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簡(jiǎn)介：本研究依據(jù)成就目標(biāo)的四分結(jié)構(gòu)理論，采取實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)的方法設(shè)置了非評(píng)估性情境和評(píng)估性情境，通過實(shí)驗(yàn)者指定成就目標(biāo)定向的方式引導(dǎo)被試進(jìn)入特定的成就目標(biāo)狀態(tài)，以考察成就目標(biāo)對(duì)個(gè)體認(rèn)知作業(yè)成績(jī)和情緒感受的影響。研究一考察在非評(píng)估性情境下，成就目標(biāo)定向?qū)€(gè)體認(rèn)知作業(yè)成績(jī)和情緒感受的影響，以了解在“無壓力情境”下四種成就目標(biāo)分別會(huì)導(dǎo)致哪些認(rèn)知和情感反應(yīng)；研究二考察在非評(píng)估性情境和評(píng)估性情境兩種條件下，成就目標(biāo)對(duì)個(gè)體認(rèn)知作業(yè)成績(jī)和情緒感受的影響，以探討壓力情境會(huì)給不同的成就目標(biāo)造成什么樣的影響。結(jié)果表明⑴在非評(píng)估性情境下，成就目標(biāo)對(duì)個(gè)體認(rèn)知作業(yè)成績(jī)沒有顯著性影響；在情緒感受方面，四種成就目標(biāo)所引起的生理喚醒程度不存在顯著差異，但情緒感受的性質(zhì)有顯著區(qū)別掌握趨近目標(biāo)和成績(jī)趨近目標(biāo)愉快程度最高，成績(jī)回避目標(biāo)焦慮程度最高。⑵在個(gè)體經(jīng)歷非評(píng)估情境和評(píng)估性情境兩種條件時(shí)，評(píng)估性情境下的認(rèn)知作業(yè)成績(jī)高于非評(píng)估情境下的認(rèn)知作業(yè)成績(jī)，但是成就目標(biāo)對(duì)個(gè)體在兩種情境下認(rèn)知作業(yè)成績(jī)變化的影響不顯著；在情緒主觀感受方面，評(píng)估性情境下掌握趨近目標(biāo)的興奮度最高，掌握回避目標(biāo)的興奮度最低，四種成就目標(biāo)在焦慮程度和愉快程度上沒有顯著差別。在情緒的生理喚醒程度上，評(píng)估性情境下個(gè)體的生理喚醒程度比非評(píng)估性情境下顯著升高，而四種成就目標(biāo)之間沒有出現(xiàn)顯著性差異。⑶在非評(píng)估性情境和評(píng)估性情境兩種條件下，任務(wù)卷入程度同個(gè)體主觀情緒感受均存在正向相關(guān)的關(guān)系。

簡(jiǎn)介：目的建立基于TAQMAN探針的實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)與定量輪狀病毒G4型VP7基因的方法。方法輪狀病毒ROTAVIRUS，RV是5歲以下兒童重癥腹瀉最主要的病原體，其感染引起的死亡占兒童死亡數(shù)的5％，其中90％發(fā)生在發(fā)展中國家。WHO推薦所有國家的免疫程序中應(yīng)當(dāng)包含輪狀病毒疫苗，以預(yù)防輪狀病毒感染。實(shí)時(shí)定量PCRPOLYMERASECHAINREACTION可連續(xù)收集一只或多只PCR管中每個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，該信號(hào)與模板的拷貝數(shù)相關(guān)。一個(gè)完美的定量PCR其斜率為332，對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增效率為100％，截距在33到37個(gè)循環(huán)之間且R2為100。本試驗(yàn)?zāi)康氖墙⒁环N基于TAQMANR探針的快速、準(zhǔn)確、特異的RV熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR方法，用于RVG4型VP7基因的檢測(cè)及定量。使用RTPCRREVERSETRANIONPCR以輪狀病毒G4型VP7基因?yàn)槟０逶O(shè)計(jì)引物和探針，探針5端距離上游引物3端8BP，使用JOE標(biāo)記探針3端報(bào)告基團(tuán)，5端標(biāo)記ECLIPE淬滅基團(tuán)。從輪狀病毒G4型中擴(kuò)增出VP7基因，將該基因構(gòu)建于質(zhì)粒并克隆培養(yǎng)。從質(zhì)粒中擴(kuò)增并純化的VP7DNA為模板，體外轉(zhuǎn)錄RNA。將該RNA純化并使用光度法定量，稀釋RNA至102107拷貝ΜL數(shù)量級(jí)作為RTQPCRREALTIMEQUANTITATIVEPCR標(biāo)準(zhǔn)品，優(yōu)化PCR體系，通過絕對(duì)定量法測(cè)定樣品中G4型病毒RNA拷貝數(shù)。結(jié)果所獲得的RNA標(biāo)準(zhǔn)品純度高，可以用于G4型輪狀病毒的檢測(cè)和定量。建立的擴(kuò)增體系具有寬廣的動(dòng)態(tài)范圍，擴(kuò)增效率大于90％，所構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線R2大于098；相比普通的RTPCR方法，定量PCR靈敏度提高了約一個(gè)數(shù)量級(jí)，可輕易自100拷貝ΜL數(shù)量級(jí)樣本中檢出目的基因，試驗(yàn)重復(fù)性好，特異、靈敏。結(jié)論基于TAQMANR探針的RTQPCR可以特異、靈敏的檢測(cè)和定量細(xì)胞培養(yǎng)物中的輪狀病毒G4型VP7基因。

簡(jiǎn)介：中圖法分類號(hào)R734學(xué)校代碼10661學(xué)號(hào)2012399密級(jí)公開碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（專業(yè)型學(xué)位）人BMIBMI1基因基因SHRNASHRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建、慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建、病毒的濃縮及其病毒滴度的測(cè)定病毒的濃縮及其病毒滴度的測(cè)定姓名名羅逸專業(yè)業(yè)腫瘤學(xué)研究方向研究方向頭頸部腫瘤的綜合治療頭頸部腫瘤的綜合治療導(dǎo)師師鄒彥培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位遵義醫(yī)學(xué)院2015年4月目錄1、論文人BMI1基因SHRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建、病毒的濃縮及其病毒滴度的測(cè)定中英縮略詞對(duì)照表1中文摘要2英文摘要3前言4材料與方法6結(jié)果12討論19結(jié)論20參考文獻(xiàn)212、綜述233、致謝324、作者簡(jiǎn)介34基金課題編號(hào)遵義市匯川區(qū)課題

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士論文SHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYMASTER’STHESISANANIMALMODELOFEPSTEINBARRVIRUSASSOCIATEDHEMOPHAGOCYTICLYMPHOHISTIOCYTOSISINHUMANIZEDNOD/SCIDMICEANDANALYSISOFPROGNOSISOFCHILDRENWITHHEMOPHAGOCYTICSYNDROMENAMEXUDONGQINGNUMBER1117229025TUTORYUANXIAOJUNDECIPLINEPEDIATRICSDATE2014429XINHUAHOSPITALAFFILIATEDTOSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYSCHOOLOFMEDICINE上海交通大學(xué)碩士論文

簡(jiǎn)介：人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIRUS，HPV感染能引起宮頸癌、生殖器疣等多種性傳播疾病，嚴(yán)重危害著人類健康。由于HPV的生活周期依賴于上皮細(xì)胞的分化，傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)方法不能實(shí)現(xiàn)HPV的擴(kuò)增，同時(shí)從病人組織中分離的病毒也極其有限，這制約了HPV的分子生物學(xué)研究和HPV疫苗的保護(hù)性評(píng)價(jià)。研究人員已經(jīng)發(fā)展出多種系統(tǒng)以克服病毒來源不足的限制通過組織移植和筏式組織培養(yǎng)擴(kuò)增一些HPV型的病毒，以及用重組痘病毒、腺病毒、酵母表達(dá)構(gòu)建HPV假病毒。但是這些病毒假病毒生產(chǎn)方法的操作較復(fù)雜，效率均不高，無法滿足大量試驗(yàn)的需要。本論文利用HPV研究方面的新進(jìn)展，結(jié)合本研究中心的實(shí)際條件，用磷酸鈣轉(zhuǎn)染方法將含HPV優(yōu)化基因的質(zhì)粒和報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，成功構(gòu)建獲得了高滴度的感染性HPV16、HPV18、HPV6和HPV11四種假病毒，電鏡觀察證實(shí)獲得的假病毒具有與天然病毒相同的形態(tài)，隨后用標(biāo)準(zhǔn)中和單抗進(jìn)行的鑒定證實(shí)假病毒具有與天然病毒相似的感染性。這些結(jié)果說明獲得的假病毒可以替代天然病毒用于HPV生物學(xué)研究和HPV候選疫苗的保護(hù)性評(píng)價(jià)。我們用獲得的四種假病毒對(duì)29種哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行了感染比較。發(fā)現(xiàn)HPV16和HPV18假病毒有很廣的細(xì)胞嗜性，能感染人、嚙齒動(dòng)物和猴不同組織的多種細(xì)胞系；HPV6和HPV11假病毒能感染人的多種細(xì)胞系，但是基本不感染嚙齒動(dòng)物和猴的細(xì)胞。該結(jié)果暗示“高?！毙虷PV和“低?！毙虷PV對(duì)細(xì)胞的感染機(jī)制可能不同?；诙嗉?xì)胞感染結(jié)果，我們選擇293FT細(xì)胞作為假病毒感染靶細(xì)胞，建立了假病毒中和模型。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)篩選獲得了HPV16、HPV18和HPV6的單抗各幾十株，我們用假病毒感染中和試驗(yàn)從中鑒定出17株HPV16中和單抗、9株HPV18中和單抗和22株HPV6中和單抗。滴度最高的16株HPV6中和單抗有12株能阻斷HPV11假病毒的感染，其中5株單抗對(duì)HPV11假病毒的中和滴度能達(dá)到104以上，表明HPV6和HPV11具有共同的中和表位。鑒定出的這些中和單抗對(duì)于全面鑒定HPV中和表位和HPV疫苗質(zhì)控均有較大的幫助。另外，用假病毒中和模型對(duì)本實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的HPV16、HPV18和HPV6VLP候選疫苗的免疫保護(hù)性進(jìn)行了鑒定。中和試驗(yàn)結(jié)果表明，HPV16、HPV18、HPV6VLP在小鼠、家兔和山羊中均能誘導(dǎo)出很強(qiáng)的中和抗體應(yīng)答，具有很好的疫苗應(yīng)用前景。尤其值得注意的是，兔和山羊的HPV6VLP免疫血清能有效阻斷HPV11假病毒的感染，提示該HPV6VLP候選疫苗可能對(duì)HPV11也具有交叉保護(hù)性。我們進(jìn)一步用不同劑量的HPV16VLP候選疫苗免疫了80只小鼠，測(cè)得該候選疫苗的中和抗體ED50值為00136ΜG，為下一步臨床試驗(yàn)所需的合適劑量提供了參考。

簡(jiǎn)介：病毒感染所引起的呼吸道疾病已經(jīng)成為世界性的常見疾病之一。人博卡病毒（HBOV）作為引起呼吸道感染的常見病毒之一，雖然發(fā)現(xiàn)相對(duì)較晚，但受到科研工作者的廣泛關(guān)注。而有效的診斷和治療需要具有高效價(jià)的抗體，才能建立系統(tǒng)的方法，單克隆抗體是病原檢測(cè)和診斷的主要工具。目前，有關(guān)HBOV單克隆抗體制備的研究很少，因此，HBOV單克隆抗體的制備對(duì)于HBOV的診斷和所引起的疾病的治療有重要意義。本研究利用強(qiáng)大的原核表達(dá)載體PET30A構(gòu)建重組質(zhì)粒，通過大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組VP2蛋白，通過柱上變復(fù)性純化目的蛋白。利用血清檢查抗原。以純化蛋白作為抗原，免疫小鼠，利用雜交瘤技術(shù)及間接ELISA方法篩選陽性雜交瘤細(xì)胞，小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生單克隆抗體，并對(duì)單克隆抗體進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，構(gòu)建出HBOVVP2基因的重組質(zhì)粒，表達(dá)并純化得到了重組HBOVVP2蛋白，利用呼吸道感染患者血清檢測(cè)抗原，陽性率為777％，與國內(nèi)外檢出率基本一致，說明抗原較好。利用雜交瘤技術(shù)篩選得到了穩(wěn)定細(xì)胞株，該細(xì)胞株可以分泌單克隆抗體。利用該株細(xì)胞在小鼠腹部誘導(dǎo)產(chǎn)生具有單克隆抗體的腹水，根據(jù)檢測(cè)和鑒定，所產(chǎn)生的單克隆抗體為IGG抗體，具有較好抗原抗體結(jié)合能力，效價(jià)達(dá)到14105。本實(shí)驗(yàn)得到的單克隆抗體，有益于對(duì)HBOV的深入研究。該研究結(jié)果對(duì)HBOV診斷、治療和進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文PGCFU存活素慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建姓名高斯媛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)傳染病指導(dǎo)教師齊俊英教授201005華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文4學(xué)功能研究。3將病毒感染小鼠原代肝細(xì)胞結(jié)果結(jié)果1雙酶切及測(cè)序證實(shí)從YACI中獲得的SURVIVIN基因連接到PCDNA31質(zhì)粒上，除第317位堿基由腺苷酸突變?yōu)樾叵汆奏ね?，其余都與NCBI基因文庫中SURVIVIN基因切合，該突變不影響蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)生理功能。2構(gòu)建好的PGCFUSURVIVIN表達(dá)質(zhì)粒的陽性克隆菌株轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后熒光顯微鏡下觀察可見綠色熒光，WESTERNBLOTTING結(jié)果見一與標(biāo)準(zhǔn)品大小相同的條帶。在293T細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝，最終純化出PGCFUSURVIVIN慢病毒顆粒。3PGCFUSURVIVIN質(zhì)?？沙晒Ω腥拘∈笤渭?xì)胞，但因感染率仍未達(dá)到滿意要求，目前仍在改進(jìn)。結(jié)論結(jié)論借助T載體及PCDNA31質(zhì)粒，成功在PGCFU慢病毒表達(dá)質(zhì)粒上建立了PGCFUSURVIVIN慢病毒表達(dá)質(zhì)粒。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞肝衰竭；存活素；PGCFU

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多護(hù)理人員和患者對(duì)護(hù)理文化認(rèn)知差異的比較研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)NGF對(duì)大鼠周圍神經(jīng)損傷的療效研究姓名陳渝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)（骨科）指導(dǎo)教師黃朝梁王大勇20070401重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文TCID50DNTPDABPCNSTMDDL420ACMMBISAPSDSTEM匣DDDTAABPBMETWEENTISSUECULTILREINFECTIOUSDO∞50DEOXYRIBONUCLEOSIDETRIPHOSPHATEDIAMINOBENZIDINEPENICILINSTMYCINDEIONIZEDWATERACRYLAMIDEMETHYLENEBISAERYLAMIDEAMNLONIURNPERSULFATESODIUMDODECYLSULPHATETETRAMETHYLETHYLENEDIAMINEDITHIOTHREITOLAMINOETHANOICACIDBROM洲ORPHENOLBLUEMETHANOLNONIONICSURFACEACTIVEAGENT250％組織培養(yǎng)感染劑量三磷酸脫氧核苷二氨基聯(lián)苯胺青霉素鏈霉素去離子水丙烯酰胺甲叉雙丙烯酰胺過硫酸銨十二烷基硫酸鈉四甲基乙二胺二硫蘇糖醇甘氨酸溴酚藍(lán)甲醇非離子型表面活性劑

簡(jiǎn)介：自2012年起，一種新型冠狀病毒中東呼吸綜合征冠狀病毒DLEEASTRESPIRATYSYNDROMECONAVIRUS，MERSCOV持續(xù)在中東地區(qū)蔓延，已造成上百例感染病例，致死率高達(dá)50％。這是繼2003年爆發(fā)的嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒SEVEREACUTERESPIRATYSYNDROMECONAVIRUS，SARSCOV、2004年發(fā)現(xiàn)的人類冠狀病毒NL63HUMANCONAVIRUSNL63，HCOVNL63以及2006年發(fā)現(xiàn)的人類冠狀病毒HKU1（HUMANCONAVIRUSHKU1，HCOVHKU1）之后發(fā)現(xiàn)的又一個(gè)人類冠狀病毒家族的新成員，這表明冠狀病毒對(duì)人類健康的威脅始終存在，然而到目前為止，在世界范圍內(nèi)還沒有切實(shí)有效的能用于臨床治療MERSCOV、SARSCOV等冠狀病毒感染的疫苗或特效藥物。冠狀病毒作為單股正鏈RNA病毒，編碼約16個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NONSTRUCTURALPROTEINS，NSPS介導(dǎo)自身的轉(zhuǎn)錄復(fù)制過程。這其中，NSP5（即主蛋白酶）參與將冠狀病毒基因組編碼的復(fù)制酶多蛋白POLYPROTEINS，PPLA，PPLAB酶切水解為病毒基因組復(fù)制所必需的16個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白的過程，因而在冠狀病毒的轉(zhuǎn)錄復(fù)制中發(fā)揮了至關(guān)重要作用。并且在人體內(nèi)不存在NSP5的同源蛋白，因而NSP5蛋白是一個(gè)良好的抗冠狀病毒靶點(diǎn)。本論文首先運(yùn)用分子置換法解析了MERSCOVNSP5與N3抑制劑復(fù)合物的227A晶體結(jié)構(gòu)，分析了NSP5與N3抑制劑間的精確相互作用，驗(yàn)證了MERSCOVNSP5以同源二聚體的形式發(fā)揮活性功能，以CYSHIS二體構(gòu)成催化活性中心，為理解N3抑制MERSCOVNSP5的反應(yīng)機(jī)理提供了良好的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)并且我們通過體外構(gòu)建的熒光酶活體系定量分析了N3分子對(duì)MERSCOVNSP5的抑制活性，從結(jié)構(gòu)和功能兩方面證實(shí)了N3確實(shí)是MERSCOVNSP5的良好抑制劑其次，我們比較并分析了冠狀病毒亞科不同成員MERSCOV、SARSCOV、HCOVHKU1和IBV的NSP5結(jié)合N3抑制劑的高度結(jié)構(gòu)保守性及輕微差異，期望為抗MERSCOV的抑制劑開發(fā)提供優(yōu)化指導(dǎo)。本論文的另外一部分工作為SARSCOVNSP13蛋白的蛋白質(zhì)晶體學(xué)研究。NSP13具有解旋酶及NTPASE酶功能，是冠狀病毒轉(zhuǎn)錄復(fù)制過程不可缺少的核心酶之一，也是一個(gè)良好的抗冠狀病毒藥物靶點(diǎn)。在本論文中，我們通過合理的分子克隆構(gòu)建及有效的蛋白表達(dá)純化手段，獲得了SARSCOVNSP13母體晶體的X射線衍射數(shù)據(jù)29A，為最終解析SARSCOVNSP13的三維結(jié)構(gòu)奠定了良好的基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：日本腦炎JAPANESEENCEPHALITIS，JE，又稱流行性乙型腦炎，是由日本腦炎病毒JAPANESEENCEPHALITISVIRUS，JEV引起的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)人畜共患急性傳染病。其致死率高達(dá)30％左右，50％的患者會(huì)留下永久性的后遺癥，其中，中國的JE發(fā)病數(shù)占世界總發(fā)病數(shù)的80％以上。庫蚊伊蚊是該病的主要傳播媒介，而豬則是重要的傳染源和放大器。豬患JE的主要表現(xiàn)為懷孕母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱仔、公豬睪丸炎及少數(shù)仔豬呈神經(jīng)癥狀，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，用于JE免疫預(yù)防的疫苗有滅活疫苗和弱毒疫苗兩種，其安全性和較高的生產(chǎn)應(yīng)用成本已成為人們?nèi)找骊P(guān)注的問題。近年來，病毒分子生物學(xué)和反向遺傳學(xué)的發(fā)展為開發(fā)新型JE疫苗提供了新的技術(shù)手段。本研究為進(jìn)一步探索JEVWHE株基因組功能、致病機(jī)理及構(gòu)建高效新型疫苗，開展了以下工作1JEVWHE株全基因組特征分析本研究設(shè)計(jì)了11對(duì)特異性引物，采用RTPCR技術(shù)擴(kuò)增得到覆蓋JEVWHE株基因組全長CDNA的11個(gè)特異性片段，測(cè)序分析表明，JEVWHE株基因組由一個(gè)開放閱讀框F，10296個(gè)核苷酸和5′端非編碼區(qū)5′UTR，95個(gè)核苷酸和3′端非編碼區(qū)3′UTR，585個(gè)核苷酸組成。核苷酸序列和氨基酸序列分析表明，WHE株與P3株親緣關(guān)系最近，但3′UTR形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)與VELLEP20778株3′UTR形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)最相似與黃病毒科其他屬成員比較，3′UTR最末端約84個(gè)核苷酸所形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)相當(dāng)保守。WHE株與P3株的膜蛋白E擁有M76、G306和L408三個(gè)特有氨基酸，而在其它19株JEV為T76、E306、S408，推測(cè)可能與病毒的宿主及組織嗜性有關(guān)。WHE株E蛋白中存在控制黃病毒毒力的RGD387389基序，而一部分弱毒株也有該基序，提示JVE毒力型的決定簇具有毒株特異性。由全基因組序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育圖與由E基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育圖僅有一些細(xì)微的差別，表明E基因在研究各分離株之間進(jìn)化關(guān)系中具有重要意義；從GENBANK中調(diào)出不同時(shí)間和地區(qū)分離的140株JEVE基因，構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育圖譜。2JEVWHE株全長CDNA的長鏈RTPCR法擴(kuò)增采用長鏈RTPCR技術(shù)擴(kuò)增基因組全長CDNA。對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定，并對(duì)含復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的3′末端和5′末端非編碼區(qū)擴(kuò)增片段進(jìn)行了測(cè)序分析。擴(kuò)增結(jié)果表明，擴(kuò)增出的JEVWHE株基因組全長CDNA分子近11KB大??；非編碼區(qū)測(cè)序分析表明，擴(kuò)增產(chǎn)物為WAE株所特有。證明長鏈RTPCR法可用于JEVWHE株基因組全長CDNA的擴(kuò)增。3JEVWHE株ONA疫苗載體構(gòu)建采用RTPCR技術(shù)擴(kuò)增PRME和NS1全基因并進(jìn)行序列分析，將其分別克隆于真核表達(dá)載體PAVX1，構(gòu)建的表達(dá)載體PAVX1PRME和PAVX1NS1，酶切鑒定和序列分析表明，JEVWHE株DNA疫苗載體構(gòu)建成功。4WHE株NS1基因在大腸桿菌中的表達(dá)將NS1基因克隆到PET28B表達(dá)載體，構(gòu)建了PET28BNS1重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主大腸桿菌BL21DE3，并對(duì)其進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，表達(dá)產(chǎn)物相對(duì)分子質(zhì)量約為43KU。為JE亞單位疫苗和DNA疫苗的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：詞匯是英語語言的重要組成部分，也是英語學(xué)習(xí)者水平高低的標(biāo)志之一。短語動(dòng)詞是英語詞匯的重要組成部分，被公認(rèn)為英語學(xué)習(xí)的重點(diǎn)和難點(diǎn)之一，因?yàn)閯?dòng)詞和小品詞組合靈活，語義豐富，英語學(xué)習(xí)者不易掌握。以往對(duì)英語短語動(dòng)詞的研究多從句法、語義或語義與句法相結(jié)合的角度進(jìn)行，雖然取得一定研究成果，但為短語動(dòng)詞教學(xué)和學(xué)習(xí)所提供的有效方法不多。自LAKOFF提出概念隱喻理論以來，國內(nèi)外很多學(xué)者開始從認(rèn)知視角研究英語短語動(dòng)詞學(xué)習(xí)，進(jìn)行了各種相關(guān)理論研究和實(shí)證研究。但綜合分析前人研究，從認(rèn)知理據(jù)視角對(duì)英語短語動(dòng)詞進(jìn)行分類研究、驗(yàn)證認(rèn)知教學(xué)法對(duì)何種類型的短語動(dòng)詞有較好教學(xué)效果和學(xué)習(xí)收效的實(shí)證研究尚為數(shù)不多。本文以概念隱喻理論和意象圖式理論為理論框架，以認(rèn)知理據(jù)為切入點(diǎn)，擬驗(yàn)證和解答以下兩個(gè)研究問題第一，認(rèn)知教學(xué)法能否促進(jìn)大學(xué)生對(duì)短語動(dòng)詞的學(xué)習(xí)第二，大學(xué)生學(xué)習(xí)何種類型的短語動(dòng)詞學(xué)習(xí)效果更好，為什么本研究選取山東政法學(xué)院英語專業(yè)大學(xué)二年級(jí)2個(gè)自然班為受試，其中一班為實(shí)驗(yàn)組，二班為控制組；兩個(gè)自然班的短語動(dòng)詞初始水平基本相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)組采用認(rèn)知教學(xué)法學(xué)習(xí)短語動(dòng)詞，控制組采用傳統(tǒng)教學(xué)法學(xué)習(xí)短語動(dòng)詞。實(shí)驗(yàn)教學(xué)所用短語動(dòng)詞，均選自學(xué)生教材；擴(kuò)展教學(xué)和測(cè)試所用短語動(dòng)詞，均選自牛津短語動(dòng)詞詞典。實(shí)驗(yàn)為期12周，每周教學(xué)時(shí)間為45分鐘。該實(shí)證研究采用試卷測(cè)試的方式收集相關(guān)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明首先，認(rèn)知教學(xué)法能夠有效促進(jìn)學(xué)生對(duì)短語動(dòng)詞的學(xué)習(xí)。其次，通過認(rèn)知教學(xué)法，學(xué)生對(duì)比喻型的短語動(dòng)詞學(xué)習(xí)效果更好，對(duì)字面型和完成型短語動(dòng)詞的學(xué)習(xí)效果也有明顯提升。本研究同時(shí)表明，以小品詞為中心，運(yùn)用概念隱喻和意象圖式相結(jié)合的認(rèn)知方式來闡釋短語動(dòng)詞的認(rèn)知理據(jù)，有助于學(xué)生理解和學(xué)習(xí)短語動(dòng)詞的多重意義，有助于學(xué)生推測(cè)和理解短語動(dòng)詞的比喻義和延伸義。該研究驗(yàn)證了大學(xué)生學(xué)習(xí)概念隱喻和意象圖式理論的相關(guān)知識(shí)，有助于他們理解短語動(dòng)詞的理據(jù)性，從而提高了短語動(dòng)詞的學(xué)習(xí)效率，為英語短語動(dòng)詞的學(xué)習(xí)提供了較為有效的方法。希望本研究能為英語短語動(dòng)詞的教學(xué)和學(xué)習(xí)提供行之有效的參考、啟示和借鑒。

簡(jiǎn)介：本課題的研究目標(biāo)是對(duì)流感病毒血凝素轉(zhuǎn)位結(jié)構(gòu)域HA2進(jìn)行截短和突變篩選獲得長度最短、轉(zhuǎn)位功能較強(qiáng)的HA2優(yōu)化短肽用于靶向促凋亡分子的構(gòu)建。在本課題組前期的工作中已將HA2引入到靶向促凋亡分子中體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有轉(zhuǎn)位活性能夠促進(jìn)殺傷效應(yīng)分子從內(nèi)吞體轉(zhuǎn)位到胞漿增強(qiáng)抗腫瘤作用。在此基礎(chǔ)上本研究對(duì)HA2進(jìn)行改構(gòu)優(yōu)化設(shè)計(jì)獲得了6種截短體和3種突變體通過體外紅細(xì)胞溶解實(shí)驗(yàn)、腫瘤細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)和熒光共振能量轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)FRET比較這些HA2截短體突變體的轉(zhuǎn)位功能強(qiáng)弱。首先我們利用體外紅細(xì)胞溶解實(shí)驗(yàn)對(duì)HA2改構(gòu)體進(jìn)行功能篩選如果破壞紅細(xì)胞膜的能力越強(qiáng)就會(huì)導(dǎo)致上清中血紅蛋白含量越高表明HA2改構(gòu)體的轉(zhuǎn)位功能越強(qiáng)。以野生型HA2作為對(duì)照將合成的上述9種HA2截短體突變體與分離的人外周血紅細(xì)胞相孵育。劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)和時(shí)間效應(yīng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均表明在相同條件下E5C3的溶血能力強(qiáng)于HA2E5弱于HA2并且呈現(xiàn)出時(shí)間依賴關(guān)系和某種程度的劑量依賴關(guān)系。羧基端的3個(gè)截短體C3、C15、C8中僅C3具有溶血能力提示HA2的2個(gè)螺旋區(qū)對(duì)于溶血功能至關(guān)重要去掉一個(gè)或兩個(gè)均會(huì)使HA2喪失溶血功能。氨基端的2個(gè)截短體N15和N3均喪失了溶血活性說明氨基端第一個(gè)氨基酸的重要性與文獻(xiàn)報(bào)道一致。而中間截短體M7、E5C3M7在增大劑量或延長時(shí)間時(shí)其溶血百分率均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于HA2表明中間氨基酸殘基可能對(duì)HA2的溶血功能有貢獻(xiàn)。通過體外紅細(xì)胞溶解實(shí)驗(yàn)我們選出5個(gè)HA2截短體突變體進(jìn)行下一步細(xì)胞內(nèi)的功能篩選其中HA2作為陽性對(duì)照E5C3的轉(zhuǎn)位功能明確、強(qiáng)于HA2C15、M7、E5C3M7的轉(zhuǎn)位功能微弱遠(yuǎn)低于HA2。其次利用腫瘤細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)對(duì)HA2改構(gòu)體進(jìn)行功能篩選。將HA2截短體突變體引入本組前期構(gòu)建的其中一種靶向促凋亡分子中如果這些重組分子對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用越強(qiáng)就表明HA2改構(gòu)體的轉(zhuǎn)位功能越強(qiáng)。本研究構(gòu)建了5種E23SFVFDTHA2截短體突變體TBID分別轉(zhuǎn)染兩種HER2陽性乳腺癌細(xì)胞BT474和SKBR3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果表明E5C3的轉(zhuǎn)位效率強(qiáng)于野生型HA2E5C3M7、C15、M7的轉(zhuǎn)位效率弱于HA2。最后利用FRET實(shí)驗(yàn)對(duì)HA2改構(gòu)體進(jìn)行功能篩選。將HA2截短體突變體插入EGFPFRET供體和MCHERRYFRET受體之間構(gòu)建HBSAG靶向的融合指示分子如果FRET信號(hào)丟失越多、MCHERRY彌散分布的程度越高就表明HA2改構(gòu)體的轉(zhuǎn)位功能越強(qiáng)。構(gòu)建了5種SCFV15EGFPFDTHA2截短體突變體MCHERRY穩(wěn)定轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞并建系預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示COS7細(xì)胞分泌表達(dá)的SCFV15EGFPFDTHA2MCHERRY可內(nèi)化進(jìn)入乙肝表面抗原HBSAG陽性肝癌細(xì)胞PLCPRF5中并且呈內(nèi)吞體顆粒狀分布為進(jìn)一步優(yōu)化FRET檢測(cè)窗口、分析MCHERRY亞細(xì)胞分布比率提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。經(jīng)過上述實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證HA2的突變截短體E5C3具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)位功能為下一步將其應(yīng)用于靶向促凋亡分子奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的復(fù)制大鼠慢性間斷性缺氧CIH模型，通過觀察CIH過程中大鼠認(rèn)知功能的變化、前額葉皮層和海馬神經(jīng)元組織學(xué)改變以及膽堿能系統(tǒng)的改變，探討CIH致大鼠認(rèn)知障礙與相關(guān)腦區(qū)神經(jīng)元組織學(xué)及膽堿能系統(tǒng)改變的關(guān)系，為進(jìn)一步闡明阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征OSAS導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)性依據(jù)。方法選取成年雄性SD大鼠體重約250±20G40只，隨機(jī)均分為4組對(duì)照組、慢性間斷性缺氧1周CIH1W組、慢性間斷性缺氧3周CIH3W組和慢性間斷性缺氧5周CIH5W組。各組大鼠均常規(guī)飼養(yǎng)。CIH各組大鼠每日放入自制的缺氧艙內(nèi)缺氧8小時(shí)，分別連續(xù)缺氧1周、3周和5周；應(yīng)用MRIS水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)和空間搜索實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)照組和CIH各組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的變化；利用HE染色在光學(xué)顯微鏡下對(duì)前額葉皮層和海馬組織學(xué)改變進(jìn)行觀察；利用免疫組織化學(xué)方法顯示前額葉皮層和海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶CHAT和煙堿型乙酰膽堿受體Α4NACHRA4陽性細(xì)胞表達(dá)，應(yīng)用IMAGEPROPLUS60分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，結(jié)果用光密度OD值表示。計(jì)量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS120統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1MRIS水迷宮測(cè)試①定位航行實(shí)驗(yàn)水下平臺(tái)各組大鼠逃避潛伏期隨實(shí)驗(yàn)天數(shù)增加而逐漸縮短，不同天數(shù)間比較，逃避潛伏期有明顯差異P005；CIH5W組大鼠逃避潛伏期明顯延長，差異具有顯著性P005；CIH5W組大鼠在中環(huán)停留時(shí)間明顯減少，差異具有顯著性P005。2前額葉皮層和海馬神經(jīng)元組織學(xué)改變與對(duì)照組比較，CIH大鼠前額葉皮層和海馬變性壞死神經(jīng)元增多，并且隨著缺氧時(shí)間延長，上述改變呈逐漸加重趨勢(shì)。3CHAT在前額葉皮層和海馬的陽性表達(dá)結(jié)果CHAT陽性表達(dá)定位于胞漿中，呈棕黃色顆粒狀。各組均有CHAT陽性表達(dá)細(xì)胞。與對(duì)照組比較，CIH1W組前額葉皮層和海馬CHAT陽性表達(dá)減少，但差異無顯著性P005；CIH3W組和CIH5W組前額葉皮層和海馬CHAT陽性表達(dá)明顯減少，差異具有顯著性P005；CIH5W組前額葉皮層和海馬NACHRA4陽性表達(dá)明顯減少，差異具有顯著性P005。結(jié)論1慢性間斷性缺氧大鼠認(rèn)知功能障礙隨缺氧時(shí)間延長呈逐漸加重趨勢(shì)，慢性間斷性缺氧達(dá)一定時(shí)間后大鼠出現(xiàn)明顯的認(rèn)知功能障礙；2慢性間斷性缺氧致大鼠認(rèn)知功能障礙的機(jī)制與大鼠前額葉皮層和海馬神經(jīng)元組織學(xué)改變有關(guān)；3慢性間斷性缺氧致大鼠認(rèn)知功能障礙的機(jī)制與大鼠前額葉皮層和海馬膽堿能系統(tǒng)改變有關(guān)。

簡(jiǎn)介：乙肝病毒全長基因組整合于轉(zhuǎn)基因小鼠品系＃59的第9號(hào)染色體內(nèi)。該轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)有乙肝病毒蛋白顯著表達(dá)但并不合成完整病毒顆粒。因此，＃59系轉(zhuǎn)基因小鼠在本研究中被用作動(dòng)物模型，觀察乙肝病毒蛋白影響下，宿主肝、腎組織的基因表達(dá)譜改變。AFFYMERTRIX小鼠430A芯片實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，與乙肝病毒蛋白陰性對(duì)照小鼠相比，轉(zhuǎn)基因小鼠腎組織顯著上調(diào)表達(dá)基因520個(gè)，顯著下調(diào)表達(dá)基因76個(gè)。差異表達(dá)基因功能歸類分析顯示，轉(zhuǎn)基因小鼠腎組織中補(bǔ)體激活、凝血與急性期反應(yīng)相關(guān)生理通路被強(qiáng)烈激活。斑點(diǎn)免疫檢測(cè)亦在蛋白水平證實(shí)了補(bǔ)體C3成分在腎組織中的上升。＃59系轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)并無乙肝病毒蛋白抗原一抗體復(fù)合物檢出。因此，上述實(shí)驗(yàn)觀察從動(dòng)物模型的角度支持了局部、長期的病毒蛋白表達(dá)在乙肝相關(guān)性腎病病因?qū)W中起重要作用的假說。基因芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織中顯著上調(diào)表達(dá)基因43個(gè)，顯著下調(diào)表達(dá)基因104個(gè)。其中多個(gè)與細(xì)胞生長、凋亡相關(guān)基因如JUN、FOS、IGFBPL、IGFBP5、LJSP2等的表達(dá)發(fā)生顯著改變，表明肝組織細(xì)胞生長與凋亡狀態(tài)受到乙肝病毒蛋白的顯著影響。但是，以上細(xì)胞凋亡調(diào)控通路改變的趨勢(shì)并不一致，故此，肝細(xì)胞在乙肝病毒蛋白作用下的凋亡水平變化尚有待進(jìn)一步研究。轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織基因表譜達(dá)改變還提示肝組織細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白聚合水平下降，網(wǎng)絡(luò)化水平上升，導(dǎo)致潛在移行能力下降。同時(shí)，某些細(xì)胞間質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)改變也提示細(xì)胞的潛在移行能力與侵犯能力下降。這一觀察與文獻(xiàn)報(bào)道中HBX的生理效能似成拮抗。其生物學(xué)意義有待進(jìn)一步觀察與證實(shí)。