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簡(jiǎn)介：目的通過對(duì)骨科手術(shù)七氟烷復(fù)合麻醉和異丙酚復(fù)合麻醉后的觀察探討七氟醚異丙酚對(duì)老年骨科手術(shù)全麻后的認(rèn)知功能和清醒質(zhì)量的影響。方法1、研究對(duì)象全麻下行骨科手術(shù)老年住院患者60例入選標(biāo)準(zhǔn)年齡≥65歲ASAⅡ～Ⅲ級(jí)體重指數(shù)BODYMASSINDEX簡(jiǎn)稱BMI正常。其中男32例女28例。年齡6582歲74±8歲簡(jiǎn)易智能量表MMSE評(píng)分≥24分其中高血壓病20例糖尿病11例剔除標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)易智能量表MMSE評(píng)分＜24分患有確診的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和心理疾病長(zhǎng)期服用鎮(zhèn)靜藥物或抗抑郁藥物有嚴(yán)重的肝衰或慢性腎衰文盲或在語(yǔ)言上無(wú)法與醫(yī)師有效交流者及中途失訪者。2、術(shù)前準(zhǔn)備由專門受過培訓(xùn)的測(cè)試者在術(shù)前了解患者一般情況包括受教育情況、老年慢性系統(tǒng)疾病等進(jìn)行MMSE測(cè)試評(píng)分并做好相關(guān)解釋工作?；颊咝g(shù)前避免使用影響認(rèn)知功能的藥物如東莨菪堿、阿托品等。隨機(jī)分為S組七氟烷組N30和P組丙泊酚組N30。入室后即用麻醉監(jiān)護(hù)儀連續(xù)監(jiān)測(cè)心電圖ECG、心率HR、收縮壓SBP、舒張壓DBP平均動(dòng)脈壓MAP和脈搏血氧飽和度SPO2記錄患者入手術(shù)室安靜3分鐘后的數(shù)值作為麻醉誘導(dǎo)前的基礎(chǔ)值。手術(shù)中使用麻醉氣體監(jiān)測(cè)儀監(jiān)測(cè)呼末二氧化碳分壓PETCO2及呼氣末七氟烷濃度。開放上肢靜脈液路3、麻醉誘導(dǎo)兩組麻醉誘導(dǎo)時(shí)先靜注靜注咪達(dá)唑侖力月西015～02MGKG血漿濃度達(dá)500NGKG后靜注芬太尼小手術(shù)按體重1～2UGKG大手術(shù)按體重2～4UGKGS組麻醉誘導(dǎo)前排空蓄氣囊氧流量調(diào)至6LMIN七氟醚揮發(fā)罐刻度調(diào)至6％預(yù)充氣體45S使蓄氣囊鼓起。囑患者深呼吸在患者1次最大呼氣后將面罩扣緊面部囑患者繼續(xù)深呼吸待患者對(duì)語(yǔ)言呼叫無(wú)反應(yīng)及睫毛反射消失后靜脈注射順阿曲庫(kù)銨03MGKG行快速誘導(dǎo)氣管插管。P組誘導(dǎo)時(shí)氧流量調(diào)至15LMIN扣緊呼吸面罩靜注異丙酚05～1MGKGASAⅢ級(jí)病人的給藥速率應(yīng)更低每10秒約2ML20MG。待患者意思喪失后靜注順阿曲庫(kù)銨03MGKG扣緊面罩機(jī)械通氣34分鐘感覺下頜松弛進(jìn)行快速誘導(dǎo)氣管插管兩組插管后接麻醉機(jī)行間歇正壓通氣IPPV。麻醉維持S組吸入七氟烷復(fù)合瑞芬太尼025～1ΜGKGMIN七氟烷維持呼末氣體濃度在05～1MACP組靜脈泵入丙泊酚4～8MGKG1H1復(fù)合瑞芬太尼05～1ΜGKGMIN。術(shù)中靜脈輸注乳酸鈉林格氏液和羥乙基淀粉注射液10～12MLKG1H1。兩組術(shù)中間斷靜脈注射順阿曲庫(kù)銨015MGKG1維持肌肉松馳。當(dāng)術(shù)中出血量大于500ML時(shí)及時(shí)輸注濃縮紅細(xì)胞和冰凍血漿。4、術(shù)中管理觀察麻醉深度用雙頻腦電指數(shù)BIS監(jiān)測(cè)維持BIS值在45～55之間波動(dòng)。當(dāng)術(shù)中平均動(dòng)脈壓升高或降低的幅度超過基礎(chǔ)值的20％時(shí)S組首先增加或降低七氟烷吸入濃度P組首先增加或降低丙泊酚泵入速度。超過兩分鐘仍無(wú)法控制血壓給予相應(yīng)的藥物處理當(dāng)平均動(dòng)脈壓MAP升高幅度超過基礎(chǔ)值20％緩慢靜注1050MG烏拉地爾針劑監(jiān)測(cè)血壓變化降壓效果應(yīng)在5分鐘內(nèi)即可顯示。若效果不夠滿足可重復(fù)用藥當(dāng)平均動(dòng)脈壓MAP減低幅度超過基礎(chǔ)值20％皮下或肌內(nèi)注射一次15～30MG麻黃堿051支或者多巴胺20MG加入5％葡萄糖注射液200300ML中靜滴開始時(shí)按75100UG分滴入以后根據(jù)血壓情況可加快速度和加大濃度但最大劑量不超過每分鐘500UG。當(dāng)心率低于50次MIN靜注成人靜脈注射阿托品03～1MG按需可1～2小時(shí)一次最大量為2MG4支當(dāng)心率高于120次MIN靜注成人先靜脈注射艾司洛爾負(fù)荷量05MGKGMIN約1分鐘隨后靜脈點(diǎn)滴維持量自005MGKGMIN開始4分鐘后若療效理想則繼續(xù)維持若療效不佳可重復(fù)給予負(fù)荷量并將維持量以005MGKGMIN的幅度遞增。維持術(shù)中心率、血壓波動(dòng)不超過基礎(chǔ)值的20％。手術(shù)結(jié)束30分鐘前停止靜注肌松藥手術(shù)開始縫皮停止七氟烷或異丙酚使用縫皮結(jié)束即停止瑞芬太尼輸注。拔管指征為能聽清楚口頭指令并能用動(dòng)作回應(yīng)、能夠睜開眼、自主呼吸頻率16～25次分、潮氣量350ML以上以及在不吸氧時(shí)SPO2不低于90％。5、術(shù)后詳細(xì)記錄睜眼時(shí)間拔管時(shí)間及應(yīng)答時(shí)間。撥出氣管導(dǎo)管后觀察病人完全清楚后送回病房。手術(shù)后患者應(yīng)用經(jīng)靜脈自控鎮(zhèn)痛PCIA方法為芬太尼20UGKG1溶成100ML溶液采用采用視覺模擬評(píng)分法由患者自主計(jì)算VAS評(píng)分來觀察鎮(zhèn)痛效果。疼痛程度分為0～10分0分為無(wú)痛10分為劇烈疼痛。記錄手術(shù)時(shí)間麻醉時(shí)間出血量。于麻醉誘導(dǎo)前及拔管后24H72H均應(yīng)用MMSE測(cè)試方法評(píng)價(jià)其認(rèn)知功能。簡(jiǎn)易智力狀態(tài)檢查中正常與不正常的分界值與受教育程度有關(guān)文盲未受教育組17分小學(xué)受教育時(shí)間＜6年20分中學(xué)或以上受教育時(shí)間＜6年組24分。結(jié)果兩組患者年齡、性別、體質(zhì)量、手術(shù)時(shí)間、麻醉時(shí)間和麻醉藥用量除異丙酚和七氟烷外均無(wú)顯著差異P＞005兩組患者術(shù)后蘇醒時(shí)間、拔管時(shí)間和拔管后語(yǔ)言應(yīng)答時(shí)間差異無(wú)顯著性P＞005術(shù)后24HP組和S組分別有6例和4例患者M(jìn)MSE評(píng)分低于24分72H后評(píng)分均＞24分。兩組病人拔管后24小時(shí)的MMSE值均明顯降低兩組患者72HMMSE值恢復(fù)至術(shù)前水平兩組之間比較無(wú)差異性。結(jié)論七氟醚與丙泊酚在老年髖部手術(shù)麻醉后的早期認(rèn)知功能下降3天后基本恢復(fù)正常但兩藥對(duì)患者術(shù)后清醒質(zhì)量的影響無(wú)差異七氟醚麻醉中血流動(dòng)力學(xué)更平穩(wěn)。

簡(jiǎn)介：同濟(jì)大學(xué)碩士學(xué)位論文基于復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的病毒傳播及控制策略研究姓名王旻申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)控制科學(xué)與工程控制理論與控制工程指導(dǎo)教師鄭應(yīng)平20060301ABSTRACTABSTRACTMANYCOMPLEXSYSTEMSINREALWORLDCANBEDESCRIBEDBYTHEFORMOFNETWORKSATFIRST，PEOPLEUSEREGULARNETWORKSTODESCRIBEREALSYSTEMS，THENRANDOMNETWORKS，ANDRECENTLYCOMPLEXNETWORKSARECONCERNEDMANYRESEARCHRESULTSOFNETWORKSALEFOUNDWHICHHELPPEOPLEUNDERSTANDTHECOMPLEXSYSTEMSINREALWORLDBETTERONEOFTHEIMPORTANTRESEARCHWORKINNETWORKSISDYNAMICSPREADINGINNETWORKSEPIDEMICSPREADINGINCROWD，VIRUSSPREADINGININTERNET，INFORMATIONORMINORSPREADINGINSOCIETYALLOFTHESEAREPROBLEMSOFDYNAMICSPREADINGINNETWORKSITISSIGNIFICANTTOSTUDYTHESPREADRULESANDFMDTHEWAYTOCONTROLTHEEPIDEMICSINTHISPAPERTHETHEORYOFCOMPLEXNETWORKSANDDYNAMICSPREADINGPROBLEMALEFWSTINTRODUCEDTHEMAINWORKISSIMULATIONRESEARCHONSARSSPREADINGANDVIRUSSPREADINGININTERNETTHEACHIEVEMENTSINCLUDELOCALCONNECTANDLINEVARYAREINTRODUCED，ANDWECONSTRUCTAEXTENDEDCOMPLEXNETWORKMODELWHICHREFLECTTHEFEATUREOFTHEREALSYSTEMWESIMULATETHESPREADBEHAVIORUNDERTHREESITUATIONSSISUSCEPTIBLEINFECTIVE，SISSUSCEPTIBLEINFECTIVESUSCEPTIBLE，SIRSUSCEPTIBLEINFECTIVERECOVEREDBASEDONTHECOMPLEXNETWORKMODELWECONSTRUCT，WEDOSIMULATIONRESEARCHOFSARSSPREADINGTHERESULTSHOWSTHATSCAREDMINDAMONGPEOPLECANHELPRESTRAINTHECOURSEOFSARSSPREADINGALSOTHECONTROLWAYWHICHGOVERNMENTTAKESISDECISIVEBASEDONTHECOMPLEXNETWORKMODELWECONSTRUCT，WEDOSIMULATIONRESEARCHOFVIRUSSPREADINGININTERNETTHERESULTSHOWSTHATTHEPREVENTIVEMEASURESANDUNREMITTINGPREVENTIONARECRUCIALTHERESEARCHOFVIRUSSPREADINGINCOMPLEXNETWORKSISPOPNOWINTHEFINALITYINTHEFINALITYTHEPROBLEMSREQUIRINGFURTHERSTUDIESAREDISCUSSEDKEYWORDSCOMPLEXNETWORKS，VIRUSSPREADING，SARS，INTERACTⅡ

簡(jiǎn)介：目的越來越多研究表明，金屬元素鐵、鋁超載可能神經(jīng)變性疾病的病因之一。因此，對(duì)于腦脊液中鋁鐵元素的測(cè)定，能否有助于MCI早期診斷，從而實(shí)現(xiàn)MCI早期干預(yù)及治療，這對(duì)于臨床醫(yī)生來說具有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谕ㄟ^測(cè)定腦脊液樣本中鋁、鐵元素含量以及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白含量，并對(duì)患者做認(rèn)知能力測(cè)試及評(píng)分，用統(tǒng)計(jì)學(xué)研究方法來進(jìn)一步分析腦脊液中鋁、鐵元素及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白含量與認(rèn)知能力水平是否存在相關(guān)性，為MCI早期診斷積累數(shù)據(jù)。方法研究對(duì)象選自在廣西桂西鋁礦區(qū)與南寧市非鋁礦區(qū)各30例老年人＞60歲腦脊液樣本，入選標(biāo)準(zhǔn)1以上2組人群均為久居當(dāng)?shù)氐墓潭ň用?，并在?dāng)?shù)蒯t(yī)院外科接受非神經(jīng)系統(tǒng)手術(shù)患者。2患者無(wú)患中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，無(wú)嚴(yán)重全身性疾病，無(wú)明顯水、電解質(zhì)以及全身營(yíng)養(yǎng)紊亂，且近期無(wú)服用微量元素史。在接受腰麻手術(shù)中，采集患者腦脊液標(biāo)本，并于術(shù)后對(duì)病人進(jìn)行認(rèn)知能力的調(diào)查、評(píng)分。對(duì)于腦脊液的生化檢查，分別用由華美生物科技公司提供ELISA人轉(zhuǎn)鐵蛋白試劑盒測(cè)定腦脊液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白含量、用原子吸收分光光度法檢測(cè)腦脊液中鋁、鐵元素含量。最后，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)法對(duì)兩地區(qū)的各組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較是否存在差異性，并用SPSS對(duì)以上所以數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果廣西桂西礦區(qū)較非礦區(qū)中老年人腦脊液中的鋁、鐵含量顯著增高P＜001，對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)鐵蛋白未見升高P＞005，在認(rèn)知能力方面，礦區(qū)較非礦區(qū)中老年人認(rèn)知能力評(píng)分顯著降低P＜001。結(jié)論鋁礦區(qū)內(nèi)老年人腦脊液中鋁、鐵濃度顯著高于非鋁礦區(qū)老年人腦脊液中鋁、鐵的濃度，且鋁礦區(qū)內(nèi)老年人MMSE評(píng)分及CDT計(jì)分較非鋁礦區(qū)老年人有顯著的降低。腦脊液中鋁、鐵含量與認(rèn)知能力呈負(fù)相關(guān)性，鋁、鐵在腦脊液中含量呈正相關(guān)性，而轉(zhuǎn)鐵蛋白與鋁鐵含量、認(rèn)知能力評(píng)分無(wú)相關(guān)性。提示高鋁暴露可能是礦區(qū)內(nèi)老年人認(rèn)知能力降低的危險(xiǎn)環(huán)境因素之一。鋁的超載可能是促進(jìn)鐵在腦脊液中含量增高的原因之一，且因此形成的高濃度鐵可能是與散發(fā)性神經(jīng)變性疾病的病因有關(guān)聯(lián)。

簡(jiǎn)介：腸道病毒71型EV71感染可引起手足口病、皰疹性咽峽炎、無(wú)菌性腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹、腦干腦炎、肺水腫等多種疾病。近年來，引起嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)疾病的EV71大爆發(fā)在亞太地區(qū)頻繁出現(xiàn)，包括1997年的馬來西亞、1999年的澳大利亞、2000年的新加坡、1997年和2000年的日本，1998年的中國(guó)臺(tái)灣，及2008年和2009年的中國(guó)大陸等。在過去的10年里，由EV71引起的神經(jīng)系統(tǒng)綜合癥不斷增多。隨著EV71在全世界范圍的蔓延，如何有效治療和控制該病毒的傳播一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。由于目前尚無(wú)針對(duì)EV71的特效藥和疫苗，因此，研發(fā)一種能有效控制EV71流行的疫苗已勢(shì)在必行。本課題研究了EV71H6株在VERO細(xì)胞中的傳代適應(yīng)，為以后制備疫苗提供大量抗原。本課題以EV71H6株病毒為研究材料，建立其在VERO細(xì)胞上的適應(yīng)株。首先將EV71H6株病毒在RD細(xì)胞上進(jìn)行分離，并在VERO細(xì)胞上通過蝕斑篩選和適應(yīng)性傳代，然后開展生物學(xué)、免疫學(xué)及理化學(xué)特性的研究。用常規(guī)方法處理來自臨床確診為手足口病患兒的糞便標(biāo)本。將標(biāo)本接種于RD細(xì)胞，盲傳3代后即可出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變，然后在VERO細(xì)胞上進(jìn)行蝕斑篩選和連續(xù)傳代培養(yǎng)。結(jié)果顯示，各代病毒蝕斑直徑大小沒有變化，傳至第5代時(shí)，CPE明顯增多，病毒滴度從475LOGCCID5OML提高到813LOGCCID50ML，繼續(xù)傳代，病毒滴度穩(wěn)定在800LOGCCID50ML以上。EV71H6株病毒的最佳培養(yǎng)條件試驗(yàn)表明，制備毒種的適宜MOI為001；在96小時(shí)左右收獲的病毒滴度最高；在80℃環(huán)境下能夠穩(wěn)定保存。理化學(xué)研究試驗(yàn)結(jié)果表明，EV71核酸類型為RNA，不具有耐熱性，但可耐受乙醚、酸的作用。經(jīng)傳代后的穩(wěn)定性試驗(yàn)研究表明，EV71H6適應(yīng)株可被特異抗EV71血清中和，證明該病毒確為EV71型。用EV71H6適應(yīng)株病毒免疫家兔，以RD細(xì)胞為基質(zhì)進(jìn)行中和試驗(yàn)，其免疫原性研究結(jié)果顯示，中和抗體效價(jià)有了逐步提高，最高可達(dá)11024，顯示了良好的免疫原性。初步試驗(yàn)結(jié)果表明，EV71H6株在VERO細(xì)胞中能進(jìn)行適應(yīng)性傳代，并保持穩(wěn)定的生物學(xué)性狀。該結(jié)果為EV71疫苗的進(jìn)一步研究提供了很有價(jià)值的參考數(shù)據(jù)。

簡(jiǎn)介：目的為了研究血緣傳播造成乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV慢性持續(xù)性感染的機(jī)理，本文較初步地探討了HBV前S1抗原PRES1ANTIGEN與血緣傳播的慢性HBV感染之間的相關(guān)性。方法本研究以時(shí)間分辨免疫熒光法IFMA法檢測(cè)我院感染科住院臨床診斷的202例慢性HBV感染患者的血清前S1抗原，同時(shí)，調(diào)查其家族史，并檢測(cè)其HBVDNA、HBSAG、HBEAG、抗HBE、抗HBC及其ALT和AST等指標(biāo)。結(jié)果在收集的202例患者中，有明確家族史的178例中，其中前S1抗原陽(yáng)性的有115例，占6464％，而明確無(wú)家族史的24例中，PRES1抗原陽(yáng)性的僅有8例，占3333％，兩組有顯著差異P0006，P＜005；在HBVDNA陽(yáng)性的154例患者中，PRES1抗原陽(yáng)性者有93例，占6039％，PRES1抗原陰性者有61例，占3961％，兩組無(wú)顯著性差異P0866，P＞005；在前S1抗原陽(yáng)性的123例患者中，HBEAG抗原陽(yáng)性者有63例，占5122％，HBEAG抗原陰性者有60例，占4878％，兩組無(wú)顯著差異P0605，P＞005；轉(zhuǎn)氨酶異常中的177例患者中PRESL抗原陽(yáng)性的有101例，占5706％，PRES1抗原陰性的有76例，占4294％，兩組有顯著差異P0004，P＜005。結(jié)論HBV前S1抗原與血緣傳播的慢性HBV感染之間存在明顯的相關(guān)性，并與肝炎活動(dòng)有關(guān)。

簡(jiǎn)介：目的以自身失活型慢病毒為載體，制備鼠基因工程調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（TREG），通過體外實(shí)驗(yàn)，鑒定其表型、增殖能力及免疫抑制能力；通過小鼠ALLOBMT模型，探索聯(lián)合輸注的基因工程TREG對(duì)急性GVHD的防治作用。方法構(gòu)建含鼠FOXP3基因的自身失活型慢病毒載體。包裝病毒后感染免疫磁珠分離的小鼠CD4CD25T細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、CCK8法、ELISA法檢測(cè)細(xì)胞表型及功能變化。構(gòu)建小鼠ALLOBMT模型，聯(lián)合輸注基因工程TREG，通過受鼠GVHD臨床積分、組織病理學(xué)改變等評(píng)價(jià)其防治急性GVHD的作用。結(jié)果成功構(gòu)建了慢病毒表達(dá)質(zhì)粒PXZ208FOXP3IRESGFP。病毒感染CD4CD25T細(xì)胞后，后者FOXP3、CD25、CTLA4、GITR表達(dá)升高，并且具有低增殖能力及免疫抑制性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠ALLOBMT聯(lián)合輸注基因工程TREG后，受鼠生存率顯著提高，長(zhǎng)期存活小鼠無(wú)或僅有輕度GVHD臨床及病理表現(xiàn)。結(jié)論成功構(gòu)建了自身失活型慢病毒載體介導(dǎo)的鼠基因工程TREG，基因工程TREG具有與CD4＋CD25＋天然TREG相似的表型及功能。在小鼠ALLOBMT模型中，基因工程TREG可有效防治急性GVHD。

簡(jiǎn)介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文昆明鼠孕期人巨細(xì)胞病毒原發(fā)感染對(duì)子代神經(jīng)行為的影響姓名潘道香申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師唐久來20060605宣敞醫(yī)科人學(xué)壩L。州’允生瞼殳英文縮寫HCMVHFCPETCID50英文仝稱縮略詞表HUMANCYTOMEGALOVIRUSHUMALLFIBROBLASTCYTOPATHICEFFECT中文全稱人巨細(xì)胞病毒人胚成纖維細(xì)胞細(xì)胞病變效應(yīng)50PERCENTTISSUECULTUREINFECTIVEDOSE半數(shù)組織培養(yǎng)感染量RPMI1640ROSWELLPARKMEMORIAL’SINST1640PBSPP65BPEDTAPCRPDNARNASEDNTPSMWM1640培養(yǎng)液PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸緩沖鹽溶液PHOSPHOPROTEIN65BASEPAIRSETHYLENEDIAMINETETRAACETICACIDPOLYMERASECHAINREACTIONPROBABILITYDEOXYRIBONUCIEICACIDRIBONUCLEASEDEOXYNUCLEOSIDETRIPHOSPHATESMORRISWATERMAZEKMMOUSEKUNMINGMOUSELDLEARNINGDISABILITY磷酸化低基質(zhì)蛋白堿基對(duì)乙二胺四乙酸聚合酶鏈反應(yīng)概率脫氧核糖核酸核糖核酸酶脫氧三磷酸核苷酸MORRIS水迷宮昆明鼠學(xué)習(xí)困難學(xué)習(xí)障礙3

簡(jiǎn)介：研究背景乙型病毒性肝炎，簡(jiǎn)稱乙肝，是一種由乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV引起的世界范圍傳播的疾病。乙型肝炎主要通過與被感染的人的血液和其它體液的接觸傳染。HBV感染是引起慢性肝病、肝硬化、肝細(xì)胞肝癌的主要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全世界有20億人感染過HBV，其中36億以上為慢性感染，每年大約有60萬(wàn)人死于HBV感染的相關(guān)性肝病及肝細(xì)胞肝癌。注射對(duì)抗HBV感染的疫苗是目前有效預(yù)防HBV的最佳手段，但是仍然不能阻止HBV的傳播。HBV自然感染的宿主范圍狹窄，只局限于人類和大猩猩，因此目前HBV的研究缺少合適的動(dòng)物模型，HBV的研究更多的依賴于細(xì)胞模型。HBVDNA轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞系是體外研究HBV的結(jié)構(gòu)與功能、基因表達(dá)與調(diào)控，以及藥物篩選及耐藥機(jī)制的有力工具，然而病毒進(jìn)入肝癌細(xì)胞系的方式不是正常的感染而是轉(zhuǎn)染或者整合，因此肝癌細(xì)胞系不能用于研究早期病毒靶細(xì)胞的相互作用（例如病毒的吸附，穿入、脫衣殼等）。原代人肝細(xì)胞對(duì)HBV有著天然的易感性，但是來源有限（新鮮的肝臟組織），體外培養(yǎng)困難（不能傳代、肝細(xì)胞特殊形態(tài)不能維持）等缺點(diǎn)限制了其做為細(xì)胞模型的可能。最近幾年，與肝細(xì)胞相關(guān)的干細(xì)胞因?yàn)槠鋸?qiáng)大的增殖能力和固有的生物學(xué)特性引起了人們的重視，肝細(xì)胞起源于骨髓細(xì)胞，骨髓細(xì)胞被視為肝細(xì)胞再生的重要源泉。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMSCS在特殊的誘導(dǎo)條件下體外能夠誘導(dǎo)成具有肝功能的成熟的類肝細(xì)胞，動(dòng)物模型顯示移植入體內(nèi)的誘導(dǎo)前或者誘導(dǎo)后的BMSCS均能恢復(fù)受損的肝細(xì)胞。但是人BMSCS是否對(duì)HBV易感，是否能成為研究HBV的細(xì)胞模型目前尚未有報(bào)道。本研究用HBV體外自然感染人BMSCS，探討人BMSCS做為細(xì)胞模型研究HBV最初生命過程、HBV生物學(xué)特性、HBV與宿主細(xì)胞相互作用的早期機(jī)制及HBV耐藥機(jī)制的可能性。本研究分為2個(gè)部分第一部分，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和純化目的探討從人骨髓中分離、培養(yǎng)、純化、擴(kuò)增BMSCS的方法，建立穩(wěn)定的人BMSCS，為后續(xù)HBV研究提供可靠的細(xì)胞模型。方法1密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法及酶消化控制法分離、培養(yǎng)、純化人BMSCS。2觀察人BMSCS的細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，繪制人BMSCSP5的生長(zhǎng)曲線，計(jì)算細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期倍增時(shí)間。3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人BMSCSP5的群體DNA含量分布（細(xì)胞周期），常見的表面標(biāo)志物。4評(píng)估人BMSCS的傳代、凍存和復(fù)蘇的能力。結(jié)果1成功分離培養(yǎng)了人BMSCS。細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)均一，以梭形為主，邊界清晰，胞核飽滿居中，多成橢圓形，細(xì)胞排列具有一定方向性，密度高時(shí)成漩渦狀或放射狀排列。2人BMSCS生長(zhǎng)增殖旺盛，體外能長(zhǎng)期培養(yǎng)擴(kuò)增，生長(zhǎng)曲線呈典型的“S”型，細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期倍增時(shí)間為31H。符合間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。3流式細(xì)胞術(shù)示人BMSCS細(xì)胞周期大部分處于靜止期，小部分處于分裂周期，具有強(qiáng)大的增殖潛力人BMSCS穩(wěn)定高表達(dá)CD90、CD105，不表達(dá)CD34、CD45。符合間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。4人BMSCS可凍存，復(fù)蘇后細(xì)胞形態(tài)學(xué)及生物學(xué)特性穩(wěn)定，細(xì)胞生長(zhǎng)增殖旺盛。符合細(xì)胞模型的特點(diǎn)。結(jié)論體外培養(yǎng)的人BMSCS生長(zhǎng)穩(wěn)定，增殖旺盛，能連續(xù)傳代，可用于進(jìn)一步的組織工程、細(xì)胞模型和分子生物學(xué)研究。第二部分，乙肝病毒體外自然感染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞目的評(píng)估HBV體外自然感染人BMSCS后的復(fù)制、合成、表達(dá)能力，探討人BMSCS做為細(xì)胞模型用于研究HBV的可能性。方法1HBVDNA陽(yáng)性54108COPIESML的患者血清孵育培養(yǎng)的人BMSCS，感染細(xì)胞。2熒光定量PCR方法檢測(cè)HBV陽(yáng)性血清孵育后的人BMSCS是否合成、分泌HBVDNA。3DNA印跡法SOUTHERNBLOTTING檢測(cè)HBV是否在感染后的人BMSCS內(nèi)有效復(fù)制，形成復(fù)制中間體共價(jià)閉合環(huán)狀DNACOVALENTLYCLOSEDCIRCULARDNA，CCCDNA。4電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBV陽(yáng)性血清孵育后的人BMSCS是否表達(dá)、分泌乙肝病毒表面抗原HBSAG、E抗原HBEAG。5間接免疫熒光方法檢測(cè)HBV陽(yáng)性血清孵育后的人BMSCS是否合成、表達(dá)乙肝病毒核心抗原HBCAG。6阻斷實(shí)驗(yàn)將含10％的感染血清的雙無(wú)培養(yǎng)基加入不同稀釋度的抗HBSAG的特異性抗體按前述感染方法孵育人BMSCS檢測(cè)病毒進(jìn)入細(xì)胞的途徑。結(jié)果1HBV成功自然感染人BMSCS，感染后細(xì)胞形態(tài)學(xué)穩(wěn)定，生長(zhǎng)增殖旺盛。2HBV陽(yáng)性血清孵育后的第2天人BMSCS可以檢測(cè)到HBVDNA，第612天維持在相對(duì)高的水平，HBVDNA最高值為937105COPIESMLHBV陽(yáng)性血清孵育后的第315天BMSCS培養(yǎng)上清中可以檢測(cè)到HBVDNA，HBVDNA的含量分布在3792102COPIESML和4067105COPIESML之間。3SOUTHERNBLOTTING檢測(cè)顯示人BMSCS在HBV陽(yáng)性血清孵育后第2天就可檢測(cè)到HBVCCCDNA的微弱信號(hào)20KB，陽(yáng)性信號(hào)隨著培養(yǎng)進(jìn)程的推進(jìn)而增強(qiáng)。4HBV陽(yáng)性血清孵育后的人BMSCS能夠持續(xù)分泌HBSAG和HBEAG到培養(yǎng)上清中。感染后第216天培養(yǎng)上清中能檢測(cè)到HBSAG，最低值是1612IUML，最高值是118100IUML感染后第513天培養(yǎng)上清中能檢測(cè)到HBEAG呈陽(yáng)性表達(dá)HBEAG檢測(cè)最低值是0115SCOABSBANCERATECUTOFFRATIO，最高值是3407SCO（≥1SCO為陽(yáng)性）。5HBV陽(yáng)性血清孵育后的第2天開始人BMSCS可以檢測(cè)到HBCAG。間接免疫熒光染色表現(xiàn)為胞漿內(nèi)強(qiáng)烈的彌漫性著色，細(xì)胞核部分著色，大約7％的細(xì)胞核呈陽(yáng)性表達(dá)，且數(shù)目隨著培養(yǎng)進(jìn)程的推進(jìn)而增多，第9天達(dá)高峰，大約20％的細(xì)胞核呈陽(yáng)性表達(dá)。6抗HBSAG的抗體能夠阻斷HBV進(jìn)入人BMSCS，阻斷率與抗HBSAG的抗體的濃度有明顯的量效關(guān)系。結(jié)論人BMSCS對(duì)HBV自然感染易感，能在病毒侵入后啟動(dòng)有效的病毒復(fù)制，形成復(fù)制中間產(chǎn)物HBVCCCDNA，表達(dá)HBV特異性抗原并合成子代病毒顆粒分泌出細(xì)胞。人BMSCS可以作為細(xì)胞模型用于研究HBV自然感染，進(jìn)行HBV感染宿主細(xì)胞的早期過程（粘附、穿入、脫衣殼）及機(jī)制的研究，進(jìn)行病毒靶細(xì)胞相互作用機(jī)制的研究。

簡(jiǎn)介：網(wǎng)絡(luò)成癮正得到越來越多的關(guān)注，已有研究證明網(wǎng)絡(luò)成癮與心理社會(huì)因素有關(guān)，認(rèn)知神經(jīng)研究也證實(shí)了網(wǎng)絡(luò)成癮者大腦結(jié)構(gòu)和功能的異常。APA已經(jīng)將網(wǎng)絡(luò)游戲成癮納入精神疾病診斷與評(píng)估手冊(cè)（第五版）中，而關(guān)于網(wǎng)絡(luò)成癮的其他亞型的研究比較少。本研究采用陳俠和黃希庭編制的大學(xué)生網(wǎng)絡(luò)成癮傾向問卷和靜息態(tài)功能性磁共振技術(shù)探究了大學(xué)生不同類型的網(wǎng)絡(luò)成癮的腦結(jié)構(gòu)、腦功能和功能連接特點(diǎn)，并在此基礎(chǔ)上探究了自信與網(wǎng)絡(luò)成癮的關(guān)系。研究一利用體素形態(tài)學(xué)方法和多元回歸分析，考察了網(wǎng)絡(luò)成癮的不同亞型的腦結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，網(wǎng)絡(luò)關(guān)系成癮與舌回、前扣帶回、楔前葉、額下回等腦區(qū)密切相關(guān)；網(wǎng)絡(luò)娛樂成癮與舌回、楔前葉、海馬及海馬旁回、前扣帶回、角回、顳葉和緣上回等腦區(qū)灰質(zhì)體積相關(guān)；信息搜集成癮與額中回和額下回、小腦、頂上回、緣上回等腦區(qū)灰質(zhì)體積相關(guān)。研究二利用局部一致性的方法，探究了網(wǎng)絡(luò)成癮不同亞型的靜息態(tài)腦功能基礎(chǔ)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系成癮與內(nèi)側(cè)額上回、輔助運(yùn)動(dòng)區(qū)、中央旁小葉、殼核和中央后回的局部一致性有關(guān)；網(wǎng)絡(luò)娛樂成癮與舌回、扣帶中回等腦區(qū)的局部一致性有關(guān)；信息搜集成癮與舌回、楔前葉、中央前回、小腦和顳上回等腦區(qū)的局部一致性有關(guān)。研究三在前兩個(gè)研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究了三種網(wǎng)絡(luò)成癮亞型的靜息態(tài)功能連接，結(jié)果發(fā)現(xiàn)左側(cè)額下回三角部與殼核、中央前回、額上回的功能連接與網(wǎng)絡(luò)關(guān)系成癮正相關(guān)；右側(cè)前扣帶回與左側(cè)腦島的功能連接與網(wǎng)絡(luò)娛樂成癮正相關(guān)；右側(cè)頂上回與右側(cè)額下回三角部及右側(cè)眶部額下回的功能連接與信息搜集成癮負(fù)相關(guān)。研究四在體素形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上，探索了自信與網(wǎng)絡(luò)成癮的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)自信在左側(cè)中央后回的灰質(zhì)體積與網(wǎng)絡(luò)娛樂成癮和右側(cè)頂上回灰質(zhì)體積與信息搜集成癮的關(guān)系中起到部分中介作用。總之，不同類型的網(wǎng)絡(luò)成癮的腦結(jié)構(gòu)和腦功能特點(diǎn)既有不同又有重合，網(wǎng)絡(luò)成癮的不同亞型存在不同心理機(jī)制和神經(jīng)機(jī)制，自信在網(wǎng)絡(luò)娛樂成癮和信息搜集成癮的形成過程中發(fā)揮重要作用。

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簡(jiǎn)介：焦慮情緒是人類眾多情緒中的一種，而特質(zhì)焦慮是一種持久且穩(wěn)定的人格特質(zhì)，在面對(duì)各種應(yīng)激情景時(shí)均體驗(yàn)到的頻繁的、高強(qiáng)度的焦慮與擔(dān)憂。特質(zhì)焦慮者是焦慮癥與抑郁癥易發(fā)人群。以往的研究重點(diǎn)關(guān)注特質(zhì)焦慮抑制控制不足，是將抑制控制作為一個(gè)整體來進(jìn)行研究的，BRAVER和BURGESS2007提出雙重控制理論，將抑制控制劃分為主動(dòng)性控制和反應(yīng)性控制。雙重認(rèn)知控制理論為理解特質(zhì)焦慮個(gè)體的認(rèn)知控制特點(diǎn)提供了新的認(rèn)識(shí)，然而目前相關(guān)研究證據(jù)還較少，因此本研究從雙重控制的角度研究特質(zhì)焦慮對(duì)認(rèn)知控制的影響。特質(zhì)焦慮的注意控制理論認(rèn)為，特質(zhì)焦慮抑制控制不足主要體現(xiàn)在加工效能上，高特質(zhì)焦慮個(gè)體可能運(yùn)用了更多的自上而下資源來補(bǔ)償其降低的加工效率，從而在注意控制上表現(xiàn)出與低焦慮個(gè)體相同的操作水平EYSENCKETAL2007。如果我們?cè)谡J(rèn)知控制的任務(wù)上給予高工作記憶負(fù)荷時(shí)，高工作記憶負(fù)荷會(huì)消耗有限的工作記憶資源，高特質(zhì)焦慮個(gè)體可運(yùn)用的補(bǔ)償策略可能已經(jīng)被破壞，特質(zhì)焦慮對(duì)認(rèn)知控制的消極影響將會(huì)表現(xiàn)出來。本研究將探討不同工作記憶負(fù)荷下特質(zhì)焦慮對(duì)認(rèn)知控制的影響。實(shí)驗(yàn)一使用持續(xù)性操作測(cè)驗(yàn)（THECONTINUOUSPERFMANCETEST，AXCPT）任務(wù)，探討特質(zhì)焦慮對(duì)線索保持（主動(dòng)性控制）和靈活反應(yīng)（反應(yīng)性控制）的影響。研究發(fā)現(xiàn)，在BX序列上，高特質(zhì)焦慮者反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)于低特質(zhì)焦慮者反應(yīng)時(shí)，說明特質(zhì)焦慮削弱了主動(dòng)性控制，從辨別力指數(shù)D’上看也支持了這一說法，相對(duì)于低特質(zhì)焦慮來說，高特質(zhì)焦慮者對(duì)線索信息不敏感；在AY序列反應(yīng)時(shí)和準(zhǔn)確率上，高焦慮個(gè)體可能和低焦慮個(gè)體一樣，沒有表現(xiàn)出差異，在辨別力指數(shù)上，高低特質(zhì)焦慮者對(duì)探測(cè)信息的敏感性上沒有差異。說明了高焦慮個(gè)體在反應(yīng)控制上保存較好，與低特質(zhì)焦慮一樣。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)工作記憶負(fù)荷、特質(zhì)焦慮、試次類型三因素交互效應(yīng)不顯著，表明工作記憶負(fù)荷并沒有破壞高特質(zhì)焦慮使用補(bǔ)償策略，和低工作記憶負(fù)荷相比，高工作記憶負(fù)荷下的認(rèn)知控制并沒有表現(xiàn)出削弱。實(shí)驗(yàn)二操作特定項(xiàng)目比例一致性的色詞STROOP任務(wù)，采用事件相關(guān)電位技術(shù)研究不同工作記憶負(fù)荷下特質(zhì)焦慮與反應(yīng)性控制之間的關(guān)系。在行為和腦電上均發(fā)現(xiàn)了經(jīng)典的ISPC效應(yīng)ITEMSPECIFICPROPTIONCONGRUENTEFFECT，表現(xiàn)為在MCMOSTLYCONGRUENT組塊中STROOP效應(yīng)顯著大于MIMOSTLYINCONGRUENT組塊中STROOP效應(yīng)；在反應(yīng)時(shí)、腦電SP成分SLOWPOTENTIALCOMPONENT上，高焦慮者ISPC效應(yīng)顯著大于低特質(zhì)焦慮者ISPC效應(yīng)，表明了高特質(zhì)焦慮反應(yīng)性控制受損；工作記憶負(fù)荷、特質(zhì)焦慮、項(xiàng)目類型、試次類型四因素交互不顯著，表明高工作記憶負(fù)荷并沒有影響高特質(zhì)焦慮者的反應(yīng)性控制水平。本研究的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)圍繞著特質(zhì)焦慮與認(rèn)知控制之間關(guān)系而開展的。在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)特質(zhì)焦慮者認(rèn)知控制削弱的特點(diǎn)，這種削弱不僅體現(xiàn)在主動(dòng)性控制上，還體現(xiàn)在反應(yīng)性控制上，還發(fā)現(xiàn)了工作記憶負(fù)荷并沒有削弱特質(zhì)焦慮者認(rèn)知控制，研究的這一發(fā)現(xiàn)加深了我們對(duì)特質(zhì)焦慮者認(rèn)知特點(diǎn)的認(rèn)識(shí)。

簡(jiǎn)介：流感是由流感病毒INFLUENZAVIRUS引起的一種以侵害呼吸系統(tǒng)為主的疾病，在世界各國(guó)廣泛流行，是危害人類健康的重要傳染病之一，因此，WHO宣布對(duì)流感要嚴(yán)加監(jiān)控。20世紀(jì)曾有過3次全球性的流感大流行，僅第一次大流行1918～1919年就造成2000多萬(wàn)人死亡，比第一次世界大戰(zhàn)死亡的總?cè)藬?shù)還要多，而且死亡的大多數(shù)是青壯年，造成巨大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)國(guó)家權(quán)威部門透露，我國(guó)每年流感的發(fā)病高達(dá)10億人次以上，經(jīng)濟(jì)損失數(shù)百億元以上。近些年來，我國(guó)的生態(tài)環(huán)境嚴(yán)重破壞，人流感的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律發(fā)生了較大變化，發(fā)病頻率上升，造成了嚴(yán)重的社會(huì)影響和重大的經(jīng)濟(jì)損失。流感病毒屬于正粘病毒科THOMYXOVIRIDAE是一種含有8個(gè)不同基因片段的分節(jié)段RNA病毒，分為甲A、乙B、丙C三型，其中A型流感病毒對(duì)人類危害最嚴(yán)重，它引起的并發(fā)癥危害大，造成神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的紊亂，已嚴(yán)重影響人類健康和國(guó)家經(jīng)濟(jì)建設(shè)。A型人流感病毒自發(fā)現(xiàn)以來，曾出現(xiàn)過三種亞型1918～1919年西班牙流感流行的是H1N1亞型；1957年之前H2N2亞型出現(xiàn)，而H1N1亞型消失了1968年H3N2亞型出現(xiàn)，而H2N2至今沒有出現(xiàn)；1977年H1N1再次出現(xiàn)，而至今H1N1亞型仍是流行主型，它引起的流感大流行對(duì)人類社會(huì)的嚴(yán)重危害性和公共衛(wèi)生意義都受到關(guān)注。編碼流感病毒的抗原主要有血凝素蛋白HEMAGGLUTININ，HA、神經(jīng)氨酸酶NEURAMINIDASE，NA、核蛋白NUCLEARPROTEIN，NP和基質(zhì)蛋白MMATRIX2等多肽分子。由于HA、NA高度變異決定著病原體的特殊性，致使每年都有新的病毒株出現(xiàn)，給流感的防控帶來了難題。目前，對(duì)于流感尚無(wú)有效的治療手段，而疫苗免疫接種發(fā)揮著重要的作用。流感疫苗經(jīng)過五十多年的發(fā)展，主要有滅活全病毒疫苗、裂解疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗和減毒活疫苗。由于流感病毒的抗原變異性大，使得疫苗生產(chǎn)每年都需要更換病毒株。當(dāng)前使用的注射三價(jià)滅活疫苗有效，但在保護(hù)效果，特別是交叉免疫保護(hù)和接種策略上還不理想；亞單位疫苗使用安全，主要針對(duì)HA、NA抗原，有一定的免疫保護(hù)效果，但是制備周期長(zhǎng)，對(duì)于季節(jié)性流感來說不太實(shí)用，并且保護(hù)譜不全面；DNA疫苗起步較晚，主要針對(duì)某一保護(hù)性抗原成分設(shè)計(jì)，仍然是保護(hù)不全面，另外抗原用量大、特別是潛在基因整合等瓶頸問題；而傳統(tǒng)的減毒活疫苗可以誘導(dǎo)包括細(xì)胞免疫、體液免疫和局部免疫在內(nèi)的較全面的免疫效應(yīng)，但仍保留一定殘余毒力，存在潛在的“返祖”現(xiàn)象，因此迫切需要發(fā)展新的疫苗研制手段。近年來，反向遺傳技術(shù)的誕生為減毒活疫苗的發(fā)展提供了良好的契機(jī)。目前，基于RGREVERSEGEICS，RG技術(shù)的流感減毒活疫苗成為流感疫苗發(fā)展的方向，1999年NEUMANN等、HOFFMANN等學(xué)者建立了完全以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的流感病毒反向遺傳技術(shù)，為流感減毒活疫苗的研制提供了新的思路。以冷適應(yīng)減毒病毒株為背景，拯救重配的流感減毒活疫苗株，進(jìn)而研發(fā)新一代的流感減毒活疫苗是當(dāng)今流感疫苗研究的熱點(diǎn)。本研究采用反向遺傳技術(shù)，通過8質(zhì)粒流感病毒拯救系統(tǒng)，以冷適應(yīng)流感病毒株AANNARB660H2N2的6個(gè)內(nèi)部基因?yàn)椴《竟羌埽c2006～2007年流感病毒株ANEWCALEDONIA2099H1N1的HA和NA基因重排，建立了重配冷適應(yīng)H1N1亞型流感病毒株拯救體系，為流感減毒活疫苗的研發(fā)開辟了新的思路，同時(shí)為流感的安全、有效免疫預(yù)防提供研制策略和理論依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容包括一、雙向轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體PAD3000的構(gòu)建要想得到拯救成功的重配流感病毒株，必須要有一套完善的拯救體系，而在拯救體系中，表達(dá)載體起著至關(guān)重要的作用。為了使得轉(zhuǎn)染質(zhì)粒在拯救系統(tǒng)中能夠高表達(dá)，提高其在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄翻譯水平，我們對(duì)載體PHW2000進(jìn)行了改造，根據(jù)轉(zhuǎn)染所用細(xì)胞的類型，選擇用SV40的多聚APOLYA信號(hào)序列取代牛生長(zhǎng)激素BGH的多聚腺苷酸信號(hào)序列，以期獲得高效的轉(zhuǎn)染效率和病毒拯救效率，為流感減毒活疫苗的制備提供理論基礎(chǔ)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，利用PCDNA31質(zhì)粒為模板，擴(kuò)增得到了SV40的多聚APOLYA信號(hào)序列，該片段大小為138BP。同時(shí)從國(guó)外得到的雙向轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體PHW2000，是在PCDNA30的基礎(chǔ)上經(jīng)過一系列的改造而演化而來的，在該載體的基礎(chǔ)上，我們將其升級(jí)為雙向轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體PAD3000，通過PCR擴(kuò)增和測(cè)序驗(yàn)證基因序列是完全正確的，并且利用序列分析軟件對(duì)其全序列進(jìn)行了分析。以上工作為流感病毒8質(zhì)粒系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體的構(gòu)建奠定了基礎(chǔ)。二、流感病毒8質(zhì)粒系統(tǒng)的構(gòu)建利用構(gòu)建好的雙向轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體PAD3000載體系統(tǒng)，選擇冷適應(yīng)、減毒的流感病毒株AANNARB660的6個(gè)內(nèi)部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS作為拯救病毒骨架，人工合成其基因全序列，同時(shí)引入PB1391E，581G，661T，PB2265S，NP34G5個(gè)氨基酸的突變位點(diǎn)，根據(jù)己發(fā)表的序列設(shè)計(jì)擴(kuò)增6個(gè)基因的特異引物對(duì)。將2006～2007年WHO宣布的H1N1亞型流感病毒疫苗株ANEWCALEDONIA2099，接種10～11日齡SPF雞胚增殖，通過蔗糖密度梯度離心純化病毒，提取基因組總RNA，反轉(zhuǎn)錄成CDNA。根據(jù)HOFFMANN等發(fā)表的通用引物序列擴(kuò)增HA和NA基因并測(cè)序。為獲得準(zhǔn)確的5和3端序列，在PCR過程中采用高保真聚合酶，且挑選8～10個(gè)克隆測(cè)序，保證序列的準(zhǔn)確性。經(jīng)序列分析軟件比對(duì)，得到拼接出含5和3端非編碼區(qū)的8個(gè)基因的全長(zhǎng)序列。設(shè)計(jì)帶有BSMBⅠ、BSAⅠ或AARⅠ酶切位點(diǎn)的引物擴(kuò)增AANNARB660的6個(gè)內(nèi)部基因片段和ANEWCALEDONIA2099的HA和NA基因，分別克隆入PAD3000，并進(jìn)行了測(cè)序驗(yàn)證，從而構(gòu)建了8個(gè)POLⅠPOLⅡ系統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄傣達(dá)質(zhì)粒，分別命名為PMDVAPB2，PMDVAPB1，PMDVAPA，PMDVANP，PMDVAM，PMDVANS，PMDVAHA，PMDVANA，以期通過同一個(gè)載體、轉(zhuǎn)染后利用細(xì)胞中的POLⅠ和POLⅡRNA聚合酶、實(shí)現(xiàn)VRNA和MRNA的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，為冷適應(yīng)H1N1亞型流感病毒減毒株的構(gòu)建提供了保證。三、重配H1N1亞型流感病毒減毒株的制備1、冷適應(yīng)流感病毒拯救系統(tǒng)的驗(yàn)證用ANEWCALEDONIA2099的2個(gè)表面基因HA和NA或冷適應(yīng)病毒株AANNARB660的任意一個(gè)內(nèi)部基因，而其它內(nèi)部基因來自APR834，進(jìn)行所有組合的基因重排，即8種71和1種62組合形式，將相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)質(zhì)粒組合，共轉(zhuǎn)染COS1細(xì)胞，均產(chǎn)生了預(yù)期組合、有感染性的H1N1亞型流感病毒，表明構(gòu)建的8個(gè)轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體均能有效工作，且冷適應(yīng)病毒株的6個(gè)內(nèi)部病毒骨架能夠協(xié)同發(fā)揮作用，為進(jìn)一步篩選和構(gòu)建重配冷適應(yīng)流感病毒株奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)用整合APR834的8個(gè)基因的重組質(zhì)粒作陽(yáng)性對(duì)照，也產(chǎn)生了轉(zhuǎn)染子病毒。在這個(gè)過程中，優(yōu)化共轉(zhuǎn)染體系，在35MMDISH上即可產(chǎn)生足以直接用雞胚增殖的子代病毒。對(duì)71組合的PB2PR8、PR8轉(zhuǎn)染子代病毒及62組合的PR8RMDVA進(jìn)行了初步鑒定和部分生物學(xué)特性分析。經(jīng)電鏡觀察，轉(zhuǎn)染子病毒的形態(tài)與野生型流感病毒相似。RTPCR表明引入的氨基酸突變?cè)谧哟《局写嬖?。HA、HI和IFAINDIRECTIMMUNOFLUECENTASSAY，IFA顯示有重配病毒產(chǎn)生。PR8RMDVA的PFU結(jié)果表明低溫如33℃更利于重配病毒的繁殖，經(jīng)過雞胚傳代和MDCK感染實(shí)驗(yàn)，PR8RMDVA病毒能在雞胚中高滴度增殖，感染雞胚的能力強(qiáng)，這與提供表面基因的MPR834病毒株相似，而且對(duì)雞胚的毒力弱、低溫利于病毒增殖這又與提供6個(gè)內(nèi)部基因的AANNARB660相似。以上這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了冷適應(yīng)病毒拯救系統(tǒng)的有效性。2、H1N1流感病毒減毒疫苗株的拯救及鑒定利用驗(yàn)證好的冷適應(yīng)的流感病毒6個(gè)質(zhì)粒系統(tǒng)，作為拯救流感病毒的骨架，與構(gòu)建好的2006～2007年流感病毒株ANEWCALEDONIA2099H1N1的HA和NA基因進(jìn)行重排，8個(gè)重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染COS1細(xì)胞，成功得到了重配H1N1亞型流感減毒病毒株，拯救的流感減毒株在第一代雞胚尿囊液中病毒效價(jià)為1512～11024，連續(xù)傳4代之后，發(fā)現(xiàn)病毒效價(jià)穩(wěn)定，各代之間HA和NA基因的同源性達(dá)999％以上，經(jīng)電鏡觀察發(fā)現(xiàn)重配病毒的形態(tài)與野生流感病毒株沒有明顯差別，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了初步的鑒定，深入的研究工作還在進(jìn)行之中。以上建立的反向遺傳系統(tǒng)重配冷適應(yīng)H1N1亞型流感病毒株，為流感病毒減毒活疫苗的研制和黏膜免疫機(jī)制研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

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簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文呼吸道合胞病毒（RSV）肺炎患兒TOLL樣受體4（TLR4）及IFNΓ檢測(cè)與臨床的相關(guān)性研究姓名朱秋皎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師劉繼賢20070501呼吸道合胞病毒RSV肺炎患兒TOLL樣受體4TLR4及IFNY檢測(cè)與臨床的相關(guān)性研究中文摘要性PO045005；提示RSV感染早期IFN3的濃度與正常對(duì)照組無(wú)明顯變化，不受過敏因素的影響，但與病情的嚴(yán)重程度呈負(fù)相I’關(guān)，輕度者升高，重癥者受抑。結(jié)論1、RSV肺炎感染早期外周血單核細(xì)胞表面TLR4表達(dá)升高；TLR4的表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度無(wú)明顯的相關(guān)性；并且RSV感染時(shí)TLR4的表達(dá)不受過敏因素的影響。2、RSV感染早期血清中IFN|R的濃度與正常嬰幼兒無(wú)明顯差異IFN丫的水平與疾病的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)，重度患兒IFNY濃度顯著低于輕度患兒，對(duì)重度的RSV肺炎患兒使用干擾素是合理的；RSV感染時(shí)IFNY的濃度與過敏因素之問未發(fā)現(xiàn)有顯著的聯(lián)系。關(guān)鍵詞呼吸道合胞病毒肺炎；TOLL樣受體4TLR4；IFN3Ⅱ作者朱秋皎指導(dǎo)老師劉繼賢

簡(jiǎn)介：分類號(hào)墼3壘2UDC查晝密級(jí)公玨編號(hào)Q22窆SQ213Q三窆江淳大擎碩士學(xué)位論文MASTER，SDISSERTATION鼠IFN如重組腺病毒載體體內(nèi)抗肺癌活性研究學(xué)科專業(yè)凼型堂作者姓名韭金指導(dǎo)教師芒玉蘭答辯日期2Q12生Q魚旦Q旦2012年06月學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書LILQLLI1IIIIIIIIIIIIIILLLLLLLY2093566本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)江蘇大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部?jī)?nèi)容或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密酉。學(xué)位論文作者簽名張金指導(dǎo)教師簽名瑚少芝L1。I工年06月OLEL扣FD年196月19F日