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      • 簡介:風疹病毒是披膜病毒科風疹病毒屬中的唯一成員,其自然儲存宿主是人。雖然風疹病毒的感染對于兒童或者成年人是一種良性的傳染病,但是在女性妊娠早期感染卻會導致新生兒的先天畸形。檢測、診斷風疹疾病對于提高優(yōu)生診斷措施,預防不良疾病有著重要的意義。我國目前關于風疹病毒感染的診斷,主要有以下幾種模式病毒學檢驗、血清學檢驗以及應用分子生物學技術的PCR鑒定。但是由于單方面診斷風疹感染被認為是不可靠的,因此普遍認為多種方式聯(lián)合應用檢驗會具有更另人信服的檢驗結果。膠體金免疫層析技術是近年來新發(fā)展起來的一種快速、方便、小誤差的檢驗技術,已經(jīng)被廣泛應用在檢測早孕試紙。由于其日趨成熟的技術應用以及多種其他方法所無法比擬的優(yōu)點,已經(jīng)有越來越多的人把目光集中在這一技術上。目前國內(nèi)大部分仍然依靠進口產(chǎn)品或者相關技術,生產(chǎn)膠體金免疫層析技術檢測風疹病毒感染的試紙條,因此從市場的角度而言,具有很廣闊的應用前景。本課題的立意在于應用金膠免疫層析技術與單克隆抗體技術相結合,開發(fā)出一種能夠同時檢測TCH五種抗原的快速診斷試紙條,一方面可以減少妊娠期婦女健康檢查所需的時間和費用,另一方面可以填補國內(nèi)此類產(chǎn)品沒有規(guī)模生產(chǎn)的空缺。本論文是整個課題的一個部分,即抗風疹病毒單克隆抗體的制備以及快速診斷試紙條的初步探索。本實驗對鼠源抗風疹單克隆抗體的制備、鑒定以及采用酶聯(lián)免疫檢測技術制備ELISA風疹快速診斷試劑盒進行了初步的嘗試。其結果顯示成功建立了3株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的細胞株,分別命名為E7,D6,G3。相應IGG亞類分別為IGG2B、IGG2B、IGGM,均與RV抗原有強陽性反應。在此基礎上,初步確立了以酶聯(lián)技術為核心的診斷方案。
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        上傳時間:2024-03-11
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      • 簡介:目的研究核苷酸類似物治療后達到停藥標準的慢性乙型肝炎患者在停藥時肝內(nèi)乙型肝炎病毒DNA甲基化狀態(tài)從表觀遺傳學的角度探討核苷類似物停藥復發(fā)的分子病毒學機制。方法選擇經(jīng)核苷酸類似物治療后達到停藥標準實現(xiàn)HBEAG血清轉換、HBVDNA持續(xù)陰轉后繼續(xù)用藥2448周的HBEAG陽性慢性乙型肝炎患者18例進行肝組織活檢抽提肝內(nèi)HBVDNA對HBVDNA進行亞硫酸氫鹽化處理PCR擴增HBV的3個CPG島克隆后測序。對所有患者每4周隨訪1次連續(xù)隨訪24周觀察停藥后的病毒學應答情況根據(jù)病毒學應答情況分為持久應答組和停藥復發(fā)組。分析比較停藥復發(fā)組和持久應答組之間肝內(nèi)HBVDNA甲基化狀態(tài)的差異。同時觀察兩組間停藥時血清HBSAG定量水平的差異。結果停藥時血清中HBSAG在停藥復發(fā)組中的水平明顯高于持久應答組差異具有統(tǒng)計學意義P0037。停藥時肝內(nèi)HBVDNA載量在兩組間無顯著性差異P005。停藥時兩組間肝內(nèi)HBVDNA甲基化狀態(tài)無統(tǒng)計學差異P005。結論核苷酸類似物停藥時血清HBSAG水平越低越不易復發(fā)可以作為停藥復發(fā)的預測指標。停藥時肝內(nèi)HBVDNA載量及HBVDNA甲基化狀態(tài)能否作為核苷酸類似物停藥復發(fā)的預測指標需要進一步研究。
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        上傳時間:2024-03-11
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      • 簡介:目前,模糊語已經(jīng)吸引了許多語言學家的注意。它已經(jīng)不可避免地成為了一個熱門話題。模糊語是什么顧名思義,它是一種模糊的語言,除了精確這一特征外,它也是自然語言中的一種本質特征。它的特征主要體現(xiàn)在精確性,禮貌性,不確實性和變異性。盡管人們不愿意承認,他們也會發(fā)現(xiàn)模糊語一直跟隨著他們。在外交場合中,政治家們有時無法直截了當?shù)乇磉_自己的觀點和意見。這時,外交模糊語扮演了一個十分重要的角色。它可以給聽者留有一些空間,讓聽者自己做出判斷。外交模糊語其實是表層模糊,但深層明確。政治家們?yōu)榱吮苊怆p方?jīng)_突,而使用的一種語言策略。外交模糊語的主要存在形式在詞匯,句法和語篇層面上。它獨特的特征為婉轉曲折的說法,暗示,模糊,折衷說和無謂的重復。在先前對外交模糊語的研究中,主要是從語用學的角度來分析,尤其是合作原則和禮貌原則。他們主要研究的是暗含意義與交際功能,并沒有研究意義的產(chǎn)生機制。本文將從概念整合理論一個全新的角度,對外交模糊語意義產(chǎn)生的機制進行研究。通過概念整合理論的整合過程和整合網(wǎng)絡模型,能夠清楚地看到意義產(chǎn)生機制。本文主要研究的是基于概念整合理論對外交模糊語的認知研究,語料的主要來源為外交語言的模糊現(xiàn)象。溫家寶總理在擔任總理期間(20032012),總計召開十次這樣的記者招待會,每次記者招待會至少長達兩個半小時,累計回答問題149個。本文的語料來源于溫家寶總理答中外記者問的文本資料。根據(jù)概念整合網(wǎng)絡模型的特點,對這些例子進行了有效的分類。通過研究這些文本,作者總結出概念整合理論有強大的解釋力來闡述外交模糊語,更詳細闡釋了意義產(chǎn)生的過程,它提供了一種全新的視角。外交模糊語也可以從概念整合理論進行論述而不僅僅局限于違反原則,暗含意義等語用學方面。
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        上傳時間:2024-03-13
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      • 簡介:第三軍醫(yī)大學碩士學位論文腺病毒介導PTEN基因對結腸癌細胞生物學行為的影響姓名朱自滿申請學位級別碩士專業(yè)外科學(普外)指導教師孫念緒20050501第三軍醫(yī)入學碩士學位論文英文縮寫ADBPCMVCPEDABDMS0FBSN【APKMOIM訂ODPAGEPCRP13KPMSFPNNP卯SPTKSRRPCRSDSTBE’玎JMEDXGAL主要英文縮寫詞簡表英文全稱ADENOVIRUSBASEPAIRCYTOMEGALOVIRUSCYTOPATHICEFFECTDIAMINOBENZIDINEDIMETHYLSULFOXIDEFETALBOVINESERUMMITOGENACTIVATEDPROTEINKINASEMUPTIPLIC畸OFINFECTION345DIMENTYLFIFIAZOL2Y125DIPHMYTEWAZOLIULNBROMIDEOPTICALDENSITYPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPOLYMERASECHAINREACTIONPHOSPHOINOSIIDE3KINASEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDEPHOSPHATASEANDTENSINHOMOLOGUEDELETED∞CB代M的SⅡ鹼10PROTEINTYROSINEPHOSPHATASESPROTEINTYROSINEKINASESREVERSETRANSCRIPTIONPCRSODIUMDODECYLSULPHATETRIS/BORATE/EDTAELECTROPHOMSISBUTIEFN,N,N’,NTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINE5一BROMO4一CHLORO3INDOLYLBDGALACTOSIDE中文全稱腺病毒堿基對人類巨細胞病毒細胞病變效應二氨基聯(lián)苯胺二甲基亞砜胎牛血清促細胞分裂素激活的蛋白激酶感染復數(shù)四甲基偶氮唑光密度聚丙烯酰胺凝膠電泳聚合酶鏈式反應三磷脂酰肌醇激酶苯甲磺酰氟與張力蛋白同源在LO號染色體缺失的磷酸酶基因蛋白酪氨酸磷酸酶蛋白酪氨酸激酶反轉錄PCR十二烷基硫酸鈉“IRIS/硼酸FEDTA電泳緩沖液N,N,N’,N’四甲基乙二胺5溴4氯3一吲哚一BD半乳糖苷
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        上傳時間:2024-03-12
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      • 簡介:第一部分目的應用體內(nèi)外實驗方法,研究大鼠肝再生增強因子RATAUGMENTEROFLIVERREGENERATION,RALR對乙型肝炎表面抗原MEPATITISBSURFACEANTIGENHBSAG免疫產(chǎn)生抗體、細胞因子和對脾臟細胞增殖的影響;同時觀察RALR對牛血清白蛋白BOVINESERUMALBUMINBSA免疫產(chǎn)生抗體的影響。方法1將PPIC9KRALR酶切線性化后轉染入宿主菌GS115中,在甲醇誘下進行誘導表達。采用SDSPAGE及WESTERNBLOT進行表達產(chǎn)物RALR的鑒定,經(jīng)超濾純化后,以3H摻入法測定RALR對肝癌細胞的促增殖活性。2RALR抑制大鼠抗HBS及細胞因子的產(chǎn)生WISTAR大鼠48只,隨機分為6組,每組8只,即生理鹽水組、HBSAG20ΜG只組、HBSAG20TGRALRL00ΜGKG組、HBSAG20GGRALR25PG/KG組、NBSAG20PGPPIC9K表達上清組、HBSAG20RTGCSA10MG/KG組。除生理鹽水組外,其余各組將HBSAG與相應處理因素RALR、空質粒表達產(chǎn)物、CSA等混合后作皮下注射,每周1次,共4次,然后檢測血清中抗TIBS、IL2和IFN7。3RALR抑制大鼠產(chǎn)生白蛋白抗體WISTAR大鼠40只,隨機分為5組,每組8只,即生理鹽水組、BSA25IXG/只組、BSA25ΜGRALR100ΜGKG組、BSA25ΜGPPIC9K表達上清組、BSA25ΜGCSA10MG/KG組。除生理鹽水組外,其余各組將BSA與相應處理因素RALR、空質粒表達產(chǎn)物、CSA等混合后作皮下注射,每周1次,共4次,然后檢測血清抗白蛋白抗體。4RALR抑制脾臟細胞增殖WISTAR大鼠先皮下注射HBSAG1次,2周以后脫頸椎處死,分離脾臟單核細胞,接種到96孔平板中,再加HBSAGLGG/孔和/或相應處理因素RALR、空質粒表達產(chǎn)物等,48小時后加3HTDR,12小時后收集細胞,檢測CPM值。結果所表達的產(chǎn)物為RALR,并且有較強的生物學活性。通過體內(nèi)實驗研究揭示,生理鹽水組和HBSAG20ΜGCSA組均無抗HBS的抗體產(chǎn)生,RALR100PG/KGHBSAG組的8只動物中只有2只出現(xiàn)抗HBS的抗體,空質粒對照組和單用HBSAG組8只動物均出現(xiàn)抗HBS的抗體;RALR100PG/KGBSA組的8只動物中只有3只出現(xiàn)抗BSA抗體,空質粒對照組和單用BSA組8只動物均出現(xiàn)抗BSA的抗體;RALR100ΜGKG能明顯抑制細胞因子IL2及IFN7的產(chǎn)生。體內(nèi)預先用HBSAG致敏,然后分離脾細胞,再用HBSAG體外激活,RALR4PG能明顯脾細胞的增殖。結論RALR能抑制HBSAG和BSA誘導大鼠產(chǎn)生相應抗體及抑制細胞因子IL2及IFN的產(chǎn)生;體外能抑制經(jīng)體內(nèi)致敏的脾細胞的增殖。說明RALR有免疫抑制作用,并且可能參與了嬰幼兒對乙型肝炎病毒感染的耐受。第二部分目的病毒性肝炎是我國最常見的肝臟疾病死亡原因,早期發(fā)現(xiàn)、及時治療是降低死亡率的關鍵,本文目的在于分析病毒性肝炎所致肝衰竭患者的死亡原因,以期對臨床治療有一定的指導作用。方法采用回顧性分析方法,收集我科五年的病毒性肝炎肝衰竭住院死亡病例¨5例,其診斷符合2000年中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲學分會、肝病學分會聯(lián)合修訂的病毒性肝炎防治方案診斷標準。設計病史資料登記表,根據(jù)住院登記號調(diào)取研究對象的病歷資料,摘錄每例病例的臨床和實驗室檢查數(shù)據(jù),臨床和實驗室檢查數(shù)據(jù)的采集選用入院的第1次檢查和死亡前的最后1次檢查作為研究資料。結果1性別男性L03例、女性12例;2年齡17~87歲,平均457歲,在3L~50之間的占53%。3分型急性重型肝炎2例、亞急性重型肝炎4例、慢性重型肝炎89例、肝硬化20例,慢性重型肝炎大部分有肝硬化基礎疾病。4病原學特點114例乙肝標志物陽性,其中12例重疊其它嗜肝病毒感染;¨0例病例中,HBEAG陽性有24例24/110,218%,HBEAB陽性有61例6L/¨O,555%;85例病例中,HBVDNA定最1LO5者有68例68/85,80%,HBVDNA定量1LO5者有L7例17/85,20%,兩者比較有明顯差異。5并發(fā)癥51肝性腦病80例80/115,696%出現(xiàn)肝性腦病。52出血51例發(fā)生出血51/115,443%,以消化道出血為主50/115,434%。53肝腎綜合征63例發(fā)生肝腎綜合征63/115,548%。54電解質紊亂115例病例中,94例發(fā)生電解質紊亂94/1L5,817%,以低鈉、低氯為主。55感染115例病例中,9L例出現(xiàn)感染91/115,791%,以原發(fā)性腹膜炎為主79/115,687%。結論病毒性肝炎肝衰竭致病人主要以慢性重型肝炎和肝硬化為主,HBVDNA的活躍復制及病毒的變異對病情的發(fā)展有一定的影響,應積極尋求早期的抗病毒治療;并發(fā)癥發(fā)生率高,應積極控制并發(fā)癥的發(fā)生,有利于病情的轉歸。第三部分目的初步觀察聚乙二醇化干擾素A2A治療慢性乙型肝炎及其對拉米夫定耐藥的臨床療效。方法將病人分為2組。I組14例患者,為單用聚乙二醇化干擾素A2A組,每周1次皮下注射聚乙二醇化干擾素CT2A,劑量為135TG~180GX6個月,每月檢查1次肝功能及血常規(guī),治療結束時檢查乙型肝炎病毒血清標志物及HBVDNA定量;H組13例患者,該組均用了1年以上的拉米夫定LAMIVUDINE,LAM,且出現(xiàn)了耐藥,此組采用拉米夫定和聚乙二醇化干擾素A2A聯(lián)用3個月,然后停用LAM,繼續(xù)用聚乙二醇化干擾素A2A至6個月,治療期間的檢測同I組。結果I組有1例、II組有2例血清UBSAG消失,且抗HBS陽性;I組和II組各有8例57%和4例308%%出現(xiàn)HBEAG的血清學轉換及HBVDNA定量1OLO5,兩組各有5例丙氨酸氨基轉移酶ALT、天冬氨酸氨基轉移酶AST的復常。在停止LAM治療的病人中,沒有發(fā)生肝功能的衰竭。不良反應是白細胞和血小板的降低,沒有嚴重不良事件發(fā)生。結論聚乙二醇化干擾素A2A單用或其治療LAM耐藥患者,都能降低HBVDNA水平,促進HBEAG的血清學轉換。
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        上傳時間:2024-03-11
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      • 簡介:錯誤記憶FALSEMEMY指的是錯誤地聲明一個以前并未呈現(xiàn)過的新詞或并未發(fā)生的事件出現(xiàn)過。雖然系統(tǒng)研究知覺和記憶的工作幾乎同時開始于19世紀后期,但對錯誤記憶的研究卻比知覺錯覺的系統(tǒng)研究晚了一個多世紀。EBBINGHAUS的定量研究為錯誤記憶奠定了基礎,而錯誤記憶的開創(chuàng)性研究始于BARTLETT1932??贪逵∠骃TEREOTYPE指的是按照性別、種族、年齡或職業(yè)等進行社會分類,形成的關于某類人的固定印象,普遍認為它與某些特征和行為相聯(lián)系?;诳贪逵∠蟮腻e誤記憶是一種普遍存在的錯誤記憶現(xiàn)象,由于對與刻板印象一致、不一致社會信息在加工、表征、提取等方面存在很大差異,人們會對與刻板印象一致、不一致性信息產(chǎn)生不同程度的錯誤記憶。近幾年,研究者對影響基于刻板印象錯誤記憶的各種因素進行了大量的研究,并提出了一些理論模型和觀點來闡釋該現(xiàn)象的內(nèi)在心理機制,主要有“圖式過濾器模型”SCHEMAFILTERMODEL、“聯(lián)想網(wǎng)絡模型”ASSOCIATIVEWKMODEL、“靈活編碼模型”ENCODINGFLEXIBILITYMODEL、“模糊痕跡理論”FUZZYTRACETHEY、“構建性記憶模型”CONSTRUCTIVEMEMYFRAMEWK。這些理論從不同角度解釋了基于刻板印象的錯誤記憶,但有時會出現(xiàn)不一致的解釋,也就是說關于基于刻板印象的錯誤記憶的加工機制還存在著不同的觀點。影響基于刻板印象錯誤記憶的因素很多。就認知方式來看,它體現(xiàn)著個體在組織和表征信息時的差異,不同場依存、場獨立個體的認知改組能力不同的,他們在知覺和認知加工過程中所慣用的方式也是各不相同。與場依存?zhèn)€體相比,場獨立個體不易受分心物的干擾,其心理分化程度較高,心理分化水平高低直接影響認知重組技能、注意的監(jiān)控技能、信息的組織和提取能力的高低。另外,在加工大量信息時,場獨立個體不可避免地表現(xiàn)出更高的效率和精確性,成績明顯好于場依存?zhèn)€體。在解釋基于刻板印象錯誤記憶時都比較注重對項目的編碼,那么不同認知方式的個體可能由于其編碼傾向或加工傾向的不同,最終導致不同的基于刻板印象的錯誤記憶。因此,不同認知方式可能是影響基于刻板印象錯誤記憶的一個重要因素。不同的注意水平條件下,個體的加工水平和作業(yè)成績是不相同的。認知負荷較重的分散注意環(huán)境能夠削弱感知者對記憶細節(jié)的表征能力,編碼時的分散注意促進了類別思維即對某類事物的看法的使用MACRAEBODENHAUSEN,2000,更多依靠類別預期PRECONCEPTION來引導加工與刻板印象有關的信息,所以更容易產(chǎn)生錯誤記憶。為探討場依存性認知方式和注意水平對基于刻板印象錯誤記憶的影響,本研究在實驗前測選出典型男女職業(yè)各一個和典型等量男女雙字姓名,利用計算機呈現(xiàn)與刻板印象一致、不一致姓名一職業(yè)配對男、女姓名都對半的學習刺激,然后,把學習刺激配對中的姓名或配對和等量干擾刺激組成情況與學習刺激類似隨機混合,進行再認測驗。實驗一探討在集中注意條件下,不同認知方式個體對再認新姓名的職業(yè)判斷是否存在基于刻板印象的錯誤記憶,采用2認知方式場依存;場獨立3基于姓名的職業(yè)判斷類型按與刻板印象一致性判斷;按與刻板印象不一致性判斷;不知道其職業(yè)二因素混合設計,認知方式為被試間因素,職業(yè)判斷類型為被試內(nèi)因素。實驗二探討在集中注意條件下,不同認知方式個體對姓名職業(yè)配對再認時是否也存在基于刻板印象的錯誤記憶,并引入MACRAE2002所采用的RK判斷程序考察不同被試對錯誤再認配對的RK判斷是否存在差異,采用2認知方式場依存;場獨立2配對類型一致性配對;不一致性配對2再認判斷R判斷K判斷三因素混合設計,認知方式為被試間因素,配對類型和再認判斷為被試內(nèi)因素。實驗三探討不同認知方式個體在不同注意水平下的基于刻板印象的錯誤再認是否存在顯著性差異,采用2認知方式場依存;場獨立2注意水平集中注意;分散注意2配對類型一致性配對;不一致性配對三因素混合設計,認知方式、注意水平為被試間因素,配對類型為被試內(nèi)因素。研究結果表明1在集中注意條件下,對錯誤再認的新姓名更多地按刻板印象一致性進行職業(yè)判斷。2在集中注意條件下,對一致性姓名一職業(yè)配對的錯誤再認較差,并普遍伴隨著“知道”感而不是“記得”感認知方式與配對類型存在顯著的交互作用,對于場獨立個體而言,對不一致配對的錯誤再認顯著好于對一致配對的,對場依存?zhèn)€體而言,對兩類配對的錯誤再認沒有差異。3認知方式與注意水平之間存在明顯交互作用,在分散注意下,場獨立個體的錯誤再認顯著好于場依存?zhèn)€體的,而在集中注意下,兩者的錯誤再認沒有差異,4集中注意下的錯誤再認顯著好于分散注意下的。本研究具有重要的理論價值和現(xiàn)實意義。在理論上,拓展了錯誤記憶和認知方式的研究領域,為構建和完善關于錯誤記憶和認知方式的理論提供實驗支持。在實踐上,為人們改善錯誤記憶提供有力指導。
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      • 簡介:目的探討人輪狀病毒HUMANROTAVIRUSHRV感染對乳鼠腸道外心、肝、肺等組織的損傷情況,通過CPGODN干預實驗,尋找防治RV腸道外感染的新方法。方法1細胞培養(yǎng)、病毒增殖和病毒感染滴度測定。2乳鼠腸道外組織HRV感染選用24只ICR乳鼠,在實驗條件下,隨機分為3組正常對照組A組8只,腹腔注射HRV組B組8只,CPGODN預處理組C組8只,A組正常喂養(yǎng),B組第4天腹腔注射牛理鹽水NS004ML一劑,C組出生后開始即腹腔注射小劑量CPGODN50ΜG連續(xù)3天,第4天用HRV腹腔注射B、C組一劑感染乳鼠。于第7天處死各組乳鼠,留取心、肝、肺標本;光鏡下觀察心、肝、肺組織病理學改變;電鏡觀察心、肝、肺組織超微結構的改變;比較各組乳鼠腸道外臟器損傷的情況。采用逆轉錄PCR方法檢測HRVVP7RNA片段了解心、肝、肺組織輪狀病毒RNARVRNA復制情況。結果1光鏡下腹腔注射HRV組B組、心肌組織,肝組織,肺組織有不同程度的病理改變;CPGODN預處理組C組各組織的病變相對較輕,正常對照組A組乳鼠上述器官未見明顯改變。2電鏡下心、肝、肺組織超微結構的變化21腹腔注射HRV組B組,心肌局部肌絲排列稀疏,肌膜下有水腫,心肌細胞內(nèi)淋巴細胞浸潤,大部分心肌細胞核位于細胞中間、固縮,核膜間隙擴大,周邊內(nèi)質網(wǎng)擴張,并在心肌細胞核旁邊發(fā)現(xiàn)RV顆粒。肝臟組織超微結構的變化表現(xiàn)為,多數(shù)肝細胞核固縮崩解現(xiàn)象,細胞內(nèi)較多空泡變性,微絨毛脫落,肝細胞線粒體腫脹局限性空泡形成凝集常見,炎癥細胞浸潤細胞間隙狄氏間隙,以淋巴細胞為主,部分柯否氏細胞浸潤,淋巴細胞與肝細胞緊密接觸浸入肝細胞內(nèi),攻擊肝細胞現(xiàn)象。肝細胞內(nèi)大量的脂質顆粒沉積。部分肝細胞毛細膽管明顯擴張,膽汁淤積,肝細胞膽色素顆粒沉積。肺組織超微結構的變化表現(xiàn)為,肺泡腔中較多巨噬細胞浸潤,淋巴細胞浸潤,細胞核輕度固縮,肺泡板狀小體增大,數(shù)量顯著減少,Ⅱ型肺泡上皮細胞線粒體有較多空泡形成,可見有脫落細胞。22CPGODN預處理組C組,心肌細胞線粒體局限性空泡形成,細胞核固縮不明顯。肝臟組織超微結構的變化表現(xiàn)為,肝細胞局灶性溶解胞質溶解,胞內(nèi)少量空泡形成,肝細胞內(nèi)部分粗面內(nèi)質網(wǎng)擴張,線粒體腫脹不著。肺組織超微結構的變化表現(xiàn)為,Ⅱ型肺泡上皮細胞線粒體稍有腫脹,少量空泡形成,肺泡板狀小體稍有減少,肺泡毛細血管腔中少量中性粒細胞附壁。23正常對照組A組,各組織的超微結構正常。3RTPCR結果HRV腹腔注射組B組肝、心臟組織HRVVP7RNA表達呈陽性,CPGODN預處理組C組肝、心臟呈弱陽性,半定量分析組間比較有顯著性差異P<001,兩組的肺組織呈陰性表達;正常對照組A組各組均陰性。結論1腹腔注射HRV可使ICR乳鼠的心、肝、肺臟組織產(chǎn)生病變,其中以心臟及肝臟組織的損害較為明顯,提示心及肝臟可能是HRV的易感組織之一,HRV感染對肺的損害相對較輕。2CPGODN預處理組心肌組織,肝組織,肺組織的病變有不同程度的減輕,提示CPGODN對幼鼠心肌組織,肝組織,肺組織的輪狀病毒感染可能具有一定的保護作用。
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        上傳時間:2024-03-11
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      • 簡介:碩士學位論文論文題目輪狀病毒性胃腸炎合并驚厥與單純輪狀病毒性胃腸炎患兒臨床特點的比較研究生姓名孟祥營指導教師姓名王浙東陳旭勤專業(yè)名稱兒科學研究方向小兒神經(jīng)論文提交日期2015年3月
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        上傳時間:2024-03-11
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      • 簡介:第三軍醫(yī)大學博士學位論文PROBDNF對老齡鼠認知功能的影響及機制研究姓名許志強申請學位級別博士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師周華東20071101第三軍醫(yī)大學博士學位論文進一步認識PROBDNF在老齡海馬神經(jīng)發(fā)生以及突觸可塑性中的作用,對于AD的預防有重要意義。為此,本實驗的主要內(nèi)容包括基因重組抗裂解PROBDNF蛋白的表達、純化、鑒定及生物學活性測定;探討PROBDNF對老齡鼠認知功能的影響;通過體內(nèi)外實驗從海馬神經(jīng)發(fā)生及突觸可塑性變化角度探討PROBDNF對老齡鼠認知功能影響的機制。方法1基因重組PROBDNF蛋白在大腸桿菌中的表達及活性鑒定以大鼠點突變型基因的全長PROBDNFCDNA為模板,用PCR方法擴增PR0BDNF的CDNA,應用基因重組技術將大鼠PROBDNFCDNA克隆到質粒PE●28A中,進行限制性內(nèi)切酶酶切分析和DNA測序鑒定。將重組質粒轉化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導表達后,用NINTA親和層析純化獲取蛋白,用SDSPAGE和WESTEMBLOT方法鑒別,DAPI法檢測重組蛋白對PCL2細胞凋亡的影響。2PROBDNF對老齡鼠認知功能影響實驗動物采用18月齡C57BL/6J鼠,隨機分為三組PROBDNF組、抗PFOBDNF組和對照組,每組。10只,分別采用微量滲透泵連續(xù)6天向右側海馬注射PROBDNF、羊抗PROBDNF或BSA,濃度均為1“G/PL,速度02UL/11。術后21天,采用MORRIS水迷宮迸行航行定位實驗測定老齡鼠的平均逃避潛伏期、游泳速度,并進行空間探索實驗測定動物在月臺所在象限時間的百分比。3PROBDNF對老齡鼠海馬神經(jīng)發(fā)生的影響實驗動物采用18月齡C57BL/6J鼠,隨機分為三組PROBDNF組,抗PROBDNF組及對照組,每組10只,分別采用微量滲透泵連續(xù)6天向右側海馬注射BSA、PROBDNF或羊抗PROBDNF,濃度均為1“∥1,速度O2“L/H。動物術后當日始給予BRDU50MG厥G體重,腹腔注射,每日2次,持續(xù)6天。分別于術后7天、28天檢測海馬細胞增殖情況,并利用免疫熒光三標法對BRDU陽性細胞進行鑒定;4PROBDNF對老齡鼠海馬突觸可塑性的影響實驗動物采用18月齡C57BL/6J鼠,隨機分為三組PROBDNF組,抗PROBDNF組及對照組,每組5只,分別采用微量滲透泵連續(xù)6天向右側海馬注射BSA、PROBDNF或羊抗PROBDNF,濃度均為1PG/斗1,速度02“L/H。術后28天使用免疫印跡分析方法檢測海馬SYNAPSINI和PCREB的變化。5PROBDNF對培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元增殖和凋亡的影響采用出生24小時的雌性P75NTR基因敲除鼠以及野生型鼠海馬建立海馬神經(jīng)元原9
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      • 簡介:天津醫(yī)科大學碩士學位論文腺病毒介導的PEDF基因抑制大鼠脈絡膜新生血管的實驗研究姓名王穎申請學位級別碩士專業(yè)眼科學指導教師顏華20070501天津醫(yī)科大學碩士學位論文處死,摘取眼球行組織病理學及TUNEL染色檢查,觀察CNV消退及新生血管內(nèi)皮細胞凋亡情況。FFA記錄光斑滲漏程度,光鏡200倍視野下取連續(xù)切片的CNV最大中央厚度進行測量,應用SPSSLL5軟件進行統(tǒng)計分析。結果1FFA檢查結果給藥后7、14及28天,A組、C組給藥后比給藥前眼底視網(wǎng)膜光凝斑滲漏減輕;A組比B組、C組比D組CNV發(fā)生率降低PO012病理學檢查空白對照組光凝后14天,光鏡下可見光凝區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮RETINALPIGMENTEPITHELIAL,RPE層和BRUCH膜破裂,RPE細胞遷移增殖,CNV形成,纖維母細胞和膠原纖維增多。給藥后3天,各實驗組光鏡下改變與空白對照組相似。給藥后7天,光鏡下A組與C組CNV數(shù)量減少;B組與D組顯示CNV呈現(xiàn)顯著的纖維血管增殖FIBROVASCULARPROLIFERATIONFVP,其中可見大量新生血管,管腔內(nèi)可見紅細胞。給藥后14天,光鏡下A組與C組CNV數(shù)量明顯減少,管腔縮??;B組與D組CNV保持穩(wěn)定的FVP狀態(tài),可見大量新生血管。給藥后28天,光鏡下A組與C組CNV狀態(tài)與給藥后14天相似;B組與D組CNV中存在大量的纖維細胞、膠原纖維、遷移增殖的RPE細胞和新生血管。3CNV中央厚度測量結果31給藥后A組比N組、C組比N組CNV中央厚度減小P001。其中A組內(nèi)N組比7、14、28天組CNV中央厚度大PO01;3天組比7、14、28天組CNV中央厚度大P005、P001、P001;7天組比14、28天組CNV中央厚度大PO01。C組內(nèi)N組比7、14、28天組CNV中央厚度大PO05、P001,P001;3天組比14、28天組CNV中央厚度大PO01;7天組比14、28天組CNV中央厚度大PO0132給藥后不同時間點A組比B組、C組比D組CNV中央厚度均有所減小PO01。
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        上傳時間:2024-03-11
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      • 簡介:自然界中,病毒與宿主間存在協(xié)同進化的現(xiàn)象。一方面,宿主不斷進化出防御機制來抑制病毒入侵、復制等,另一方面,病毒針對宿主的防御機制也進化出獨特的機能來規(guī)避宿主對它的抑制。協(xié)同進化不僅促進了兩個相互作用物種之間的適應性,增加了生物的多樣性,同時也對病毒跨物種傳播帶來了很大阻礙。在人免疫缺陷病毒HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS,HIV的研究中發(fā)現(xiàn),宿主細胞天然存在先天免疫因子,對病毒的侵入、復制和出芽存在限制作用。這些因子被稱為“宿主限制因子”,參與先天性免疫反應,干擾病毒生命周期的不同階段,達到對病毒的限制作用。目前已發(fā)現(xiàn)的限制因子有APOBEC3GAPOLIPOPROTEINBMRNAEDITINGENZYME3G、TRIM5ΑTRIPARTITEMOTIFPROTEIN5Α、TETHERIN也被稱做CD317或HM124、SAMHD1STERILEΑMOTIFDOMAINHDDOMAINCONTAININGPROTEIN1。這些限制因子可有效地限制逆轉錄病毒的感染,是宿主抵抗病毒感染的一個重要防御屏障。TETHERIN是一種具有特殊拓撲結構的脂筏相關跨膜蛋白,它可通過連接病毒和宿主細胞膜,將新出芽的病毒束縛在細胞膜表面,從而限制病毒釋放。在恒河猴免疫缺陷病毒SIV恒河猴實驗動物模型的研究中,人們同樣發(fā)現(xiàn)了恒河猴細胞內(nèi)也存在TETHERIN蛋白來抑制SIV在恒河猴體內(nèi)的擴散。而且恒河猴的TETHERIN基因具有一定多態(tài)性,但是對于恒河猴TETHERIN基因多態(tài)性及其多態(tài)性對自身蛋白結構和功能的影響并沒有明確報道。另一方面,TETHERIN作為一種天然抗病毒蛋白,在不同的物種中,它的蛋白結構也有所不同,具有物種特異性。如果能使HIV跨過恒河猴TETHERIN蛋白的限制作用,這可以成為對AIDS動物模型優(yōu)化的重要一步。方法本研究通過基因測序、序列比對、蛋白質結構預測等技術,探尋恒河猴TETHERM基因位置上可能影響其蛋白功能的CSNP位點,再把不同基因型的TETHERIN插入到真核表達載體PCDNA31中,構建不同基因型的TETHERIN表達載體。用不同基因型的TETHERIN表達載體與SIVMAC239共轉染293T細胞,檢測轉染后SIV的病毒載量,以及流式檢測TETHERIN基因在細胞表面的表達情況,最后對恒河猴進行基因型的分類,比較不同基因型SIV感染恒河猴之間的病毒復制情況。另一方面,構建表達恒河猴TETHERIN蛋白的TZMBL細胞系,通過HIV1NL43在表達恒河猴TETHERIN蛋白的TZMBL與不表達恒河猴TETHERIN蛋白的TZMBL的混合細胞中培養(yǎng),在體外模擬自然進化,最終使得HIV1NL43能夠產(chǎn)生適應性毒株,感染表達恒河猴TETHERIN蛋白的TZMBL,實現(xiàn)HIV1NL43對恒河猴TETHERIN限制作用的跨越。結果序列比對發(fā)現(xiàn)8個非同義突變位點用PSIPRED軟件預測分析,發(fā)現(xiàn)其中G41A、T128C、C129和A333C這四個CSNP位點會使TETHERIN蛋白的二級結構發(fā)生變化。在各基因型恒河猴TETHERIN表達載體與SIVMAC239共轉染293T的試驗中發(fā)現(xiàn),轉染不同TETHERIN表達載體的293T細胞表達SIV病毒的載量之間并無統(tǒng)計學差異。但是不同基因型恒河猴的TETHERIN基因轉染細胞后TETHERIN蛋白表達有所不同,GLQ和GPH型的恒河猴TETHERIN蛋白表達要顯著高于DLQ和DPH型。在對不同基因型恒河猴的SIVMAC239后病毒復制峰值和病毒復制控制值的比較中,發(fā)現(xiàn)DLQ基因型恒河猴病毒復制水平要高于GLQ型恒河猴P<005,其他基因型恒河猴的感染值之間沒有顯著差異。成功構建表達恒河猴TETHERIN蛋白的TZMBL后,通過HIVNL43分別在表達恒河猴TETHERIN蛋白的TZMBL中和不表達恒河猴TETHERIN蛋白的TZMBL中培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),比較兩種細胞感染之間的病毒蛋白P24濃度以及活力,發(fā)現(xiàn)不同組別之間病毒P24濃度沒有統(tǒng)計學差異。結論在中國恒河猴的TETHERIN基因中,我們發(fā)現(xiàn)了9個CSNP位點,其中有四個CSNP位點G41A、T128C、C129和A333C可影響TETHERIN蛋白的二級結構。經(jīng)過體外細胞實驗和恒河猴體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn),恒河猴TETHERIN基因的CSNP并沒有影響其抗病毒作用,但卻可以影響SIV對其拮抗作用。在HIVNL43對表達恒河猴TETHERIN的TZMBL的適應性培養(yǎng)中,我們并沒有發(fā)現(xiàn)恒河猴TETHERIN蛋白對HIVNL43的抑制作用,但這并不能說明恒河猴TETHERIN蛋白對HIVNL43沒有抑制作用,雖然TETHERIN蛋白可以把病毒束縛在宿主細胞表面,但我們不能排除病毒通過細胞與細胞之間的接觸反而使得病毒更容易發(fā)生擴散。
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        上傳時間:2024-03-11
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      • 簡介:背景認知是認識和知曉事物過程的總稱,是一個體現(xiàn)機能和行為的智力過程,是人們適應周圍環(huán)境以生存的必要條件。認知一般包括感知、識別、注意、記憶、概念形成、思維、推理及表象過程,屬于大腦皮層的高級活動,是現(xiàn)代康復醫(yī)學研究的重點問題。腦損傷的致殘率高,腦損傷后大腦高級皮層功能均有不同程度損害,患者在接受和運用知識能力等方面發(fā)生障礙,在相當長的時間里可造成記憶力、注意力、邏輯思維能力、理解能力等不同程度的降低,從而導致一系列軀體、認知、行為和情感障礙,其中認知障礙發(fā)病率較高,對患者的遠期影響超過了軀體障礙本身,導致患者對外界環(huán)境的感知和適應困難,使其發(fā)生生活和社會適應性的障礙,難以獨立生活和工作,成為制約患者整體康復的重要因素。研究表明通過各種人工訓練或計算機輔助訓練均使腦損傷患者認知功能得到了不同程度的恢復和改善。OTSOFT是我國臺灣康復專業(yè)人員研發(fā)的,用于計算機輔助認知訓練的漢語系統(tǒng)軟件。計算機輔助的認知康復隨著多媒體技術的飛速發(fā)展和計算機的普及而得到廣泛運用。在美國利用計算機進行認知治療已有20多年歷史。研究表明計算機輔助的認知訓練可促進記憶障礙患者的學習,提高認知功能。通過人機交互HUMANCOMPUTERINTERACTION,HCI的形式,訓練的漢語系統(tǒng)軟件。此系統(tǒng)包括三大部分內(nèi)容復合選擇訓練系統(tǒng)MULTISWITCHTRAININGSYSTEM;認知功能評估系統(tǒng)COGNITIONASSESSMENTDATABASEMANAGEMENTSYSTEM;訓練計劃編輯器PROGRAMGENERATEDIT。此軟件有三個顯著性特色1可根據(jù)患者認知障礙程度進行訓練內(nèi)容編輯;2亦可應用OTSOFT進行評估以調(diào)整訓練計劃;3豐富的訓練環(huán)境設計,通過人機交互界面,使被訓練者有充分的實踐機會,主動練習,隨時開啟進行訓練。訓練內(nèi)容包括定向、視知覺、空間知覺、動作運用、視運動組織、思維6個方面。訓練時間30分鐘次,1日,共1月。22人工訓練組簡稱人工組人工訓練根據(jù)訓練軟件內(nèi)容制定同一訓練課目,由專業(yè)治療師利用圖片、器械等工具對患者進行一對一的訓練,訓練時間30分鐘次,1日,共1月。3、評估方法利用LOTCA軟件對所有研究對象分別進行訓練前后的評定,計算訓練前后LOTCA評定總分與絕對變化值LOTCA2LOTCA1的相關系數(shù)RLOTCA,比較相關系數(shù)的大小。4、統(tǒng)計學處理采用SPSS130統(tǒng)計學軟件對LOCTA評分結果進行處理,兩組性別比較采用卡方檢驗,教育程度和年齡比較采用T檢驗;訓練前后效果比較,包括LOCTA測試的6個領域定向、視知覺、空間知覺、動作運用、視運動組織、思維,采用配對T檢驗的方法;計算機組、人工組之間訓練效果的比較采用獨立T檢驗的方法。失訪或和未完成測試者的數(shù)據(jù)予以剔除。結果1、計算機輔助訓練前后效果比較應用LOTCA計算機軟件測試計算機組17名病例,其訓練前后平均得分分別為6612±1977和7700±2274,得分相關性較高R0952,P<001,且計算機輔助訓練前后所有測試條目得分均具有良好的相關性R06070951,P<001,配對T檢驗則顯示計算機輔助訓練前后各條目得分除RISKA無組織分類RU,RISKA有組織分類RS兩個條目外,其余條目訓練前后間的差異均具有顯著性T21633922,P00010046。計算機輔助訓練在定向,視知覺,空間知覺,動作運用,視運動組織,思維運作六個領域,治療后總分均明顯高于訓練前,差異具有統(tǒng)計學意義。2、人工訓練前后效果比較應用LOTCA計算機軟件測試人工組17名病例,其訓練前后平均得分分別為7365±2007和8635±1954,得分相關性較高R0989,P<001,且人工訓練前后所有測試條目得分均具有良好的相關性R06270979,P<001,配對T檢驗則顯示人工訓練前后各條目得分除RISKA無組織分類RU,幾何排序GS兩個條目外,其余條目訓練前后間的差異均具有顯著性T20633497,P00010041。人工訓練在定向,知覺,空間知覺,動作運用,視運動組織,思維運作六個領域,訓練后總分均明顯高于訓練前,差異具有統(tǒng)計學意義。3、計算機輔助訓練與人工訓練效果比較應用LOTCA計算機軟件測試34名病例。兩組訓練前后LOTCA總分的差值的平均值分別為計算機組1271±297、人工組1088±721;對訓練前后兩組總分差值進行獨立T檢驗顯示T0963,P0346;對兩組各條目訓練前后總分差值分別進行獨立T檢驗則顯示定向測試、視知覺測試、空間知覺測試、動作運用測試、視運動組織測試,思維運作六個領域的差異均無統(tǒng)計學意義。參與認知訓練實施的康復專業(yè)人員體會計算機輔助訓練在訓練過程中比較省時、省力,評估數(shù)據(jù)和資料的統(tǒng)計、分析和保存簡便,不容易受施測人員、測試環(huán)境等條件影響,可以避免測試過程中的偏移而引起系統(tǒng)誤差,故適宜在我國臨床工作中推廣。結論1、應用LOTCA計算機輔助訓練軟件對腦損傷患者進行認知訓練,訓練后可使腦損傷患者認知障礙得到明顯改善。2、對于腦損傷患者,人工訓練的方法訓練后可使腦損傷患者認知障礙得到明顯改善。3、計算機輔助訓練與人工訓練效果相比,定向測試,知覺測試、空間知覺測試、動作運用測試、視運動組織測試,思維運作六個方面改善程度的差異無統(tǒng)計學意義。且與人工訓練相比,計算機輔助訓練在訓練過程中更為便捷、客觀,適宜在我國臨床工作中推廣。創(chuàng)新點1、證實了計算機輔助訓練對腦損傷患者認知障礙的康復效果與人工訓練同樣有效,但計算機輔助訓練方法更為便捷、客觀。2、為腦損傷患者認知訓練與評估的計算機一體化的建立提供了依據(jù)。
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        上傳時間:2024-03-13
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      • 簡介:乙型肝炎病毒HBV是嗜肝DNA病毒,HBVDNA長度約為32KB,含4個開放讀碼框架F,分別編碼HBV的表面抗原蛋白,核心E抗原蛋白,X蛋白以及HBVDNA聚合酶HBVPO1。HBVPOL基因在F中最長,并且與C、S、X基因區(qū)有重疊,其編碼的P蛋白含有3個功能域和1個無意義的隔離片SPACER,SP,排列順序為N末端蛋白TP,SP,逆轉錄酶RTDNA聚合酶PR和核糖核酸酶HRNASEH。由于受到不能從病毒體直接純化和在不同的系統(tǒng)中表達有活性的酶的限制,目前對聚合酶及其所編碼的各個功能區(qū)域蛋白質的功能的認識還不是很清楚。為了研究病毒蛋白質對肝細胞的作用,用酵母雙雜交技術篩選HBVPOL蛋白與肝細胞相互作用蛋白的編碼基因;用基因表達譜芯片技術,篩選各功能域的反式調(diào)節(jié)基因。根據(jù)含有HBVPOL全基因組CDNA的質粒G318A7AF384372,設計了TP、PR和RNASEH引物,PCR擴增后構建酵母表達載體PGBKT7TP、PGBKT7PR、PGBKT7RNASEH,用醋酸鋰法轉入酵母細胞AH109后,表達各自蛋白,用WESTERNBLOTTING確定蛋白表達。將轉化好的AH109PGBKT7TP酵母菌與含有肝CDNA文庫的酵母菌Y187在營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基三缺培養(yǎng)基SDHISLEUTRP,四缺培養(yǎng)基SDTRPLEUHISADE上進行配合,在鋪有XΑGAL的四缺培養(yǎng)基上進一步篩選。挑取藍色陽性菌落提取酵母質粒。測序并進行生物信息學分析。對TP的研究中,成功得到47個與TP特異性結合的陽性克隆,包括人類固醇調(diào)節(jié)元件結合蛋白1SREBP1、Ⅰ型乙醇脫氫酶Γ亞基ADH3,也稱為依賴谷胱甘肽的甲醛脫氫酶,RNA聚合酶Ⅱ亞單位HSRPB7、血漿銅藍蛋白CP,去唾液酸糖蛋白受體2ASGR2等21種已知功能蛋白質基因和19個假設蛋白基因。提示TP可以與人肝細胞內(nèi)某些已知和未知功能蛋白相互結合,具有較廣泛的生物學功能。利用基因表達譜芯片技術研究HBVPOL三個功能域TP、PR和RNASEH對肝細胞基因表達譜的影響設計引物并構建真核表達載體PCDNA31TP,PCDNA31PR和PCDNA31RNASEH,以脂質體轉染肝母細胞瘤細胞系HEPG2,提取MRNA,逆轉錄為CDNA,與轉染空白表達載體PCDNA31的HEPG2細胞進行DNA芯片分析。結果TP有¨1條基因表達水平上調(diào),88個基因表達水平下調(diào)。PR有79條基因表達水平上調(diào),90條基因表達水平下調(diào)。RNASEH有113條基因表達水平上調(diào),109條基因表達水平下調(diào)。提示它們對HEPG2細胞中許多不同基因表達的調(diào)節(jié)作用,證明這些基因與細胞信號轉導、細胞增殖與分化、細胞凋亡等生物過程密切相關,對我們進一步深入研究HBVPOL在慢性HBV感染中的作用具有重要意義。
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        上傳時間:2024-03-12
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