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簡(jiǎn)介：江蘇大學(xué)博士學(xué)位論文IFNΛ重組腺病毒載體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)染及對(duì)肺癌影響的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究姓名嚴(yán)玉蘭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師鄭金旭20100608IFN一入重組腺病毒載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)染及對(duì)肺癌影響的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究IFN九S包括IFN一九1、IFNL2和IFN犯3個(gè)成員又稱(chēng)IL一29、IL一28A和IL一28B。人IL一29與IL一28A的氨基酸同源性為81％，而人IL28A與IL一28B的氨基酸同源性則為96％；小鼠只有INFX2IL28A署11INFZ3M28B基因，小鼠的INF一尥和INFL3氨基酸同源性為高達(dá)98％。IFNKS抗腫瘤作用可能途徑為1抑制腫瘤病毒的復(fù)制2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖3調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤細(xì)胞4作用于腫瘤的基質(zhì)細(xì)胞及抗腫瘤血管形成。國(guó)外學(xué)者在T淋巴細(xì)胞瘤BW5147、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤BONI等細(xì)胞的體外細(xì)胞研究中發(fā)現(xiàn)IFNKS具有明顯抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用，而在小鼠黑色素瘤及小鼠纖維肉瘤等的體內(nèi)研究中發(fā)現(xiàn)IFNKS具有抑制腫瘤生長(zhǎng)及腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。國(guó)內(nèi)對(duì)IL一28和IL一29的研究剛剛起步，對(duì)IFNKS的研究主要研究基因重組技術(shù)體外抗人肝炎病毒活性，有學(xué)者進(jìn)行人重組IL一28／IL一29質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染的研究，但在其抗腫瘤作用方面尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。本課題選用鼠INFK2IL28A及人IFNKLIL29進(jìn)行相關(guān)研究，并致力于探索鼠INF尥重組腺病毒載體對(duì)肺癌的影響方面進(jìn)行體內(nèi)外研究。本研究的目的在于1構(gòu)建出高滴度的重組MLFNL2腺病毒載體及重組HLFNL1腺病毒載體，并建立穩(wěn)定表達(dá)鼠尥一干擾素的CHO細(xì)胞系，為進(jìn)行體內(nèi)外抗腫瘤研究奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：【目的】膀胱腫瘤為泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤，在我國(guó)其發(fā)病率在泌尿系腫瘤中居首位，且大多數(shù)膀胱癌表現(xiàn)為多中心性與復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)。目前臨床的治療手段主要是手術(shù)治療和術(shù)后化療，但復(fù)發(fā)率較高，而目前常用的化療藥物在使用一段時(shí)間后都出現(xiàn)不同程度耐藥性，且并發(fā)癥較多?？鼓[瘤化療的策略主要在于清除腫瘤細(xì)胞，盡管其作用機(jī)制各異，但化學(xué)藥物所致胞毒作用的終末效應(yīng)均為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而腫瘤細(xì)胞對(duì)于藥物所致的抵抗性是腫瘤治療失敗的主要原因。通過(guò)調(diào)控凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)的胞內(nèi)調(diào)控因子，將有可能影響腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性。因此，本研究以膀胱腫瘤細(xì)胞為研究對(duì)象，以重組腺相關(guān)病毒為載體，介導(dǎo)第二個(gè)線(xiàn)粒體來(lái)源的胱氨酸酶激活劑SMACDIABLO參與凋亡調(diào)控，研究膀胱癌細(xì)胞對(duì)普通化療藥物的抵抗性降低的過(guò)程，并從分子水平嘗試探討腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物抵抗性降低的分子機(jī)制?！痉椒ā繎?yīng)用細(xì)胞傳代培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)獲得鼠膀胱腫瘤細(xì)胞MBT2后，將轉(zhuǎn)染有第二個(gè)線(xiàn)粒體來(lái)源的胱氨酸酶激活劑的重組腺相關(guān)病毒RAAVSMACDIABLO加入到培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)染MBT2細(xì)胞，RTPCR法測(cè)定SMACDIABLO在細(xì)胞中的表達(dá)情況，當(dāng)?shù)鞍妆磉_(dá)穩(wěn)定后加入普通化療藥物絲裂霉素誘導(dǎo)凋亡啟動(dòng)，運(yùn)用四甲基偶氮唑藍(lán)還原反應(yīng)MTT法測(cè)定MBT2細(xì)胞增殖的抑制作用，對(duì)照比較轉(zhuǎn)染SMACDIABLO前后化療藥物胞誘膀胱癌細(xì)導(dǎo)凋亡的差異。流式細(xì)胞儀測(cè)定不同加藥組對(duì)MBT2膀胱癌細(xì)胞的凋亡的誘導(dǎo)情況，所得數(shù)據(jù)使用SAS90統(tǒng)計(jì)軟件分析?！窘Y(jié)果】1RAAVSMAEDIABLO轉(zhuǎn)染MBT2腫瘤細(xì)胞后RTPCR檢測(cè)SMACDIABLO表達(dá)情況RAAVSMACDIABLO轉(zhuǎn)染MBT2腫瘤細(xì)胞后，采用RTPCR法檢測(cè)SMACDIABLO在細(xì)胞中的表達(dá)量，24小時(shí)后有條帶出現(xiàn)，48小時(shí)后穩(wěn)定表達(dá)。2RAAVSMAC轉(zhuǎn)染MBT2后提高了化療藥物的抑制率21絲裂霉素對(duì)MBT2腫瘤細(xì)胞的抑制情況MTT檢測(cè)顯示按照濃度梯度加入絲裂霉素，觀(guān)察對(duì)MBT2腫瘤細(xì)胞均有不同程度抑制增殖作用，同空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P00122RAAVSMACDIABLO轉(zhuǎn)染MBT2后化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制情況MTT檢測(cè)顯示轉(zhuǎn)染RAAVSMACDIABLO后48小時(shí)聯(lián)合使用絲裂霉素對(duì)MBT2腫瘤細(xì)胞均有不同程度抑制增殖作用，同空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P001。23對(duì)21和22數(shù)據(jù)進(jìn)行25析因設(shè)計(jì)的方差分析對(duì)21和22數(shù)據(jù)建立25的析因設(shè)計(jì)方差分析統(tǒng)計(jì)模型，計(jì)算各統(tǒng)計(jì)量結(jié)果顯示RAAVSMACDIABLO轉(zhuǎn)染因素使腫瘤細(xì)胞的抑制率有差別，轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞抑制率更高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P0053RAAVSMAC轉(zhuǎn)染MBT2后降低了腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性本實(shí)驗(yàn)組所用MMC均為005MGML低劑量誘導(dǎo)凋亡啟動(dòng)31化療藥物采用低劑量時(shí)，RAAVSMACDIABLOMMC組腫瘤細(xì)胞的抑制率最高采用低濃度絲裂霉素誘導(dǎo)凋亡啟動(dòng)，經(jīng)MTT檢測(cè)顯示各加藥組空白組、MMC組、SMACDIABLO組、SMACDIABLOMMC組中SMAC組抑制率794±185；MMC組抑制率923±223；RAAVSMACDIABLOMMC組抑制率2838±384RAAVSMACDIABLOMMC組對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率高于其它組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P00132化療藥物采用低劑量時(shí)，RAAVSMACDIABLOMMC組腫瘤細(xì)胞的凋亡率最高采用低濃度絲裂霉素誘導(dǎo)凋亡啟動(dòng)，經(jīng)流式細(xì)胞檢測(cè)顯示各加藥組空白組、MMC組、SMACDIABLO組、SMACDIABLOMMC組中SMAC組凋亡率729±125；MMC組抑制率525±121；RAAVSMACDIABLOMMC組抑制率2218±162；RAAVSMACDIABLOMMC組腫瘤細(xì)胞的凋亡率高于其它組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P001其中RAAVSMACDIABLO聯(lián)合使用絲裂霉素對(duì)腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用最高，二者具有協(xié)同效應(yīng)，凋亡峰明顯。P001【結(jié)論】1RAAVSMACDIABLO能夠有效的轉(zhuǎn)染MBT2膀胱癌細(xì)胞，大約在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)表達(dá)量達(dá)到治療水平，表達(dá)持續(xù)穩(wěn)定。2轉(zhuǎn)染了SMACDIABLO后普通化療藥物對(duì)膀胱癌細(xì)胞有更強(qiáng)的抑制作用，提高了化療藥物的抑制率，促進(jìn)了化療藥物的誘導(dǎo)凋亡作用，化療因素和SMACDIABLO轉(zhuǎn)染因素具有協(xié)同作用。

簡(jiǎn)介：脊髓損傷SPINALCDINJURYSCI的治療目標(biāo)有三個(gè)挽救RESCUE受損神經(jīng)元的遲發(fā)性損傷和死亡促進(jìn)神經(jīng)元軸突的再生REGENERATION組織移植替代REPLACEMENT神經(jīng)缺損以求重建損傷脊髓地解剖連接和功能康復(fù)心肌營(yíng)養(yǎng)素1CARDIOTROPHIN1CT1是1995年由PENNICA等發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子與LIF、CNTF、OSM、IL6、L11同屬于IL6家族CT1能長(zhǎng)時(shí)間的支持運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、多巴胺神經(jīng)元和交感神經(jīng)元的存活誘導(dǎo)培養(yǎng)交感神經(jīng)元遞質(zhì)表型的連接CT1基因治療大鼠進(jìn)行性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病取得較好的效果該文研究的目的是原核表達(dá)HUCT1重組蛋白和構(gòu)建HUCT1的腺病毒載體觀(guān)察SCI后HUCT1能否支持紅核神經(jīng)元的存活、促進(jìn)紅核脊髓束的再生和功能恢復(fù)

簡(jiǎn)介：目的1構(gòu)建攜帶人CTLA4IG基因的重組非增殖腺病毒載體質(zhì)粒PADTRACKCMVHCTLA4IG和攜帶人FASL基因的重組非增殖腺病毒載體質(zhì)粒PSUCMVFASL；2重組非增殖腺病毒載體質(zhì)粒PADTRACKCMVHCTLA4IG和重組非增殖腺病毒載體質(zhì)粒PSUCMVFASL體外轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞內(nèi)，以觀(guān)察CTLA4IG和FASL蛋白表達(dá)情況；3建立SD→WISTAR系大鼠同種異體原位腎移植模型；4將CTLA4IG基因和FASL基因，在冷保存時(shí)經(jīng)供腎動(dòng)脈局部灌注轉(zhuǎn)染至供腎體內(nèi)，觀(guān)察其對(duì)腎移植大鼠生存期的影響，并探討轉(zhuǎn)CTLA4IG基因和FASL基因的轉(zhuǎn)基因治療誘導(dǎo)大鼠腎移植免疫耐受的可能機(jī)理。結(jié)論1建立的PADTRACKCMVHCTLA4IG和PSUCMVFASL非增殖腺病毒體系能有效地表達(dá)CTLA4IG和FASL；2PADTRACKCMVHCTLA4IG和PSUCMVFASL能在人腎胚293細(xì)胞中有效表達(dá)；3SD大鼠為供體，WISTAR大鼠為受體的腎移植是一個(gè)高排異組合，是研究移植耐受的理想模型；4轉(zhuǎn)CTLA4IG或FASL的基因治療可誘導(dǎo)大鼠腎移植免疫耐受，其機(jī)理是CTLA4IG阻斷共刺激通路，F(xiàn)ASL基因誘導(dǎo)活化T細(xì)胞凋亡，并使TH1向TH2偏移。兩者的聯(lián)合應(yīng)用效果更佳。

簡(jiǎn)介：題PJI『大學(xué)碩士學(xué)位論文作者盎劍完成日期2QQ主旦培養(yǎng)單位墮刖盤(pán)芏指導(dǎo)教師工墾土夔撞專(zhuān)業(yè)重監(jiān)生授予學(xué)位日期年月日四川大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒的基因分型及HPVL6亞型L1、E6和E7基因的克隆和序列分析專(zhuān)業(yè)遺傳學(xué)研究生朱一劍指導(dǎo)教師丁顯平教授捅璺背景人乳頭瘤病毒是一類(lèi)特異感染人皮膚、粘膜的雙鏈環(huán)狀DNA病毒，屬乳多空病毒科多瘤病毒亞科，其分子量大約為S000BP。目前已有100多種HPV亞型被鑒定，其中約40余種與人類(lèi)生殖器皮膚黏膜病變有關(guān)根據(jù)其對(duì)生殖系統(tǒng)的致癌性，可將其分為低危型和高危型，前者包括HPV6，1L，40，42，43，44，54，6L，70，72，8L等，以HPV6，11最為常見(jiàn)，主要引起尖銳濕疣等良性病變；后者包括HPVL6，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，72，82等，其中以HPVL6，18最為常見(jiàn)，常引起惡性病變，如宮頸癌21由于HPV的致病性與其亞型密切相關(guān)所以對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)和分型對(duì)于臨床診斷具有重要意義另外，對(duì)HPVL6亞型HPV病毒E6，E7，LL基因突變的研究表明特定位點(diǎn)的突變會(huì)使病毒更易誘導(dǎo)產(chǎn)生癌變及增大再次感染或從宿主免疫系統(tǒng)逃逸的機(jī)會(huì)。如HPVL6型E6蛋白83位的亮氨酸殘基變?yōu)槔i氨酸堿基突變T350G的突變株在瑞典婦女宮頸癌組織中出現(xiàn)的比例遠(yuǎn)大于野生型，一些研究認(rèn)為在部分人群中，該突變與組織癌變進(jìn)程相關(guān)不同的變異導(dǎo)致的氨基酸的變化可影響宿主對(duì)病毒的免疫應(yīng)答，進(jìn)而與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的危險(xiǎn)性相關(guān)。因此對(duì)宮頸癌組織中HPVL6亞型基因組突變的研究對(duì)宮頸癌疫苗研制策略及HPV致癌機(jī)理的研究也具有重要意義。目的1探討各種婦科疾病與人乳頭瘤病毒感染的關(guān)系，建立不同婦科疾病和不同年齡段婦女人乳頭瘤病毒感染的流行病學(xué)資料庫(kù)。2了解中國(guó)西南地區(qū)HPVL6亞型基因的一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，為臨床診斷、治療由HPVL6亞型感染引起的疾病特別是宮頸癌提供理論依據(jù)。

簡(jiǎn)介：目的采用終末期肝病模型MODELFENDSTAGELIVERDISEASEMELD進(jìn)行分析探討該模型評(píng)分系統(tǒng)對(duì)重型病毒性肝炎患者短期3個(gè)月預(yù)后的預(yù)測(cè)能力及臨床應(yīng)用價(jià)值應(yīng)用C統(tǒng)計(jì)值CONCDANCESTATISTIC評(píng)估MELD模型的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性該值等同于受試者工作特征曲線(xiàn)RECEIVEROPERATINGACTERISTICCURVEROC曲線(xiàn)的曲線(xiàn)下面積并求出作為判斷患者3個(gè)月內(nèi)存活與否的MELD最佳臨界值方法121例住院的重型病毒性肝炎患者分為血漿置換PLASMAEXCHANGEPE組與非血漿置換組應(yīng)用MELD模型公式對(duì)每個(gè)患者進(jìn)行評(píng)分觀(guān)察3個(gè)月內(nèi)的死亡率結(jié)論該研究認(rèn)為MELD分值能夠作為反映重型病毒性肝炎患者病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)患者短期內(nèi)死亡危險(xiǎn)性隨MELD分值的增加而上升MELD模型能較準(zhǔn)確預(yù)測(cè)重型病毒性肝炎患者短期的臨床預(yù)后

簡(jiǎn)介：自1981年第一例HIVAIDS感染病例在美國(guó)被報(bào)道以來(lái)，艾滋病迅速地在全世界范圍內(nèi)蔓延。理論上，HIV感染最好的預(yù)防手段是研發(fā)艾滋病疫苗。然而，目前仍沒(méi)有一個(gè)艾滋病疫苗被臨床試驗(yàn)證明為有效。目前，治療HIV主要手段是使用各種抗病毒藥物。目前臨床批準(zhǔn)的抗艾滋病藥物已經(jīng)有29種，但絕大部分針對(duì)病毒編碼的兩種酶，即逆轉(zhuǎn)錄酶和蛋白酶。盡管有這么多的抗HIV藥物，但它們?nèi)匀徊荒芮宄鼿IV，只能抑制病毒的復(fù)制，將病毒載量降低，一定程度地恢復(fù)患者的免疫功能，延長(zhǎng)患者的生命。直到2003年，第一個(gè)HIV進(jìn)入抑制劑衍生于病毒包膜蛋白GP41的多肽恩夫韋特T20被FDA批準(zhǔn)進(jìn)入臨床，開(kāi)創(chuàng)了病毒進(jìn)入抑制劑作為抗病毒藥物的新時(shí)代。HIV進(jìn)入抑制劑雖然能從源頭上阻止病毒的入侵，但其僅能特異性地抑制HIV1，對(duì)HIV2沒(méi)有抑制活性，同時(shí)多肽類(lèi)藥物價(jià)格昂貴，也限制了它們的臨床應(yīng)用。另一棘手的問(wèn)題是HIV病毒變異性極高，極易產(chǎn)生耐藥株，從而使現(xiàn)有的許多抗病毒藥物失活。聯(lián)合3種或4種抗病毒藥物（通常包含一種蛋白酶抑制劑）的高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒聯(lián)合療法HAART目前已成為治療HIV感染的標(biāo)準(zhǔn)方法，其可以顯著降低HIV感染患者的死亡率和發(fā)病率。HAART通常被稱(chēng)為“雞尾酒療法”COCKTAILTHERAPY。不同作用機(jī)制的抗病毒藥物之間的相互作用及合理搭配使HAART的效果比單一用藥有優(yōu)勢(shì)，能有效地降低用藥劑量，減少不良反應(yīng)，提高抗病毒譜，更為重要的是能減少耐藥病毒株的產(chǎn)生。因此，急需尋找新的來(lái)源的藥物抑制HIV的廣泛傳播。人血清白蛋白HSA是人血漿中的最為主要的蛋白質(zhì)，其具有許多重要的生理學(xué)和藥理學(xué)功能，目前已經(jīng)成為基礎(chǔ)及臨床研究最廣泛的目標(biāo)蛋白之一。尤其是對(duì)HSA進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾，利用化學(xué)修飾產(chǎn)物作為理想的治療分子進(jìn)行研發(fā)，已經(jīng)成為生命科學(xué)中重要的研究手段之一。HSA其非糖基化的單鏈多肽包含585個(gè)氨基酸，相對(duì)分子量為665KD，主要是由18種氨基酸殘基組成，其中堿性氨基酸賴(lài)氨酸有59個(gè)，精氨酸則有27個(gè)。由于酸酐是強(qiáng)酸性物質(zhì)，而蛋白質(zhì)末端含有很多堿性的氨基酸，因此兩者發(fā)生化學(xué)反應(yīng)時(shí)，其蛋白質(zhì)末端的堿性氨基酸殘基必然會(huì)被酸酐所修飾。如果將蛋白末端的這些堿性氨基酸，選用適合的酸酐進(jìn)行化學(xué)修飾，將得到一類(lèi)新的物質(zhì)，即酸酐修飾的HSA。1995年，美國(guó)紐約血液中心的NEURATHAR和姜世勃等人的研究發(fā)現(xiàn)3羥基鄰苯二甲酸酐3HP修飾的Β乳球蛋白ΒLG，即3HPΒLG，可特異性抑制HIV的感染。未經(jīng)修飾的Β乳球蛋白及3HP本身都無(wú)抑制HIV的活性，說(shuō)明酸酐修飾使無(wú)活性的蛋白產(chǎn)生了抗HIV活性1，2。然而由于時(shí)逢全球瘋牛病爆發(fā)，使得來(lái)源于牛奶蛋白的制劑3HPΒLG的研發(fā)受到了極大的影響，將其研發(fā)的試驗(yàn)研究被迫終止。HSA是人血液中最為主要的一種蛋白質(zhì)，其含量占血漿中總蛋白含量的60％以上，因此含量豐富。而且結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定，在人血管和血管外循環(huán)中分布較廣，半衰期長(zhǎng)達(dá)19D，無(wú)明顯的免疫原性，是血液中重要的物質(zhì)輸送載體，因此將其做為抗病毒藥物研發(fā)具有一定的優(yōu)勢(shì)。因此，本文采用類(lèi)似的方法，選用人血清白蛋白作為被修飾蛋白，來(lái)研究酸酐修飾人血清白蛋白特性和評(píng)價(jià)其抗病毒活性及其可能的臨床應(yīng)用。1酸酐修飾人血清白蛋白HPHSA的制備和條件優(yōu)化本文參考文獻(xiàn)方法，選用3羥基鄰苯二甲酸酐HP來(lái)修飾人血清白蛋白HSA，為優(yōu)化HPHSA的制備條件，我們選用不同濃度的HP20MM、40MM及60MM和不同的PH值反應(yīng)體系（PH70、80及90），合成了的一系列不同的HPHSA，并評(píng)價(jià)這些HPHSA的抗兩種HIV1實(shí)驗(yàn)室病毒株（X4及R5型）的活性。同時(shí)，還通過(guò)檢測(cè)不同條件下合成的HPHSA期蛋白末端堿性氨基酸（主要包括賴(lài)氨酸及精氨酸）殘基被HP修飾比率，比較HPHSA的抗病毒活性與蛋白末端堿性氨基酸被修飾比率之間的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HSA蛋白末端的堿性氨基酸殘基大部分能被HP所修飾，其蛋白的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，從而將無(wú)活性的HSA轉(zhuǎn)變成具有較強(qiáng)抗HIV1活性的病毒抑制劑HPHSA。HPHSA中賴(lài)氨酸和精氨酸殘基的被修飾的比率越高，其抗抗HIV1X4型HIV1ⅢB及R5型HIV1BAL的病毒株的作用也相應(yīng)的越強(qiáng)，說(shuō)明蛋白末端堿性氨基酸被修飾的比率與HPHSA抗病毒活性密切呈正相關(guān)，修飾蛋白末端的堿性氨基酸殘基被相應(yīng)酸酐修飾的比率與酸酐修飾蛋白的抗病毒活性密切相關(guān)。通過(guò)比較分析確定，HPHSA化學(xué)修飾的最優(yōu)合成條件為，酸酐HP終濃度60MM，PH值為90，在這一條件下，HPHSA的蛋白末端賴(lài)氨酸被修飾的比率為9817％，而精氨酸被修飾的比率為9167％。而在這一條件下，合成的HPHSA的抗HIV1ⅢB（X4型）和BAL（R5型）病毒的IC50值分別是0851NM和1454NM。2HPHSA抗病毒活性研究作為一個(gè)理想的防治性傳播性疾病的抗病毒制劑，首先要保證其具有廣譜性和有效性，即能夠高效抑制絕大部分與性傳播疾病有關(guān)的病原體的感染。與3HPΒLG相類(lèi)似，酸酐修飾蛋白HPHSA也具有廣譜高效的抗病毒活性，其能抑制多種HIV1實(shí)驗(yàn)室病毒株包括HIV1X4型和R5型，IC50在低納摩爾水平。另外，HPHSA也能有效抑制HIV2感染，意味著HPHSA也能被用于HIV2病毒廣泛流行的西非等國(guó)家3。同時(shí)HPHSA還能抑制SIV的感染4。由于SIV病毒能夠感染恒河猴，因此利用SIV病毒陰道攻擊恒河猴的動(dòng)物模型，可先期評(píng)價(jià)HPHSA在動(dòng)物體內(nèi)的抗病毒活性。目前大多數(shù)的抗病毒藥物，尤其是臨床上應(yīng)用最為廣泛的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑臨床應(yīng)用的局限性最主要的是由于HIV病毒耐藥株的產(chǎn)生。HIV病毒需寄生于宿主細(xì)胞內(nèi)，利用宿主細(xì)胞的代謝系統(tǒng)生存、增殖，并保持極強(qiáng)的生命力。HIV病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)不斷復(fù)制，但是其復(fù)制的錯(cuò)配率極高且極易產(chǎn)生高變異性，這也是目前理想抗HIV病毒藥物研發(fā)緩慢的主要原因之一。本文研究發(fā)現(xiàn)，HPHSA對(duì)幾類(lèi)常見(jiàn)的抗病毒藥物包括核苷類(lèi)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT，非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑A17及HIV進(jìn)入抑制劑T20的耐藥病毒株，均具有非常好的抑制作用，其IC50值均在低納摩爾水平，與抗HIV1實(shí)驗(yàn)室病毒分離株的抗性相當(dāng)。這彌補(bǔ)了這些目前臨床應(yīng)用的主要的抗病毒藥物的不足，從而使其具備了被進(jìn)一步開(kāi)發(fā)的前景。如果將這類(lèi)蛋白類(lèi)藥物與抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用，可能也將成為抗病毒藥物研究的一個(gè)新的方向。如前所述，生殖器單純皰疹病毒Ⅱ型（HSV2）是另一類(lèi)導(dǎo)致性傳播性疾病STD的主要病原體，約75％生殖器皰疹病例是由HSV2引起的，它是引發(fā)生殖器皰疹和潰瘍最主要的原因，是一個(gè)世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。值得注意的是，其引發(fā)的生殖器皰疹據(jù)報(bào)道與HIV感染的關(guān)系極為密切，研究發(fā)現(xiàn)患有生殖器皰疹的病人更容易感染HIV，其HIV感染率可增加2～4倍。因此，有效控制HSV2感染對(duì)減少HIV的流行具有直接的作用。如果抗病毒藥物在具有抗HIV活性的同時(shí)，具有抑制HSV2病毒的作用，則將大大增加該抗病毒藥物的抗HIV活性，從而成為高效雙功能的抗病毒制劑。目前，臨床應(yīng)用的大部分抗HIV藥物均為窄譜抗病毒藥物，其無(wú)或者對(duì)HSV2的抑制作用不強(qiáng)。本文我們研究發(fā)現(xiàn)，酸酐修飾人血清白蛋白HPHSA對(duì)HSV2病毒有明顯抑制作用。3HPHSA抗病毒作用機(jī)制研究HIV病毒進(jìn)入CD4靶細(xì)胞一般是在1H內(nèi)完成的。如果一種藥物為HIV進(jìn)入抑制劑，其必須在病毒進(jìn)入靶細(xì)胞前與病毒或靶細(xì)胞接觸。因此，選用TIMEOFADDITION的分析方式，在病毒感染靶細(xì)胞的不同階段加入酸酐修飾蛋白，以觀(guān)察HPHSA到底作用在HIV感染的哪個(gè)環(huán)節(jié)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HPHSA在病毒感染2H后加入時(shí)，其抗HIV1ⅢB和抗HIV1BAL病毒活性完全消失，其作用與FDA批準(zhǔn)的三種HIV進(jìn)入抑制劑如T20，AMD3100（CXCR4輔助受體抑制劑）及MARAVIRIC（CCR5輔助受體抑制劑）藥物的失活時(shí)間相似，而對(duì)照藥物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT，即使在病毒感染靶細(xì)胞8H后加入，仍然能保持較高的抗HIV1活性。這些結(jié)果說(shuō)明HPHSA是一類(lèi)特異性的HIV進(jìn)入抑制劑，對(duì)HIV病毒復(fù)制的其他環(huán)節(jié)無(wú)明顯作用。由于阻斷HIV病毒生命周期的第一個(gè)階段，因此靶向HIV進(jìn)入階段的抗病毒藥物均具有明顯的優(yōu)勢(shì)5。研究表明，游離病毒和已感染HIV的靶細(xì)胞都能感染新的靶細(xì)胞，而后者在HIV的感染中占主要地位6。在HIV的感染過(guò)程中，首先是HIV包膜與靶細(xì)胞膜發(fā)生融合，HIV基因組進(jìn)入靶細(xì)胞。HIV進(jìn)入靶細(xì)胞是由病毒表面的包膜糖蛋白介導(dǎo)的。因此，阻止HIV病毒的進(jìn)入，關(guān)鍵是阻止HIVENV誘導(dǎo)的細(xì)胞細(xì)胞融合及病毒細(xì)胞融合過(guò)程。通過(guò)細(xì)胞細(xì)胞融合、病毒細(xì)胞融合及細(xì)胞間的傳播等實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析可知，HPHSA的確作用于病毒的進(jìn)入階段，是一類(lèi)HIV進(jìn)入融合抑制劑。HIV通過(guò)三個(gè)步驟進(jìn)入宿主細(xì)胞1）HIV顆粒通過(guò)其包膜上的糖蛋白GP120與靶細(xì)胞表面的CD4受體粘附2）GP120發(fā)生構(gòu)象改變以適應(yīng)與靶細(xì)胞上的輔助受體CCR5或CXCR4結(jié)合3）HIV跨膜蛋白亞基GP41介導(dǎo)病毒包膜與靶細(xì)胞膜發(fā)生融合。那么HPHSA到底作用于HIV進(jìn)入的哪個(gè)環(huán)節(jié)，則成了下一步關(guān)心的問(wèn)題，因此我們對(duì)HPHSA的作用靶點(diǎn)進(jìn)行研究。HIV進(jìn)入靶細(xì)胞的第一步就是HIV病毒顆粒通過(guò)其包膜糖蛋白GP120與靶細(xì)胞表面的CD4受體粘附，因此，我們首先檢測(cè)HPHSA是否抑制GP120和可溶性CD4分子SCD4的體外結(jié)合。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HPHSA能抑制來(lái)源于HIV1ⅢB和HIV1BAL的GP120與SCD4的結(jié)合，而未修飾HSA則無(wú)抑制作用。這些結(jié)果表明，HPHSA可能是通過(guò)抑制病毒包膜糖蛋白GP120結(jié)合到靶細(xì)胞上的CD4受體而產(chǎn)生抑制作用的。ELISA和流式分析結(jié)果進(jìn)一步表明，HPHSA可通過(guò)與病毒包膜糖蛋白GP120和靶細(xì)胞上的CD4受體結(jié)合，阻止HIV1的GP120與CD4兩者的相互作用，從而產(chǎn)生抑制病毒與細(xì)胞膜融合的過(guò)程。HSA蛋白表面正電荷的精氨酸和賴(lài)氨酸殘基被酸酐修飾之后，其表面聚集著大量的負(fù)電荷側(cè)鏈，這些負(fù)電荷側(cè)鏈能與GP120和CD4分子結(jié)合，從而產(chǎn)生抗病毒作用。4HPHSA的局部用藥安全性研究理想的抗病毒藥物除了具備上述價(jià)廉和高效等條件外，更為重要的一點(diǎn)即為其安全性?？共《舅幬镉捎诳赡苊咳毡欢啻问褂?，且長(zhǎng)期甚至終生服用，因此必須不會(huì)導(dǎo)致組織損傷，不會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)，不會(huì)改變陰道內(nèi)酸性環(huán)境，不會(huì)造成陰道內(nèi)菌群失調(diào)，同時(shí)，應(yīng)無(wú)全身性毒副反應(yīng)。在體液中仍能保持較好的抗病毒活性。陰道粘膜是多層鱗狀上皮細(xì)胞，它們組成了防御外來(lái)病毒的一道物理屏障。因此，任何能破壞上皮組織完整性的因素，譬如物理?yè)p傷、性傳播病原體的感染、局部潰瘍及炎癥、激素水平失衡、陰道正常菌群失調(diào)、以及不當(dāng)使用陰道洗液等，都可能提高HIV的感染率。因此，藥物對(duì)陰道上皮細(xì)胞的毒性是其能否用于臨床的關(guān)鍵。我們首先評(píng)價(jià)了HPHSA對(duì)3種T淋巴細(xì)胞和3種正常人陰道及子宮頸上皮細(xì)胞7的體外毒性，結(jié)果顯示，HPHSA對(duì)測(cè)試的6種病毒作用T淋巴靶細(xì)胞及正常人陰道及子宮頸組織細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用很低，其CC50的值遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其抑制HIV1ⅢB病毒的IC50值，這意味著HPHSA體外基本無(wú)毒。陰道乳酸菌是內(nèi)源性的殺微生物劑，它能通過(guò)產(chǎn)生乳酸和過(guò)氧化氫來(lái)發(fā)揮效能。流行病學(xué)研究表明產(chǎn)過(guò)氧化氫乳酸菌能有效降低HIV的感染率。其原因推測(cè)是間接的，產(chǎn)過(guò)氧化氫乳酸菌能降低細(xì)菌性陰道炎的發(fā)病率，而后者導(dǎo)致的陰道上皮組織損傷是HIV傳染的一個(gè)主要影響因素。因此，我們?cè)u(píng)估了HPHSA對(duì)17株正常人陰道乳酸桿菌生長(zhǎng)的影響。藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，較高濃度的HPHSA對(duì)陰道正常乳酸桿菌的生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，而陽(yáng)性對(duì)照藥物氨芐青霉素對(duì)陰道乳酸桿菌各株均有明顯抑制作用，其MIC為0313～125ΜGML。前面研究證實(shí)，HPHSA的作用靶點(diǎn)之一為T(mén)淋巴細(xì)胞表面的CD4受體，而CD4T淋巴細(xì)胞是人免疫系統(tǒng)中極為重要的一類(lèi)細(xì)胞，對(duì)人正常免疫功能起著至關(guān)重要的作用8。那么，HPHSA作為殺微生物劑用于機(jī)體后，是否會(huì)對(duì)T淋巴細(xì)胞的正常的功能產(chǎn)生影響首先，觀(guān)察了HPHSA是否對(duì)正常人PBMCS增殖的影響，同時(shí)觀(guān)察了HPHSA對(duì)PHA刺激的PBMCS增殖的反應(yīng)，結(jié)果證明即使在濃度為100ΜM時(shí)，HPHSA對(duì)正常和PHA刺激的PBMCS的生長(zhǎng)增殖均無(wú)明顯的影響。隨后，評(píng)估了HPHSA對(duì)正常和PHA刺激的PBMCS分泌細(xì)胞因子IFNΓ功能的影響，結(jié)果同樣證明HPHSA對(duì)正常和PHA刺激PBMCS的免疫功能無(wú)影響。這些結(jié)果初步證明，HPHSA對(duì)CD4T細(xì)胞的功能，尤其是處于體內(nèi)循環(huán)狀態(tài)的T細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生有害的影響。但是，也不能排除長(zhǎng)期應(yīng)用阻斷CD4受體的殺微生物劑可能會(huì)抑制陰道粘膜中的CD4T細(xì)胞的免疫功能，這也正是我們下一步準(zhǔn)備進(jìn)行的安全性實(shí)驗(yàn)，評(píng)估HPHSA對(duì)家兔陰道粘膜免疫系統(tǒng)的影響。性傳播是目前HIV傳播的主要途徑，因此人體精液和宮頸陰道液對(duì)抗HIV藥物活性影響的評(píng)估就顯得至關(guān)重要了。一般來(lái)說(shuō)，理想的抗病毒藥物還應(yīng)該在存在大量體液時(shí)，仍能保持較強(qiáng)的抗病毒活性。有文獻(xiàn)報(bào)道，精液的存在會(huì)降低一些候選殺微生物劑的活性9。本文結(jié)果可見(jiàn)，人體正常精液和陰道模擬液對(duì)HPHSA的抗病毒活性并無(wú)顯著影響。（五）小結(jié)HPHSA為水溶性蛋白，其無(wú)味，高濃度是呈淡黃色，制備簡(jiǎn)單、快速、可重現(xiàn)，且其體外毒性、免疫功能和穩(wěn)定性評(píng)估證明其安全穩(wěn)定，具有被開(kāi)發(fā)成抗病毒藥物的潛能。HPHSA的優(yōu)勢(shì)1）具廣譜抗病毒活性，能對(duì)抗HIV1，HIV2，SIV和HSV的感染2）能有效對(duì)抗各類(lèi)藥物的耐受株，包括核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑耐藥株、非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑耐藥株及T20耐藥株3）HPHSA為來(lái)源于人的大分子蛋白類(lèi)藥物，其生物半衰期長(zhǎng)4）HSA來(lái)源于人類(lèi)，其抗原性較低，不易誘導(dǎo)不利的免疫反應(yīng)。然而，HPHSA作為蛋白類(lèi)藥物可能存在價(jià)格較高、給藥方式較難選擇等缺陷。將兩類(lèi)不同作用機(jī)制或不同作用靶點(diǎn)的新型抗病毒藥物與臨床應(yīng)用的抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用，將有效避免各自的優(yōu)缺點(diǎn)，取長(zhǎng)補(bǔ)短，發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)，從而產(chǎn)生協(xié)同作用效果。

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簡(jiǎn)介：糾武碩士學(xué)位論文2005屆家蠶生物反應(yīng)器研究轉(zhuǎn)H；MC577基因家蠶及桿狀病毒表達(dá)黝RSCOY刪基藩SILKWM’聯(lián)1BIOREACTMTSTUD、ONTRANSGENICSILKWORMEXPRESSINGJL島附一善FA刪1”P(pán)SS猻辨T，；M；ENEOFSAL／S。CO、Z口究爿磐名一，一一～J里～豎指導(dǎo)教師姓名曹，。力副教授，貢成良教援J專(zhuān)“、JK名稱(chēng)研究方向生物化學(xué)與分子生物學(xué)桿狀病毒及基因工程給定提交日期一一～呈壁塑要主5月SILKWORMBIORCACTORABSTRACTTHEREARETWOMAINTYPESOFSILKWORMBIOREACTOR；TRANSGENICSILKWORMANDBACULOVIRUSEXPRESSIONVECTORSYSTEMBEVSTHETRANSGENICVECTORPIGA3GFP1EGMCSF】WASGENERATEDBYCLONINGHGMCSFGENEUNDERTHECONTROLOFIE1PROMOTEFROMBMNPVINTOPIGA3GFETHETRANSGENICVECTORANDTHEHELPERHELPERPIGA3WERETRANSFERREDINTOSILKWORMTHROUGHPRESSUREPENETRATIONANDSPERMMEDIATIONTOOBTAINSILKWORMWITHGREENFLUORESCENTEMISSIONPERIDENTIFIEDHGMCSFFROMGENOMICDNAOFTRANSGERTICSILKWORM，ELISAMEASUREMENTPERFORMEDTHATCONCENTRATIONOFHGMCSFINLYOPHILIZEDPOWDERDIRECTLYMADEOFTHETHIRDTRANSGENICSILKWORMWASABOUT95NG／100MGOTHERWISE，MGENEOFSARSCORONAVIRUSWEREINSERTEDINTOEXPRESSIONVECTORPET28A十ANDEXPRESSEDIN17COLIBL21，THERESULTINDICATEDTHATMGENE28KDAWASEXPRESSEDINECOLIBL21，BUTANOTHERUNEXPECTEDPROTEIN18KDAAPPEARED，OFWHATWEPRESUMEDTHATITMIGHTBEDUETOTHECODONBIASOFECOBORDIGESTIONAFTEREXPRESSION；MGENEOFSARSCORONAVIRUSWASALSOCOLONEDINTOTRANSFERVECTORPBACPAKHISANDWASEXPRESSEDBYBEVSSDSPAGE、WESTEMBLOTTINGSHOWEDTHATTHEPROTEIN30KDAEXPRESSEDINSILKWORMWHOSEMOLECULARWEIGHTWASBIGGERTHANTHATOFTHEORETICPROTEIN2596KDAANDTHATMIGHTARISEFROMPROTEINPOSTMODIFICATIONSUCHASGLYCOSYLATIONKEYWORDSTRANSGENIC，SILKWORM，BIOREACTORPIGGYBACTRANSPOSON，BACULOVIRUSIIWRITTENBYHEZESUPERVISEDBYCAOGUANGLIGONGCHENGLIANG

簡(jiǎn)介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體介導(dǎo)的VEGFCDNA和BFGFCDNA聯(lián)合應(yīng)用基因治療缺血皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究姓名王偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)外科學(xué)（整形外科）指導(dǎo)教師汪春蘭20050501安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體介導(dǎo)的VEGFCDNA和BFGFCDNA聯(lián)合應(yīng)用基因治療缺血皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究摘要目的探討局部應(yīng)用以復(fù)制缺陷型腺病毒為載體的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子ADVEGF和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ADBFGF聯(lián)合應(yīng)用基因治療對(duì)大鼠隨意缺血皮瓣生存的影響，以觀(guān)察兩者是否有協(xié)同作用。方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用50只SD大鼠，體重350～400克，普通級(jí)，雌雄不論，以標(biāo)準(zhǔn)全價(jià)飼料在實(shí)驗(yàn)室分籠喂養(yǎng)，以使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。將大鼠隨機(jī)分成五組，每組10只，25％戊巴眈妥鈉腹腔注射麻醉40MG／KG。四肢固定后，背部8％硫化鈉脫毛、消毒。于大鼠背部正中設(shè)計(jì)蒂在尾側(cè)的隨意皮瓣，皮瓣的長(zhǎng)寬為8CMX2CM，蒂部位于髂嵴水平。于皮瓣遠(yuǎn)端真皮下分別注射ADVEGFADBFGF10只目的基因組，ADVEGF10只基因?qū)φ战M，ADBFGF10只基因?qū)φ战MADGFP10只綠色熒光蛋白基因?qū)φ战M，PBS10只磷酸鹽緩沖液空白對(duì)照組。484時(shí)后重新麻醉大鼠，按原設(shè)計(jì)掀起皮瓣，于深筋膜下鈍性分離至皮瓣蒂部，活動(dòng)性出血予以嚴(yán)格止血，原位用50’絲線(xiàn)間斷縫合，保證皮膚對(duì)合良好，術(shù)后單籠飼養(yǎng)7天，觀(guān)察皮瓣的成活情況，測(cè)量皮瓣的成活面積、計(jì)算成活率，并采集組織行免疫組化，組織學(xué)檢查等。觀(guān)察單位面積的微血管計(jì)數(shù)、光鏡觀(guān)察組織愈合情況。結(jié)果5組中ADVEGF＆AD_BFGF組皮瓣成活率最高為7818181％，與ADVEGF對(duì)照組6467308％、ADBFOF對(duì)照組6557313％有顯著性差異尸O01。ADVEGF組與ADBFGF組問(wèn)無(wú)顯著差異性，但與ADGFP5027175％組及PBS4962199％組間有顯著性差異P001。免疫組化基因轉(zhuǎn)染組毛細(xì)血管周?chē)鶹EGF、BFGF沉積，組織切片微血管密度，單位面積微血管計(jì)數(shù)顯示VEGF＆BFGF組最多，明顯高于對(duì)照組。結(jié)論復(fù)制缺陷型腺病毒為載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，局部皮下聯(lián)合注射ADVEGF和ADBFGF，二者有協(xié)同作用，可誘導(dǎo)局部VEGF和BFGF蛋白表達(dá)，兩者合用能減少用藥量，更有效促進(jìn)新生血管的形成，增加皮瓣的血運(yùn)，提高缺血皮瓣的成活面積，是一種簡(jiǎn)單有效的基因治療方法。關(guān)鍵詞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子；堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子；腺病毒載體；基因表達(dá)；皮瓣

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)分類(lèi)號(hào)____________________________________密級(jí)密級(jí)__________________________________UDCUDC________________________________編號(hào)編號(hào)__________________________________學(xué)位論文右側(cè)顳葉腦梗死患者的社會(huì)認(rèn)知障礙右側(cè)顳葉腦梗死患者的社會(huì)認(rèn)知障礙DEFICITOFSOCIALCOGNITIONWITHPATIENTSFOLLOWINGTHERIGHTTEMPORALLOBESCEREBRALINFARCTION唐南指導(dǎo)教師姓名指導(dǎo)教師姓名朱幼玲朱幼玲教授教授安徽醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科安徽醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)病學(xué)提交論文日期提交論文日期20120130303論文答辯日期論文答辯日期20120130505學(xué)位授予單位和日期學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)安徽醫(yī)科大學(xué)201201307答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人2012013年0505月學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，與我一起工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門(mén)或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，有權(quán)允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書(shū)館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。愿意將本人的學(xué)位論文提交中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡(luò)及其他數(shù)字媒體形式公開(kāi)出版，并同意編入CNKI中國(guó)知識(shí)資源總庫(kù)，在中國(guó)博碩士學(xué)位論文評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期日期

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簡(jiǎn)介：1型糖尿病是一種由于胰島Β細(xì)胞破壞導(dǎo)致胰島素絕對(duì)缺乏從而使血漿葡萄糖水平升高為表現(xiàn)的一種內(nèi)分泌代謝疾病兒童青少年多為此型。近年來(lái)世界各國(guó)、各地區(qū)兒童L型糖尿病的發(fā)病率均逐漸增高至10歲左右達(dá)高峰。美國(guó)近年的兩項(xiàng)META分析發(fā)現(xiàn)1型糖尿病兒童在認(rèn)知功能的某些特定方面受到損害。GREENWOOD等研究發(fā)現(xiàn)糖化血紅蛋白與糖尿病認(rèn)知功能呈負(fù)相關(guān)進(jìn)一步支持慢性高血糖會(huì)造成認(rèn)知功能的損害。近期PATINOFEMEZ等人的一項(xiàng)研究也得出同樣結(jié)論同時(shí)發(fā)現(xiàn)糖尿病患兒測(cè)試過(guò)程中的血糖與測(cè)試出的語(yǔ)言接受能力評(píng)分呈負(fù)相關(guān)并得出急性高血糖可能也會(huì)造成認(rèn)知功能的損害的結(jié)論。但并有發(fā)現(xiàn)低血糖與認(rèn)知功能的相關(guān)性。目前關(guān)于低血糖致認(rèn)知功能損傷的作用還存在爭(zhēng)議。有研究顯示當(dāng)血糖低于3MMOLL時(shí)會(huì)出現(xiàn)認(rèn)知功能的損傷。許多研究者認(rèn)為低血糖是導(dǎo)致認(rèn)知功能損傷的重要的起始因素。大樣本資料研究顯示患者在持續(xù)嚴(yán)重的低血糖之后將發(fā)生顯著的認(rèn)知功能損傷而且擴(kuò)散影響大腦多個(gè)區(qū)域如基底神經(jīng)節(jié)、海馬、顳區(qū)中部等。研究者還指出多次發(fā)作的短暫性低血糖對(duì)大腦有蓄積作用并誘發(fā)亞臨床的認(rèn)知改變。但美國(guó)DCCT開(kāi)展的包括1441個(gè)樣本的前瞻性研究發(fā)現(xiàn)盡管反復(fù)低血糖的發(fā)生率很高但所作的一系列的神經(jīng)心理學(xué)測(cè)試并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)重要的認(rèn)知功能改變的證據(jù)。而18年后對(duì)其中85％以上的參加者重新評(píng)估與最初結(jié)果一致沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其和認(rèn)知功能損傷存在聯(lián)系。關(guān)于低血糖致認(rèn)知功能損傷的作用尚需要進(jìn)一步的研究。國(guó)外的多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)糖尿病的起病時(shí)間與認(rèn)知功能具有相關(guān)性即糖尿病起病年齡較早的患兒的認(rèn)知能力較差具體體現(xiàn)在智力、空間視覺(jué)能力、記憶、注意力及眼手協(xié)調(diào)等方面。美國(guó)GUITY等人應(yīng)用比內(nèi)智力量表評(píng)估糖尿病患兒發(fā)現(xiàn)和對(duì)照組相比較病例組患兒總智商和對(duì)照組未見(jiàn)明顯差別但記憶力及注意力等較對(duì)照組較差。目前國(guó)內(nèi)對(duì)1糖尿病兒童認(rèn)知功能研究甚少。兒童時(shí)期是神經(jīng)心理發(fā)育的重要時(shí)期是患兒認(rèn)知能力、學(xué)習(xí)能力、語(yǔ)言發(fā)育等形成的重要階段因而受到學(xué)校和家長(zhǎng)的關(guān)注目前已有的研究工作主要集中2型糖尿病對(duì)老年患者認(rèn)識(shí)功能的影響但Ⅰ型糖尿病所引起的反復(fù)低血糖、高血糖等所致的腦組織能量供應(yīng)不足及代謝紊亂等是否對(duì)處于發(fā)育階段兒童的智力及智力結(jié)構(gòu)造成影響的研究很少。目的本研究以Ⅰ型糖尿病兒童為研究對(duì)象采用中國(guó)韋氏兒童智力量表CWISC對(duì)其智力結(jié)構(gòu)狀況進(jìn)行研究和分析探討其神經(jīng)認(rèn)知功能發(fā)育中的缺陷為其早期綜合干預(yù)提供理論依據(jù)。方法選擇2009年10月至2011年5月于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院幾內(nèi)科就診及住院治療的學(xué)齡期1型糖尿病兒童32例為糖尿病組病例均符合WHO對(duì)兒童1型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)病程≥1年年齡6～16歲平均年齡1142±284歲IQ≥80均右利手。男15例女17例。按照11匹配選擇同性別、同年齡±3個(gè)月、同出生方式的在校正常學(xué)齡期兒童32例年齡6～16歲平均年齡1147±289歲IQ≥80均右利手。兩組均除外癲癇等有腦損傷疾病的兒童。應(yīng)用湖南醫(yī)科大學(xué)龔耀先等修訂的中國(guó)韋氏兒童智力量表CWISC對(duì)所有入組兒童進(jìn)行智力測(cè)定同時(shí)家長(zhǎng)填寫(xiě)一般情況調(diào)查表。應(yīng)用SPSS170統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)可能影響智力的變量進(jìn)行多元回歸分析兩組比較采用配對(duì)樣本T檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料的分析采用卡方檢驗(yàn)。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)Α005雙側(cè)。結(jié)果1、糖尿病組與對(duì)照組兒童CWISC測(cè)試結(jié)果的比較糖尿病組兒童總智商FIQ、言語(yǔ)智商VIQ顯著低于對(duì)照組P＜005在分測(cè)驗(yàn)中糖尿病組患兒的言語(yǔ)量表中的知識(shí)I、分類(lèi)S、領(lǐng)悟C、算術(shù)A、詞匯V量表分低于對(duì)照組且有顯著性差異P＜005其余各項(xiàng)兩組間無(wú)顯著性差異P＞005在因子智商中兩組間的言語(yǔ)理解因子VC和記憶注意因子MC有顯著性差異P＜005而組織知覺(jué)因子PO無(wú)顯著性差異P＞005。2、糖尿病兒童年齡、發(fā)病年齡、病程、糖化血紅蛋白、低血糖發(fā)生頻率與糖尿病兒童智力結(jié)果的多元回歸分析糖尿病兒童的糖化血紅蛋白與總智商、言語(yǔ)智商有線(xiàn)性回歸關(guān)系糖尿病兒童的年齡、發(fā)病年齡、病程、低血糖發(fā)生頻率與總智商、言語(yǔ)智商、操作智商無(wú)線(xiàn)性回歸關(guān)系。結(jié)論1、糖尿病可能對(duì)患兒言語(yǔ)智商產(chǎn)生影響進(jìn)而影響患兒總智商水平。2、糖尿病兒童可能存在注意力的損害。3、糖尿病患兒的糖化血紅蛋白可能為影響糖尿病組患兒智商的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

簡(jiǎn)介：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒18E6在成釉細(xì)胞瘤中檢測(cè)意義的初探姓名李錦程申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師鐘鳴20070301中文論著摘要人乳頭瘤病毒18E6在成釉細(xì)胞瘤中檢測(cè)意義的初探目的成釉細(xì)胞瘤AMELOBLASTOMAHB是最常見(jiàn)的牙源性腫瘤，呈局部浸潤(rùn)性破壞，屬于良性腫瘤，容易復(fù)發(fā)，但是遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移極為罕見(jiàn)。在組織學(xué)上，AB分為濾泡型、叢狀型、顆粒細(xì)胞型，促結(jié)締組織增生型等。AB的發(fā)病機(jī)理尚未明確。人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIRUSESHPV是一種DNA病毒，約8000BP，無(wú)包膜。HPV易感染粘膜和復(fù)層鱗狀上皮，分為高危型和低危型。低危型包括HPV6和HPV11，主要導(dǎo)致良性病損的發(fā)生，包括大部分的病毒性性傳播性疾病。高危型有HPV16、HPV18、HPV31等，常導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生，包括宮頸癌和頭頸部腫瘤。HPV致癌中心環(huán)節(jié)是HPVL6和18的轉(zhuǎn)化蛋白E6，E6能與宿主細(xì)胞PJ3腫瘤抑制蛋白結(jié)合，從而引起P“降解。因?yàn)镻“具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤抑制功能，∥3功能的喪失將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，有利于突變、染色體不穩(wěn)定及宿主基因組癌變的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化、PCR、WESTERNBLOT等方法對(duì)人AB中HPVL8E6的DNA和蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探討HPVL8E6與人AB生物學(xué)行為的相關(guān)性和在該腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到的作用。材料與方法1、免疫組化中國(guó)醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院和第一臨床醫(yī)學(xué)院1987年至2005年存檔蠟塊，重新制作切片HE染色并復(fù)閱。正常口腔粘膜NORMALORALMUEOSA，NOM5例，良性AB45例，惡性AB5例。病理分型濾泡型22例，叢狀型13例，單囊型5例，顆粒細(xì)胞亞型1例，促結(jié)締組織增生型2例，外周型2例。2、WESTERNBLOT印記分析冰凍組織標(biāo)本為20042006年凍存標(biāo)本，NOM2例，AB18例。組織學(xué)分型濾泡型2例，叢狀型7例，棘皮瘤型2例，基底細(xì)胞型2例，促結(jié)締組織增生型2例，單囊型3例。

簡(jiǎn)介：急性上呼吸道感染是指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱(chēng)，是呼吸道最常見(jiàn)的一種傳染病。本病約有70～80％由病毒引起，主要有流感病毒甲、乙、丙、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒、?？刹《?、柯薩奇病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒等，成人以鼻病毒為主，兒童則以副流感病毒和呼吸道合胞病毒為主。本病在祖國(guó)醫(yī)學(xué)中歸屬于“外感發(fā)熱”、“傷風(fēng)感冒”范疇。內(nèi)經(jīng)、傷寒論、及后世醫(yī)家，如劉完素、葉天士、吳鞠通等都本病有詳細(xì)的論述，并已形成較為完備的外感熱病理論體系。一般認(rèn)為，該病的病因?yàn)椤傲?，即“風(fēng)、寒、暑、濕、燥、火”，八綱病機(jī)、臟腑病機(jī)、六經(jīng)病機(jī)、衛(wèi)氣營(yíng)血病機(jī)、三焦病機(jī)對(duì)此皆有詳實(shí)的記載。本課題通過(guò)對(duì)急性病毒性上呼吸道感染患者的中醫(yī)四診證候、發(fā)病節(jié)氣、結(jié)合血常規(guī)和血清病毒抗體檢測(cè)，探討中醫(yī)證候分型與血常規(guī)、病毒種類(lèi)的相關(guān)性。目的運(yùn)用臨床流行病學(xué)、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合地域、季節(jié)、年齡等多因素，探討急性病毒性上呼吸道感染的中醫(yī)證候，為特定病毒感染的中醫(yī)急性上呼吸道感染辨證論治提供客觀(guān)、相對(duì)定量的診斷標(biāo)準(zhǔn)。為中醫(yī)外感熱病的系統(tǒng)研究、中醫(yī)防治急性上呼吸道感染的流行、治療、預(yù)后提供客觀(guān)依據(jù)。方法采用前瞻性研究方法，對(duì)20069至20072前來(lái)我院急診門(mén)診和留觀(guān)的急性上呼吸道感染的病人進(jìn)行中醫(yī)四診辨證登記、病毒檢查以及隨訪(fǎng)。病毒檢查采用歐蒙試劑盒，免疫熒光法進(jìn)行。結(jié)果179例納入病例根據(jù)中醫(yī)四診證候，通過(guò)聚類(lèi)分析，可得出聚Ⅳ類(lèi)風(fēng)寒證，風(fēng)熱證、風(fēng)寒夾濕證、風(fēng)熱夾濕證型。279例納入病例當(dāng)中的64例進(jìn)行血常規(guī)檢查，分析聚類(lèi)證型與白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比的關(guān)系，提示聚類(lèi)Ⅳ風(fēng)熱夾濕證組與細(xì)菌感染相關(guān)；通過(guò)根據(jù)急性病毒性上呼吸道感染的癥狀學(xué)研究，針對(duì)性進(jìn)行血清流感AB，柯薩奇病毒、副流感病毒等抗體檢測(cè)。探討血清病毒抗體與聚類(lèi)證型之間的關(guān)系，結(jié)果，血清流感病毒AB，柯薩奇病毒以及副流感病毒抗體在聚四類(lèi)證型之間無(wú)相關(guān)性。結(jié)論1本課題收集的79例急性上呼吸道感染可聚類(lèi)分為風(fēng)寒證，風(fēng)熱證、風(fēng)寒夾濕證、風(fēng)熱夾濕證。其中，風(fēng)熱夾濕證與白細(xì)胞總數(shù)、中性粒百分比升高相關(guān)。2血清流感AB，柯薩奇病毒、副流感病抗體在聚四類(lèi)證型之間無(wú)相關(guān)性。