間轉(zhuǎn)移載體P8KDSAG1。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法，將中間轉(zhuǎn)移載體P8KDSAG1與偽狂犬病毒RPRVLACZ基因組共轉(zhuǎn)染VERO細胞，經(jīng)藍白斑篩選，獲得攜帶SAG1基因的重組偽狂犬病病毒RPRVSAG1。重組偽狂犬病毒的鑒定分別提取重組病毒RPRVSAG1基因組DNA和總RNA，運用SAG1特異性引物進行PCR及RTPCR，結(jié)果擴增出特異性目的條帶。經(jīng)WESTERNBLOT和間接免疫熒光試驗證實，重組病毒表達的SAG1蛋白能被抗弓形蟲的多克隆陽性血清識別。重組病毒RPRVSAG1的穩(wěn)定性試驗表明，該病毒在體外連續(xù)傳20代，仍能檢測到SAG1的表達，說明RPRVSAG1具有較好的遺傳穩(wěn)定性。動物保護性試驗為鑒定RPRVSAG1的免疫保護效果，以BALBC小鼠進行了免疫保護性試驗。結(jié)果表明，真核表達載體PCDNASAG1及重組病毒RPRVSAG1能誘導小鼠產(chǎn)生特異性的IGG抗體，產(chǎn)生較高水平的IL2和IFNΓ；并且PCDNASAG1首免，RPRVSAG1加強免疫能誘導更高水平的IL2和IFNΓ。免疫小鼠感染弓形蟲后生存時間明顯延長，并且RPRVSAG1免疫組獲得60％的保護率。

簡介：骨關(guān)節(jié)炎OSTEOARTHRITIS，OA是一種退行性關(guān)節(jié)疾病，多發(fā)于老年人群，嚴重影響了人們的生活質(zhì)量，且需消耗大量的個人及社會財力。國內(nèi)的統(tǒng)計資料表明，我國患有OA的人數(shù)占總?cè)丝诘?％，其中大部分為膝OA，55歲以上人群X線有膝OA表現(xiàn)者約60％，65歲以上老年人OA的發(fā)病率可達85％，75歲以上的老年人中每人都有至少一個關(guān)節(jié)有OA變化。目前，傳統(tǒng)的藥物治療和外科手段對OA的療效有限，且無法阻止OA的進一步發(fā)展，近年來基因治療為OA的防治開辟了一條新途徑，受到越來越多的重視。將功能基因片段整合到基因載體內(nèi)，再將基因載體轉(zhuǎn)染入靶細胞中或轉(zhuǎn)染入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，通過轉(zhuǎn)基因的靶細胞持續(xù)大量分泌功能基因產(chǎn)物，在一個較長的時期保持局部治療濃度，由于OA病變主要累及少數(shù)負重關(guān)節(jié)，因此適合應(yīng)用關(guān)節(jié)內(nèi)局部基因治療。在臨床應(yīng)用基因治療OA之前，我們有必要在細胞實驗和動物實驗中確證哪些基因或基因的組合會對OA產(chǎn)生更好的治療效果，目前已有許多研究以表明基因療法對OA的有效性，并且多基因聯(lián)合治療OA效果好于單基因，在本實驗中，我們利用重組人IL1RA一種很重要的拮抗基因和TGFΒ1一種很重要的保護基因基因從促進軟骨基質(zhì)合成和抑制軟骨基質(zhì)降解兩個層面聯(lián)合轉(zhuǎn)染治療OA。第一部分聯(lián)合基因轉(zhuǎn)染兔膝軟骨細胞及對其增值代謝的影響目的觀察以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體，介導白介素1受體拮抗蛋白IL1RA基因與轉(zhuǎn)化生長因子Β1TGFΒ1基因共轉(zhuǎn)染兔膝軟骨細胞后的表達，及對其增殖代謝的影響。方法將體外培養(yǎng)的軟骨細胞分為空白轉(zhuǎn)染組、空載體轉(zhuǎn)染組、IL1RA單基因轉(zhuǎn)染組、TGFΒ1單基因轉(zhuǎn)染組及IL1RA和TGFΒ1雙基因轉(zhuǎn)染組。酶聯(lián)免疫吸附分析法ELISA進行瞬時基因表達細胞轉(zhuǎn)染后48H及穩(wěn)定基因表達篩選第4W的檢測；免疫組織化學染色法檢測各組IL1RA、TGFΒ1及Ⅱ型膠原的表達；流式細胞儀檢測各組細胞生長周期比例。結(jié)果空白組與PLNCX2空載體轉(zhuǎn)染組的上述指標差異無顯著性P＞005；ELISA檢測顯示基因轉(zhuǎn)染組有明顯基因表達；與空白組及PLNCX2空載體轉(zhuǎn)染組相比，雙基因轉(zhuǎn)染組IL1RA、TGFΒ1、Ⅱ型膠原含量明顯提高P＜005，IL1RA單基因轉(zhuǎn)染組IL1RA含量提高明顯，TGFΒ1單基因轉(zhuǎn)染組TGFΒ1、Ⅱ型膠原含量提高明顯；基因轉(zhuǎn)染組軟骨細胞位于S期的比例增高明顯，與空白組比較差異有顯著性P＜005。結(jié)論基因轉(zhuǎn)染軟骨細胞后可獲得穩(wěn)定表達，IL1RATGFΒ1雙基因轉(zhuǎn)染的軟骨細胞生物學活性優(yōu)于兩者中的任一單基因轉(zhuǎn)染，為基因治療骨關(guān)節(jié)炎的研究提供實驗基礎(chǔ)。第二部分聯(lián)合基因轉(zhuǎn)染治療兔膝骨關(guān)節(jié)炎的研究目的觀察白細胞介素1受體拮抗蛋白IL1RA與轉(zhuǎn)化生長因子Β1TGFΒ1雙基因轉(zhuǎn)染在關(guān)節(jié)中的表達及對骨關(guān)節(jié)炎的治療效果。方法以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體，體外轉(zhuǎn)染同種異體原代軟骨細胞，將轉(zhuǎn)染了外源基因的軟骨細胞注射入兔膝關(guān)節(jié)腔。前交叉韌帶切斷法ACLT制成新西蘭白兔膝關(guān)節(jié)OA模型，共30只，隨機分為5組，Ⅰ組為空白對照組，Ⅱ組為手術(shù)對照組，Ⅲ組為IL1RA轉(zhuǎn)染組，Ⅳ組為TGFΒ1轉(zhuǎn)染組，Ⅴ組為IL1RA和TGFΒ1雙基因轉(zhuǎn)染組。外源基因注射后第4周與第8周，用PBS灌洗兔膝關(guān)節(jié)，ELISA分析轉(zhuǎn)基因表達，硝酸還原法檢測膝關(guān)節(jié)液中NO含量，取關(guān)節(jié)標本進行MANKIN’S評分，阿爾辛藍過碘酸雪夫試劑ABPAS染色，TGFΒ1、IL1RA及Ⅱ型膠原免疫組化、原位雜交檢測。結(jié)果ELISA檢測顯示在第4周基因轉(zhuǎn)染組有明顯的基因表達，第8周基因表達減弱；手術(shù)對照組軟骨損傷程度最大，MANKIN’S評分明顯高于其他組；TGFΒ1、IL1RA及Ⅱ型膠原免疫組化染色，手術(shù)對照組灰度值低于其他組，單基因轉(zhuǎn)染組灰度值低于雙基因轉(zhuǎn)染組，8周時各對應(yīng)組灰度值較4周有明顯下降。結(jié)論以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體將轉(zhuǎn)染了外源基因的軟骨細胞轉(zhuǎn)入骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)內(nèi)，可獲得穩(wěn)定的外源基因表達，TGFΒ1和IL1RA可有效阻止OA的進一步發(fā)展，且聯(lián)合基因治療OA效果優(yōu)于兩者中任一單基因，外源基因表達具有時效性。