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簡介：天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文病毒感染與非霍奇金淋巴瘤相關(guān)性研究姓名王國錦申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液學(xué)）指導(dǎo)教師邵宗鴻20070501丕堡墾登奎蘭堡主蘭堡堡苧PO。003；生存時間與LDH、T32MG呈負(fù)相關(guān)R一0480，PO010，與自蛋白水平呈正相關(guān)RO，535，PO003；總有效率CRP11％與臨床分期相關(guān)RO513，PO005患者的性別與療效、出現(xiàn)并發(fā)癥和生存時間無關(guān)P005。結(jié)論NHL患者病毒感染率高，與NIL發(fā)病密切相關(guān)；感染病毒種類不同，組織分型有差別，肝炎病毒感染以BNHL為主，EBV感染患者以TNHL多見；肝炎病毒感染的NHL患者，以結(jié)外發(fā)病多見，EBV感染的患者以結(jié)內(nèi)發(fā)病為主；NHL患者合并HBV、HCV感染，化療后易出現(xiàn)肝功能損害和病毒滴度的增高；N札患者體液免疫和細(xì)胞免疫功能下降；生存時間與病毒感染、腫瘤負(fù)荷、臨床分期密切相關(guān)。關(guān)鍵詞非霍奇金淋巴瘤病毒臨床特征預(yù)后Ⅱ

簡介：第一部分2型糖尿病認(rèn)知功能損害的臨床研究目的探討2型糖尿病（DM）患者與健康對照者認(rèn)知功能水平、各腦區(qū)體積、雙側(cè)海馬代謝及功能連接的異同。方法（1）應(yīng)用多維度神經(jīng)心理測試對比評估21例2型DM患者和19名健康對照者的神經(jīng)認(rèn)知功能；（2）采用基于體素的腦形態(tài)學(xué)（VBM）方法研究兩組受試者全腦及局部腦區(qū)結(jié)構(gòu)差異；（3）采用氫質(zhì)子磁共振波譜（1HMRS）檢測兩組受試者雙側(cè)海馬氮一乙酰天門冬氨酸復(fù)合物（NAA），膽堿復(fù)合物（CHO）與肌酸（CR）的比值；（4）采用靜息狀態(tài)功能磁共振成像（FMRI）研究兩組受試者海馬與其它腦區(qū)功能連接的異同。結(jié)果（1）2型DM組聽覺詞語記憶測試延遲回憶項（AVLTDELAYRECALL）、聽覺詞語記憶測試再認(rèn)回憶項（AVLTRECOGNITION）和畫鐘測試（CDT）成績均顯著差于對照組（分別為P270MM3）。結(jié)論2型DM患者存在多項認(rèn)知功能（情節(jié)記憶、執(zhí)行功能）損害，伴全腦灰質(zhì)容積減少及局部腦萎縮、雙側(cè)海馬代謝異常及功能失連接；提示2型DM患者可能存在“加速腦老化”，海馬代謝及功能連接損害可能涉及2型DM認(rèn)知功能損害的神經(jīng)病理生理機(jī)制。第二部分糖尿病認(rèn)知功能損害的機(jī)制初探目的探討葡萄糖降解產(chǎn)物甲基乙二醛（MG）對海馬神經(jīng)元的毒性作用及N乙酰半胱氨酸（NAC）、氟西汀（FL）神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法取新生24HSD大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)至第7天，予MG或和NAC，或和FL干預(yù)24H；分為8組。（1）MG組培養(yǎng)液中加入MG；（2）NAC組培養(yǎng)液中加入NAC；（3）MGNAC組培養(yǎng)液中加入MG和NAC；（4）預(yù)處理（PRE）NACMG組海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)第6天加入NAC，干預(yù)24H后加MG再培養(yǎng)24H；（5）FL組培養(yǎng)液中加入FL；（6）MGFL組培養(yǎng)液中加入MG和FL；（7）預(yù)處理（PRE）FLMG組海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)第6天加入FL，干預(yù)24H后加MG再培養(yǎng)24H；（8）對照組僅加相應(yīng)體積完全培養(yǎng)液。四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測海馬神經(jīng)元存活率，異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V（ANNEXINVFITC）聯(lián)合碘化丙啶（PI）法檢測海馬神經(jīng)元凋亡率；以2，7二氫二氯熒光素（DCFH）染色，流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平；采用熒光實時定量聚合酶鏈反應(yīng)及WESTERN印跡法檢測腩源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）及其受體酪氨酸蛋白激酶（TRKB）MRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果（1）隨著MG濃度的增加（0ΜM、10ΜM、50ΜM、100ΜM、200ΜM、400ΜM）及干預(yù)時間延長（0H、2H、6H、12H、24H、36H、48H），海馬神經(jīng)元存活率逐漸降低，呈濃度依賴性（R0946，P結(jié)論MG對海馬神經(jīng)元具有直接毒性作用，并可能部分通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生，導(dǎo)致神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷，同時可能首先抑制TRKB的表達(dá)，導(dǎo)致BDNF表達(dá)代償性增高，損傷BDNFTRKB信號通路，誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡增加。NAC可能通過抗氧化及抗凋亡，且部分通過激活BDNFTRKB通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。FL可部分抑制MG誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元內(nèi)ROS水平的上升，同時激活BDNFTRKB信號通路，減少細(xì)胞凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

簡介：本論文系統(tǒng)的對二十五味鬼臼丸的抗菌活性、以及唐古特青蘭的抗菌和抗病毒藥理作用進(jìn)行了研究，并首次采用HSV2小鼠腦炎模型對唐古特青蘭體外抗病毒作用進(jìn)行了評價。并在此基礎(chǔ)上，采用綜合分離技術(shù)對唐古特青蘭的抗菌有效成份進(jìn)行分析測定，為開發(fā)這種新的抗菌藥物提供了實驗依據(jù)。抗菌藥理研究結(jié)果表明唐古特青蘭水提物對幾種菌的抑制作用都不強(qiáng)，黃酮成分的效果最好，揮發(fā)油次之。并采用GCMS分析了唐古特青蘭的揮發(fā)油成分，其揮發(fā)油中主要含有的物質(zhì)是萜類以及脂肪烴類物質(zhì)，萜類又分為倍半萜和單萜。其中含量最多的成分為反式松香芹醇醋酸酯2518％、桉樹腦109％、正庚烷782％鄰氨苯甲酸，1，5二甲基1乙烯基4己烯酯58％以及1S2S3R5S蒎二醇514％?？共《舅幚斫Y(jié)果顯示阻止病毒顆粒侵入細(xì)胞和對HSV2病毒的直接殺滅作用是唐古特青蘭的主要作用方式，其中唐古特青蘭總浸膏對病毒直接殺滅作用的TI值達(dá)到113。并且選用HSV2腦炎模型小鼠作為研究對象，檢測唐古特青蘭對病毒腦炎小鼠的治療效果。結(jié)果顯示唐古特青蘭總浸膏中劑量明顯優(yōu)于高、低劑量組，并且比ACV的效果要好；各劑量組均能延長小鼠的平均存活天數(shù)。本論文將唐古特青蘭黃酮水解為黃酮苷元，通過正交實驗篩選出最佳條件，然后測定了抑菌效果，并通過HPLCMS分析了水解后黃酮的主要成分。正交實驗水解條件中鹽酸的濃度為主要因素，水解時間為次要因素。由正交實驗結(jié)果得到黃酮水解的最佳工藝條件為A3B1C1D2即使用3MOLL的鹽酸，50％的甲醇混合溶液30ML，在85℃水解1H，起抑菌效果最佳。HPLCMS分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，唐古特青蘭黃酮的主要成分為異香槐素1634％、金雀花苷3094％、洋艾素158％、3，5，5三羥基3，4，67四甲基黃酮2314％、3，4二甲氧黃酮1418％，這幾種物質(zhì)的總含量占到唐古特青蘭黃酮含量的8616％。

簡介：單純皰疹病毒性腦炎HERPESSIMPLEXVIRUSENCEPHALITISHSE是散發(fā)性病毒性腦炎中最常見的類型其病情嚴(yán)重、發(fā)展迅速、病死率高?，F(xiàn)有的抗HSV1藥物不能完全抑制和清除潛伏的病毒且耐藥性強(qiáng)。95％的成人HSE由單純皰疹病毒1型HERPESSIMPLEXVIRUSTYPE1HSV1引起HSV1是雙鏈的包膜DNA病毒按照基因表達(dá)的時序性基因組可分為立即早期基因IMMEDIATEEARLYIE、早期基因EARLYE和晚期基因LATEL。ICP27INFECTEDCELLPROTEIN感染細(xì)胞蛋白為63KDA的感染細(xì)胞蛋白是HSV1病毒復(fù)制必需的關(guān)鍵激活子在HSV1生命周期的IE期產(chǎn)生。ICP27抑制宿主細(xì)胞MRNA剪接補(bǔ)充病毒復(fù)制位點的RNAⅡ聚合酶促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)錄體核輸出；抑制IE、E基因活化L基因促使E基因想L基因表達(dá)刺激病毒轉(zhuǎn)錄翻譯；同時與抑制Ⅰ型干擾素信號和HSV1病毒體的合成相關(guān)。RNA干擾是近年來發(fā)展起來的轉(zhuǎn)錄后基因沉默過程其作為一種新型基因阻斷技術(shù)與傳統(tǒng)的基因敲除技術(shù)以及反義技術(shù)相比具有特異性強(qiáng)、效能高、作用迅速、毒性低、操作簡便等優(yōu)點已被廣泛應(yīng)用于感染性病毒的基因治療研究并取得了令人鼓舞的效果。本實驗通過建立穩(wěn)定表達(dá)ICP27序列特異性SIRNA的重組VEROSIRNA細(xì)胞系初步分析抑制ICP27對HSV1在VERO細(xì)胞中復(fù)制能力的影響探索ICP27缺失是否具有阻斷HSV1復(fù)制的可能從而為確定ICP27基因作為HSV1的抗病毒藥物靶點奠定實驗基礎(chǔ)。目的1建立穩(wěn)定表達(dá)ICP27序列特異性SIRNA的重組VEROSIRNA細(xì)胞系。2初步分析ICP27序列特異性SIRNA對HSV1體外復(fù)制的抑制作用。方法1以HSV1ICP27基因為靶點設(shè)計3對特異性SIRNA退火連接到慢病毒質(zhì)粒PLKO1PURO構(gòu)建重組PLKO1PUROSIRNA慢病毒表達(dá)載體利用MLUⅠ和BAMHⅠ雙酶切鑒定。2利用脂質(zhì)體2000將PLKO1PUROSIRNA、△82、VSVG三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞得到重組慢病毒。3重組慢病毒感染VERO細(xì)胞經(jīng)PUROMYCIN加壓篩選有限稀釋后挑取單個細(xì)胞克隆擴(kuò)大培養(yǎng)即得到重組VEROSIRNA細(xì)胞系。4野生型HSV1病毒感染重組細(xì)胞利用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT分別檢測各組細(xì)胞內(nèi)ICP27MRNA和蛋白表達(dá)情況。5用MOI01的野生型HSV1病毒感染各組細(xì)胞24H后觀察各組細(xì)胞病變效應(yīng)情況并收集細(xì)胞和上清利用TCID法測定各組病毒滴度。6采用單因素方差分析ONEWAYANALYSISOFVARIANCEANOVA以Α005為檢驗水準(zhǔn)對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果1SIRNA退火連接到慢病毒質(zhì)粒PLKO1PURO篩選陽性菌落經(jīng)酶切鑒定及測序顯示PLKO1PUROSIRNA構(gòu)建成功。2嘌呤霉素加壓篩選和有限稀釋后成功篩選出ICP27序列特異性SIRNA表達(dá)陽性的細(xì)胞克隆。3感染HSV1后REALTIMEPCR結(jié)果顯示重組VEROSIRNA組細(xì)胞內(nèi)ICP27MRNA表達(dá)的抑制效率均達(dá)85％以上P4接種HSV1后實驗組細(xì)胞中細(xì)胞病變效應(yīng)較空白對照組和陰性對照組少40％以上；TCID50結(jié)果顯示VETOSIRNA組的病毒滴度比對照組降低約1～2LOG10P結(jié)論1成功建立穩(wěn)定表達(dá)ICP27序列特異性SIRNA的重組VEROSIRNA細(xì)胞系。2通過RNAI特異抑制ICP27表達(dá)可顯著降低HSV1的體外復(fù)制。

簡介：目的妊娠是一種復(fù)雜的生理過程，從免疫學(xué)上類似于器官移植，但結(jié)局又與器官移植不同，妊娠所致的孕婦全身和局部免疫功能抑制是母體對胎兒產(chǎn)生的保護(hù)性免疫應(yīng)答。目前認(rèn)為妊娠所致的免疫抑制主要是細(xì)胞免疫抑制，IGG、IGM隨妊娠進(jìn)程呈進(jìn)行性下降，這些變化使機(jī)體對各種病毒感染的易感性增加，引起本來潛伏在體內(nèi)的細(xì)菌或病毒再活化，或者感染時引起比正常人更強(qiáng)烈的反應(yīng)和更嚴(yán)重的疾病過程。流行性感冒下稱流感是由流行性感冒病毒下稱流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，在人群中常引起散發(fā)或流行，孕婦容易感染。西醫(yī)目前大多數(shù)抗菌素和抗病毒藥物對子代有不良影響而不適宜用于孕期感染。因此，尋求孕期安全高效的藥物治療是臨床亟待解決的重大問題。近年來，隨著對中醫(yī)藥研究的逐步深入，中醫(yī)藥抗病毒顯示出獨(dú)特的治療作用。實踐證明，許多中草藥具有較好的抗病毒作用，而且其毒副作用小或無，臨床的安全性高。導(dǎo)師郭榮主任醫(yī)師經(jīng)多年臨床實踐總結(jié)出了治療孕期流感的中藥方劑益衛(wèi)湯，經(jīng)臨床實踐療效顯著，無毒副作用。為了探明其治療孕期流感的作用機(jī)理，本課題對該方進(jìn)行了動物實驗研究。方法將雌雄小鼠按一定比例合籠，發(fā)現(xiàn)有陰道栓或鏡檢發(fā)現(xiàn)精子者作為妊娠第1天，選出孕鼠40只分成4組，每組10只。正常對照組不接種病毒。模型組每只用流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1005ML滴鼻。病毒唑組按模型組接種病毒，同時給與病毒唑0065GKGD，連用7D。益衛(wèi)湯組按模型組接種病毒，同時灌胃給予中藥益衛(wèi)湯11GKGD，連用7D。正常對照組和模型組均灌服等量生理鹽水。實驗第7天，末次給藥后1小時，稱重后處死孕鼠，采集血液及各臟器組織。觀察益衛(wèi)湯對感染孕鼠一般體征、單核巨噬細(xì)胞吞噬功能、肺指數(shù)、肺組織病理變化及脾指數(shù)的影響。結(jié)果FM1株流感病毒感染孕鼠后，中藥益衛(wèi)湯對孕鼠一般體征有明顯改善作用。碳粒廓清試驗中，模型組單核巨噬細(xì)胞吞噬功能較正常對照組降低P＜001，中藥益衛(wèi)湯組K值和A值較模型組高，與模型組相比有明顯差異P＜005，與病毒唑組比較無明顯差異P＞005。益衛(wèi)湯組孕鼠肺指數(shù)值，與模型組相比明顯降低P＜001，并且中藥益衛(wèi)湯對病毒感染孕鼠肺組織病理變化有一定改善作用。實驗各組脾指數(shù)無明顯差異。結(jié)論中藥益衛(wèi)湯可明顯改善流感病毒FM1感染引起的孕鼠一般體征變化，可提高流感病毒FM1感染孕鼠的單核巨噬細(xì)胞吞噬功能，降低肺指數(shù)，減輕感染孕鼠的間質(zhì)性肺炎的病理改變。由此提示，中藥益衛(wèi)湯發(fā)揮了中藥復(fù)方抗病毒的協(xié)同作用，通過抑制病毒增殖及調(diào)控免疫反應(yīng)達(dá)到治療效果。綜觀本方具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等作用，為臨床應(yīng)用和進(jìn)一步實驗研究提供了依據(jù)。

簡介：白癜風(fēng)患者血清中單純皰疹病毒及抗體的檢測DETECTIONOFDNAANDRELATEDTYPEI／IIANTIBODIESOFSIMPLEXHERPESINSERUMFROMVITILIGOPATIENTS導(dǎo)論文課題起止時間2QQ生旦2Q12生圣旦論文完成時間至Q至生圣旦中國醫(yī)科大學(xué)遼寧2012年3月目錄一、摘要中文論著摘要L英文論著摘要4二、英文縮略語一7三、論文前言”8刖吾“8材料與方法8實驗結(jié)果LO討論L2結(jié)論L3四、本研究創(chuàng)新性的自我評價14五、參考文獻(xiàn)15六、附錄綜述17在學(xué)期間科研成績25致謝26個人簡介27

簡介：背景異基因造血干細(xì)胞移植HSCT已是大多數(shù)惡性血液病根治的基本方法。由于我國是乙型肝炎感染的高流行區(qū)乙型肝炎病毒HBV攜帶者的比例高達(dá)10％HBV感染的人群很可能成為HSCT的供受者。在乙型肝炎病毒攜帶者的異基因造血干細(xì)胞移植過程中由于預(yù)處理化療劑量大、長期應(yīng)用免疫抑制劑、患者免疫重建時間長乙型肝炎病毒再激活的風(fēng)險大其中一些患者可能發(fā)展為暴發(fā)性肝炎而死亡。2000年YEO等提出細(xì)胞毒性化療期間或之后立即出現(xiàn)肝炎伴隨HBVDNA水平增加不小于10倍或絕對值達(dá)到10～9COPIESML并排除其他感染即可診斷為HBV再激活。乙肝病毒再激活的危險因素包括HBSAG、HBVDNA、HBEAG、HBCAB陽性使用皮質(zhì)醇激素、低齡、和男性。目前使用的抗病毒藥物包括拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋均能有效預(yù)防造血干細(xì)胞移植中乙型肝炎病毒再激活。拉米夫定作為目前的標(biāo)準(zhǔn)治療是一種核苷類似物能夠抑制病毒的DNA聚合酶而阿德福韋和恩替卡韋對YMDD突變均有效。使用抗病毒藥物進(jìn)行搶先預(yù)防治療優(yōu)于延時治療。目的分析異基因造血干細(xì)胞移植中乙型肝炎病毒再激活情況及相關(guān)預(yù)防方法的安全性和有效性。材料與方法2005年10月至2007年12月浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨髓移植中心97例行異基因造血干細(xì)胞移植的白血病患者。移植前對所有患者均檢測乙肝血清學(xué)標(biāo)志及肝功能移植后定期復(fù)查肝功能不定期復(fù)查乙肝血清學(xué)標(biāo)志必要時監(jiān)測HBVDNA水平。有HBSAG陽性的患者在移植前后均查HBVDNA水平。結(jié)果97例行造血干細(xì)胞移植的白血病患者中位隨訪時間為14個月328個月總體生存率783。其中供受者均為HBSAG1例占10供者HBSAG5例占52受者HBSAG10例占103受者既往有病毒感染HBCAB34例占351。所有患者發(fā)生乙肝病毒再激活占21均發(fā)生在既往有感染的患者占HBCAB患者的59HBSAG患者未進(jìn)行抗病毒預(yù)防發(fā)生病毒再激活為333使用抗病毒藥物預(yù)防后發(fā)生率為0HBSAG且HBCAB患者發(fā)生病毒再激活為42。供受者均HBSAG組供受者均為HBSAG1例在使用抗病毒藥物預(yù)防下移植后隨訪7個月期間未發(fā)生病毒再激活。供者HBSAG、受者HBSAG組供者HBSAG、受者HBSAG4例均在移植后24小時內(nèi)及1月后注射乙型肝炎免疫球蛋白400IU。除1例出現(xiàn)早期疾病復(fù)發(fā)其他3例患者移植后中位隨訪時間7個月78個月均持續(xù)未發(fā)生病毒再激活。供者HBSAG、受者HBSAG組供者HBSAG、受者HBSAG9例移植后中位隨訪時間10個月228個月。3例未進(jìn)行抗病毒預(yù)防其中1例移植后6個月出現(xiàn)病毒再激活。6例采用抗病毒藥物預(yù)防其中1例早期復(fù)發(fā)死亡剩下的5例均能很好耐受抗病毒藥物未見藥物相關(guān)不良反應(yīng)發(fā)生。在移植后的移植后28個月隨訪期間均未見發(fā)生乙肝病毒再激活。供者HBSAG、受者HBSAG且HBCAB組供者HBSAG、受者HBSAG且HBCAB24例移植后中位隨訪時間13個月327個月。隨訪期間6例死亡總體生存率75。HBSAB受者16例其中1例因為繼發(fā)性植入失敗死亡其余15例患者在移植后427個月隨訪期間無病毒再激活表現(xiàn)隨訪期間3例死亡生存率為80。HBSAG受者8例其中1例患者由于發(fā)生病毒再激活引起爆發(fā)性肝衰竭而死亡。供者HBSAG、受者HBSAG且HBCAB組供者HBSAG、受者HBSAGNHBCAB共59例移植后中位隨訪時間155個月328個月。隨訪期間4例死亡生存率為771未見發(fā)生病毒再激活。結(jié)論進(jìn)行造血干細(xì)胞移植的患者存在乙肝病毒再激活的風(fēng)險既往有乙型肝炎病毒感染是病毒再激活的危險因素但供者或受者HBSAG不是移植禁忌供者HBSAG、受者HBSAG注射乙型肝炎免疫球蛋白可有效預(yù)防受者感染HBSAG受者使用抗病毒藥物預(yù)防乙型肝炎病毒再激活是安全有效的。

簡介：肌萎縮是公認(rèn)的世界疑難病癥，以失神經(jīng)肌萎縮為例，其一旦發(fā)生則呈進(jìn)行性不可逆發(fā)展，目前尚無有效措施及藥物可完全阻斷這一病程，給患者及其家庭帶來了沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，探討失神經(jīng)肌萎縮發(fā)病的分子機(jī)制及尋找新的治療方法顯得尤為重要和迫切。迄今的研究已經(jīng)明確，失神經(jīng)骨骼肌的萎縮是由分子信號通路掌控，IKKΒNFΚB通路在其中占有重要的作用。磷酸化的IKKΒ去磷酸化與否可能對失神經(jīng)骨骼肌的發(fā)生發(fā)展有重要意義。依賴鎂錳離子的蛋白磷酸酶1BPPM1B可以使磷酸化的IKKΒ的絲氨酸177和絲氨酸181位點發(fā)生去磷酸化，同時減弱IKKΒ的活性。過表達(dá)PPM1B甚至可以終止由TNFΑ誘導(dǎo)的IKKΒNFΚB通路的活性?；蛑委煘槭窠?jīng)骨骼肌萎縮的防治開辟了更廣闊的前景，已有學(xué)者發(fā)現(xiàn)應(yīng)用神經(jīng)營養(yǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長因子等基因轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)基因小鼠的方法對延緩肌萎縮有較好的效果。受此啟發(fā)，本課題嘗試采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)來促進(jìn)PPM1B基因過表達(dá)，使失神經(jīng)肌萎縮的重要通路在上游及時得到控制，借此來抑制IKKΒNFΚB通路的活性，探討其延緩骨骼肌萎縮的療效，為進(jìn)一步研究失神經(jīng)骨骼肌萎縮的分子機(jī)制及針對該因子的藥物和基因干預(yù)提供實驗依據(jù)。第一部分PPM1B和PIKKΒ在失神經(jīng)肌萎縮中的達(dá)變化及意義目的探討失神經(jīng)骨骼肌萎縮過程中依賴鎂錳離子的蛋白磷酸酶1BPPM1B和磷酸化的抑制核轉(zhuǎn)錄因子ΚB激酶ΒPIKKΒ的表達(dá)變化及意義。方法30只SD大鼠建立右下肢腓腸肌失神經(jīng)支配模型，采用實時定量PCR和WESTEMBLOT，分別檢測失神經(jīng)支配第2、7、14和28天的腓腸肌中PPM1BMRNA和蛋白的表達(dá)變化以及PIKKΒ，IKKΒ蛋白的表達(dá)變化，并分析PPM1B，PIKKΒ與肌萎縮程度（肌肉濕重維持率）的相關(guān)性。結(jié)果1、實時定量PCR分析結(jié)果顯示PPM1BMRNA的表達(dá)在失神經(jīng)支配后第2天已開始下降，迅速降為對照組的041倍，此后表達(dá)水平持續(xù)下降，到第28天時降為對照組的007倍，各組與對照組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。2、WESTERNBLOT灰度分析結(jié)果顯示PPM1B蛋白水平的變化與MRNA水平有著相同的趨勢，但是變化幅度較轉(zhuǎn)錄水平為低；失神經(jīng)2天表達(dá)水平持續(xù)下降，第7天降為對照組的056倍，到第28天時降為對照組的024倍。失神經(jīng)術(shù)后第2天與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005，第7，14，28天與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005）。PIKKΒ蛋白的表達(dá)水平從早期即開始增高，失神經(jīng)第2天為對照組的137倍，并隨著失神經(jīng)時間的推移而呈持續(xù)增加趨勢，到第28天為對照組的174倍。各組與對照組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。IKKΒ蛋白的表達(dá)呈持續(xù)下降的趨勢，下降幅度較小。各組與對照組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。3、關(guān)聯(lián)性分析顯示PPM1B與PIKKΒ表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性P＜001PPM1B表達(dá)降低與肌濕重比成線性正相關(guān)關(guān)系P＜001。結(jié)論在SD大鼠失神經(jīng)骨骼肌萎縮早期，PPM1B的表達(dá)為下調(diào)，PIKKΒ的表達(dá)為上調(diào)；PPM1B和PIKKΒ在失神經(jīng)骨骼肌的表達(dá)強(qiáng)度與肌萎縮密切相關(guān)，二者共同作用參與失神經(jīng)骨骼肌的發(fā)生發(fā)展。采用基因治療促進(jìn)PPM1B基因表達(dá)使其上調(diào)，來延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮，應(yīng)在失神經(jīng)后越早越好。第二部分PPMIB基因慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定目的構(gòu)建PPMIB基因重組慢病毒載體，為其體外實驗奠定基礎(chǔ)。方法根據(jù)PPM1B基因的CDS序列，對大鼠PPM1B基因進(jìn)行F克隆，陽性克隆經(jīng)菌落PCR驗證及測序驗證后，將測序正確的TPPM1B進(jìn)行雙酶切，與雙酶切后的PLENTI63V5DESTMCSIRESEGFP相連接，菌落PCR及酶切鑒定篩選出陽性克隆，測序。保留正確的PLENTIEGFPPPM1B，提純后與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲得病毒原液，經(jīng)純化和濃縮后，進(jìn)行測序分析鑒定。結(jié)果1、構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體PLENTIEGFPPPM1B經(jīng)過測序驗證與GENBANK中PPM1B的CDS序列完全一致。2、慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞，熒光顯微鏡下可見細(xì)胞中有大量明亮的綠色熒光表達(dá)，病毒液的滴度值為115107IFUML，實時定量PCR檢測病毒液中PPM1B基因表達(dá)量是陰性對照液中的29748倍。結(jié)論成功構(gòu)建了PM1B基因慢病毒載體，為下一步體外實驗奠定了基礎(chǔ)。第三部分重組慢病毒體外促進(jìn)PPMIB的表達(dá)目的探討重組慢病毒體外促進(jìn)PPM1B基因表達(dá)的效果，為重組慢病毒介導(dǎo)的失神經(jīng)骨骼肌萎縮基因治療奠定基礎(chǔ)。方法6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)大鼠成肌細(xì)胞系L6感染L6細(xì)胞，摸索最佳MOI值。將培養(yǎng)好的L6細(xì)胞分為三組，分別為無干預(yù)因素的未感染組，感染LENTIEGFP空載體病毒的對照組，感染LENTIIRES2EGFPPPM1B的病毒組，進(jìn)行相應(yīng)的感染后72H，取各組細(xì)胞于共聚焦熒光顯微鏡下觀察增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP的表達(dá)、以發(fā)綠色熒光細(xì)胞的平均數(shù)與總細(xì)胞平均數(shù)的比值來估計感染的效率、WESTERNBLOT檢測PPM1B蛋白的表達(dá)。結(jié)果1、慢病毒感染L6大鼠成肌細(xì)胞的MOI值選取MOI20為最佳。2、病毒組感染后72H，熒光顯微鏡下可見細(xì)胞中有大量明亮的綠色熒光表達(dá)，顯示了系統(tǒng)有著較高的感染效率。3、WESTERNBLOT灰度分析，感染后72H，病毒組PPM1B基因的蛋白表達(dá)較對照組和未感染組明顯升高，分別是它們的153倍和149倍，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。對照組與未感染組相比，PPM1B蛋白表達(dá)水平無顯著性差異（P＞005）。結(jié)論成功驗證了重組慢病毒可以促進(jìn)細(xì)胞中PPM1B的蛋白表達(dá)，為下一步在活體內(nèi)研究其功能以及基因靶向治療奠定了基礎(chǔ)。第四部分重組慢病毒介導(dǎo)PPMIB基因轉(zhuǎn)染延緩大鼠失神經(jīng)骨骼肌萎縮目的探討重組慢病毒介導(dǎo)的PPM1B基因轉(zhuǎn)染延緩大鼠失神經(jīng)骨骼肌萎縮的療效。方法將30只SD大鼠，隨機(jī)分為實驗組和對照組，每組15只。切斷坐骨神經(jīng)，建立右下肢失神經(jīng)支配萎縮模型。于實驗組和對照組失神經(jīng)趾長伸肌分別感染重組慢病毒載體LENTIEGFPPPM1B和LENTIEGFP溶液50ΜL107IUML，轉(zhuǎn)染2、4周，每個時間點分別取3只大鼠，于共聚焦熒光顯微鏡下觀察增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP的表達(dá)，取6只大鼠，WESTERNBLOT檢測PPM1B、PIKKΒ和IKKΒ的表達(dá)；取6只大鼠測定肌濕重、肌細(xì)胞直徑、肌細(xì)胞橫截面積，并觀察肌纖維超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果慢病毒轉(zhuǎn)染2、4周，兩組趾長伸肌均可見大量EGFP表達(dá)。WESTERNBLOT檢測顯示實驗組失神經(jīng)趾長伸肌中均有大量的PPM1B表達(dá)，分別為對照組的68倍與49倍（P均＜001）。實驗組中PIKKΒ蛋白較對照組減少，分別為對照組的45％與62％；實驗組中IKKΒ蛋白較對照組增多，分別為對照組的42倍與28倍（P均＜005）。轉(zhuǎn)染2周，實驗組肌濕重維持率、肌細(xì)胞直徑和肌細(xì)胞橫截面積分別為6328±417％，3086±424ΜM和88072±7054ΜM2，均明顯高于對照組5243±392％，2139±387ΜM和70527±5319ΜM24周時，實驗組上述各項指標(biāo)為4513±495％，2364±306ΜM和72015±3846ΜM2，仍明顯高于對照組3531±472％，1866±323ΜM和54367±4265ΜM2（P均＜001）。此外，實驗組與對照組相比，肌纖維超微結(jié)構(gòu)改變減輕，肌漿網(wǎng)的擴(kuò)張程度明顯減輕。結(jié)論在大鼠失神經(jīng)骨骼肌中，過表達(dá)PPM1B基因，可以通過降低IKKΒNFΚB通路的活性起到延緩肌萎縮的作用。慢病毒介導(dǎo)的基因治療有較高的轉(zhuǎn)染效率，其介導(dǎo)的PPM1B基因轉(zhuǎn)染能有效延緩大鼠失神經(jīng)骨骼肌的萎縮，其療效至少可以維持4周。

簡介：目的探討蒙特利爾認(rèn)知評估量表（MONTREALCOGNITIVEASSESSMENTMOCA）在篩查血管性認(rèn)知功能障礙患者的應(yīng)用，同時與簡易精神狀態(tài)量表（MINIMENTALSTATEEXAMINATION，MMSE）進(jìn)行比較研究。方法通過將研究對象分為寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院住院及門診VCIND患者58例為病例組，以及健康體檢者62例為對照組。通過MOCA量表及MMSE量表，評價其認(rèn)知功能水平，統(tǒng)計MOCA量表與MMSE的相關(guān)性，并通過繪制ROC曲線以及敏感度和特異度的統(tǒng)計分析，找出篩查VCI的最佳分界值。結(jié)果MOCA量表在篩查工作中表現(xiàn)出與MMSE量表良好的相關(guān)性R＞08，原26分正常分界值篩查敏感度及特異度為9655％和8042％。通過MOCA量表各分值對應(yīng)的敏感度及特異度繪制ROC曲線，發(fā)現(xiàn)曲線下面積（AUC）0985，MMSE量表的曲線下面積為0841。MOCA量表分界值設(shè)置在24分時，敏感度及特異度為9310％與8987％，所對應(yīng)的約登指數(shù)為所有分值對應(yīng)的最大值（YI0899）。結(jié)論（1）MOCA量表操作簡單，被檢測者依從性好，臨床使用可操作性強(qiáng)。（2）MOCA量表與MMSE量表評測分值具有良好相關(guān)性，可以反映被測試者的認(rèn)知功能情況。（3）MOCA量表正常分界值用于篩查VCI患者可能過高，將正常分界值設(shè)置在24分時篩查VCI患者更為理想。（4）MMSE量表篩查VCI患者存在敏感度過低的情況，在篩查VCI患者的應(yīng)用中，MOCA量表要優(yōu)于MMSE量表。

簡介：分類號分類號R69學(xué)校代碼學(xué)校代碼1039210392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100210100210學(xué)號號21010035492101003549福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文體內(nèi)外研究慢病毒介導(dǎo)的體內(nèi)外研究慢病毒介導(dǎo)的PYGO2SHRNA抑制腎癌抑制腎癌OSRC2細(xì)胞增殖及侵襲性細(xì)胞增殖及侵襲性LENTIVIRUSMEDIATEDPYGO2SHRNAINHIBITSPROLIFERATIONINVASIONOFKIDENYCARCINOMAOSRC2CELLSINVIVOVITRO學(xué)位類型型醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士所在學(xué)院院第一臨床第一臨床醫(yī)學(xué)院學(xué)院研究生生秦祥成秦祥成學(xué)科學(xué)科、專業(yè)專業(yè)外科學(xué)外科學(xué)導(dǎo)師師劉榮福劉榮福教授教授研究起止日期研究起止日期2012年3月至月至2012年12月答辯日期答辯日期2013年5月21日二○一三○一三年五月目錄目錄中文摘要1ABSTRACT21前言32材料與方法721主要儀器722生物材料723主要試劑來源824主要試劑配制825實驗方法1026統(tǒng)計學(xué)方法203實驗結(jié)果2131293FT細(xì)胞包裝病毒情況2132腎癌OSRC2細(xì)胞感染情況2233WB實驗驗證蛋白表達(dá)情況2334細(xì)胞生長曲線（MTT）2335克隆形成（COLONYFMATION）2436細(xì)胞侵襲實驗（CELLTRANSWELL）2537裸鼠成瘤實驗2638HE染色結(jié)果2839PYGO2的表達(dá)與MMP7、MMP9、VEGF的關(guān)系294討論325結(jié)論34參考文獻(xiàn)35

簡介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文慢病毒載體介導(dǎo)NK4基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靶向治療胃癌的實驗研究姓名祝蔭申請學(xué)位級別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化）指導(dǎo)教師呂農(nóng)華20100601摘要組培養(yǎng)基，24小時后上室分別加入HBMSCS、HFB，24小時后耿出小室，結(jié)晶紫染色，顯微鏡下計數(shù)。2胃癌皮下移植瘤裸鼠成瘤后隨機(jī)分為三組每組5只，分別尾靜脈注射HBMSCSGFP、HFBGFP、LENTIGFP，7天后處死裸鼠，取瘤體、心、肝臟、脾臟、肺、腎臟，冰凍切片，熒光顯微鏡下觀察瘤體及各臟器GFP表達(dá)情況。6、以HBMSCS為載體的NK4基因治療對胃癌治療效果32只裸鼠成瘤后隨機(jī)分為四組HBMSCSNK4治療組、LENTINK4治療組、HBMSCSGFP對照組和PBS對照組，分別在分組后0、7、14、2L天尾靜脈注射給藥；測量瘤體大小，按ⅡABC／6計算體積；HE染色觀察組織病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)方法IMMUNOHISTOCHEMISTRY，ITTC檢測CD31、增殖細(xì)胞核抗原PROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGEN，PCNA表達(dá)，原位缺口末端標(biāo)記法TERMINALDEOXYNUCLEOTIDYLTRANSFERASEMEDIATEDDUTPNICKENDLABELING，TUNEL檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果1、分離培養(yǎng)的HBMSCS流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示CD44、105陽性，而CD34、CD45陰性，符合MSCS特征；HBMSCS經(jīng)骨誘導(dǎo)后茜素紅染色陽性。2、構(gòu)建的NK4一EGFP融合基因的重組慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞后可正常表達(dá)；重組慢病毒LENTINK4滴度為2X108TU／ML；LENTINK4轉(zhuǎn)染HBMSCS后熒光表達(dá)隨著時間延長及MOI值增加而增強(qiáng)、增多；攜帶NK4基因的HBMSCSHBMSCSNK4NK4表達(dá)『F常，NK4分泌量隨著MOI值增加而增加，同時也隨感染時問延長而增加，最佳MOI值為50；MOI為50時，LENTINK4轉(zhuǎn)染HBMSCS的轉(zhuǎn)染率達(dá)878％，LENTIGFP轉(zhuǎn)染HBMSCS的轉(zhuǎn)染率為965％。3、410“MKN45細(xì)胞懸液接種與瘤組織塊接種皮下移植瘤成瘤率100％，后者成瘤時問明顯短于前者PO05；上室培養(yǎng)HFB的各組中，MKN45、GES1、空白對照組細(xì)胞數(shù)分別為277167、16451、19162，三組相比均無顯著差異PO05；

簡介：浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文心理應(yīng)激系統(tǒng)模式指導(dǎo)下認(rèn)知行為療法在心理咨詢與治療中的運(yùn)用姓名馮銳申請學(xué)位級別碩士專業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師姜乾金20070401浙江大學(xué)碩士論文心理應(yīng)激系統(tǒng)模式指導(dǎo)下認(rèn)知一行為療法在心理咨詢與治療中的運(yùn)用浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院精神病與精神衛(wèi)生學(xué)碩士生馮銳導(dǎo)師姜乾金摘要“應(yīng)激”是一個不斷發(fā)展的概念，概括20世紀(jì)30年代以來的各種應(yīng)激研究，可以歸納為四種概念類型應(yīng)激屬于有機(jī)體對有害刺激的反應(yīng)；應(yīng)激是引起機(jī)體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的刺激物；應(yīng)激是應(yīng)激源和應(yīng)激反應(yīng)的中間變量；應(yīng)激是以中介因素為核心的多因素相互作用的系統(tǒng)。心理應(yīng)激作為一種理論，在醫(yī)學(xué)心理學(xué)中的本身意義是有限度的，但應(yīng)激理論能為心理病因?qū)W研究提供一種框架思路，也為臨床工作提供了一種心理干預(yù)的策略。認(rèn)知心理學(xué)理論關(guān)于人的行為理解為人的行為與其說是對外界刺激的反應(yīng)，不如說是個體對這些刺激加工的結(jié)果。異常行為是適應(yīng)不良認(rèn)知的產(chǎn)物。認(rèn)知行為療法以矯正功能不良性認(rèn)知或功能失調(diào)性圖式為主要目的的一類心理治療方法，理論假設(shè)是人的認(rèn)知對其情感和行為具有決定性作用，通過改變不恰當(dāng)?shù)恼J(rèn)知方式，可以改善情緒及行為障礙。從認(rèn)知行為療法角度看，單純認(rèn)知行為療法對部分來訪者的問題并無明顯作用。分析這些來訪者的特點，多伴隨低水平的社會支持、不良的社會適應(yīng)、人際交往障礙、婚姻的不和諧及人格障礙等特征。來訪者本身是個系統(tǒng)。系統(tǒng)是普遍存在的，世界上任何事物都可以看成是一個系統(tǒng)。系統(tǒng)定義為2

簡介：點擊查看更多核苷(酸)類似物相關(guān)乙型肝炎病毒逆轉(zhuǎn)錄酶耐藥突變分析及rtA181耐藥突變的個體化再治療.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的探討烏魯木齊市流感流行規(guī)律，便于做好流行性感冒的預(yù)防與控制工作。同時為烏魯木齊市流感病毒的變異預(yù)防控制研究奠定基礎(chǔ)。方法通過中國流感中心流感監(jiān)測系統(tǒng)，對烏魯木齊市2007～2010年的流感進(jìn)行病原學(xué)監(jiān)測。結(jié)果通過對烏魯木齊市2007～2010年流感監(jiān)測資料進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)①在20072008監(jiān)測年度，共采集流感樣病例標(biāo)本127份，其中檢出流感病毒B型（VICTIA系1株，B型（YAMAGATA）6株，檢出率為551。在20082009監(jiān)測年度，共采集流感樣病例標(biāo)本203份，其中檢出流感病毒全部為B型（VICTIA）13株，檢出率為640。在20092010監(jiān)測年度，烏魯木齊市暴發(fā)新甲型H1N1疫情，共采集流感樣標(biāo)本1218份，其中檢出流感病毒陽性株504株，454株為新甲型H1N1，8株A1（H1N1）亞型株，12株為A3（H3N2），30株B（VICTIA），檢出率為4138；病毒分離率以20092010監(jiān)測年度最高。②三年度0～19歲的流感病毒株陽性率不同，其中20092010年度流感病毒陽性株高于20072008，20082009年度。20092010年度各年齡組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（8895，P0113）。通過分別對三個年度不同性別之間的流感病毒陽性率間無統(tǒng)計學(xué)差異（P值均大于005）。③通過對三個監(jiān)測年度流感病毒陽性株時間分布分析，20072008年度陽性毒株的檢出高峰為2007年11月，20082009年度陽性毒株的檢出高峰為2008年11月和12月，20092010年度陽性毒株的檢出高峰為2009年10月、11月和12月。結(jié)論通過流感病毒監(jiān)測系統(tǒng)對烏魯木齊市2007～2010監(jiān)測年度分析發(fā)現(xiàn)，烏魯木齊市流感活動高峰時間為每年的冬季和春季，并且各年度流感流行的優(yōu)勢株也會不停的變化。⑴20072008年度流感流行的優(yōu)勢株是B型（YAMAGATA系），20082009年度流行的優(yōu)勢株為B型（VICTIA系），20092010年度因新甲型H1N1的爆發(fā)全部轉(zhuǎn)換為新甲型H1N1，但是等疫情過后流感亞型趨近于正常，優(yōu)勢株為B（VICTIA）亞型。⑵三個年度0～19歲的流感病毒株陽性率不同。三個年度不同性別之間的流感病毒陽性率間無統(tǒng)計學(xué)差異。⑶烏魯木齊市從2007年開始流感病毒的優(yōu)勢株為B型，且優(yōu)勢一直并持續(xù)至20082009年度，B型毒株的流行時間與全國其他地區(qū)流行期來臨的時間基本一致。⑷樣本的采集質(zhì)量嚴(yán)重影響病毒分離率，采集合格的樣本是病毒分離的基礎(chǔ)；⑸烏魯木齊市流感流行規(guī)律與我國北方地區(qū)的流感流行規(guī)律基本吻合，主要體現(xiàn)在流行類型及優(yōu)勢株轉(zhuǎn)換基本相同，流行高峰時段與北方其他省市基本同步。根據(jù)流感毒株變化趨勢發(fā)現(xiàn)每年引起春季流感暴發(fā)的流行株會成為當(dāng)年冬季流感流行的優(yōu)勢株，因此預(yù)測2010～2011年度流感流行優(yōu)勢株可能為B（VICTIA）亞型。

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文ADLIFIL24共表達(dá)腺病毒載體對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑癌增效和分子機(jī)制的研究姓名單云波申請學(xué)位級別碩士專業(yè)藥理學(xué)指導(dǎo)教師楊吉成20090501ADLIFIL24共表達(dá)腺病毒載體對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑痛增效和分予機(jī)制的研究中文摘要結(jié)論成功構(gòu)建的LIF和IL24雙基因共表達(dá)腺病毒載體ADLIFIL24體外能明顯抑制U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長和誘導(dǎo)其凋亡，并呈現(xiàn)疊加作用。ADLIFIL24可通過上調(diào)U251細(xì)胞中ICE、BAX、P53和下調(diào)BCL一2等細(xì)胞凋亡相關(guān)基因促使CASPASE3激活以及下凋與腫瘤血管形成密切相關(guān)的HIFLA基因等途徑抑制U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長和誘導(dǎo)其凋亡。關(guān)鍵詞LIF；IL24；腺病毒；膠質(zhì)瘤；凋亡；基因治療Ⅱ作者單云波指導(dǎo)老師楊吉成