偷窥国产在线91,亚洲无线国产观看原创,日本精品aⅴ一区二区三区,久久九九兔免费精品6

簡(jiǎn)介：目的評(píng)估產(chǎn)后抑郁癥患者的認(rèn)知模式，分析心理社會(huì)因素對(duì)其認(rèn)知模式的影響及與人格特征、應(yīng)對(duì)方式、社會(huì)支持之間的關(guān)系，從而為產(chǎn)后抑郁癥患者的心理護(hù)理和孕產(chǎn)婦的健康教育提供科學(xué)依據(jù)。方法本研究采用便利抽樣，于2012年3月～7月在安徽省某市兩家醫(yī)院對(duì)產(chǎn)后3～7天的產(chǎn)婦進(jìn)行調(diào)查，共發(fā)放問(wèn)卷400份，回收有效問(wèn)卷389份（有效率9725％）。問(wèn)卷包括①自制產(chǎn)婦一般情況調(diào)查表；②愛(ài)丁堡產(chǎn)后抑郁量表（EPDS）；③自動(dòng)思維問(wèn)卷（ATQ）；④功能失調(diào)性態(tài)度問(wèn)卷（DAS）；⑤艾森克人格問(wèn)卷成人版（EPQ）；⑥社會(huì)支持評(píng)定量表（SSRS）；⑦特質(zhì)性應(yīng)對(duì)方式問(wèn)卷（TCSQ）。應(yīng)用SPSS160軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)性描述、T檢驗(yàn)、單因素方差分析、相關(guān)分析及多元逐步回歸分析。結(jié)果①在389名調(diào)查者中，產(chǎn)后抑郁癥患者147例（378）。②產(chǎn)后抑郁癥患者ATQ總分和DAS總分高于非抑郁產(chǎn)婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P結(jié)論⑴產(chǎn)后抑郁癥患者比非抑郁產(chǎn)婦出現(xiàn)更多更頻繁的自動(dòng)思維和更明顯的功能失調(diào)性態(tài)度。⑵產(chǎn)后抑郁癥患者人格特征表現(xiàn)為高神經(jīng)質(zhì)、高精神質(zhì)、內(nèi)傾性格和低掩飾性；產(chǎn)后抑郁癥患者比非抑郁產(chǎn)婦更容易采用消極應(yīng)對(duì)方式，較少采用積極應(yīng)對(duì)方式；產(chǎn)后抑郁癥患者社會(huì)支持狀況較非抑郁產(chǎn)婦差。⑶產(chǎn)后抑郁癥患者的年齡、夫妻感情狀況、人格特質(zhì)中的精神質(zhì)、神經(jīng)質(zhì)、掩飾性，消極應(yīng)對(duì)方式，社會(huì)支持狀況影響自動(dòng)思維；文化程度，職業(yè)，應(yīng)對(duì)方式中的消極應(yīng)對(duì)，社會(huì)支持狀況影響功能失調(diào)性態(tài)度。其中精神質(zhì)、神經(jīng)質(zhì)和夫妻感情狀況是影響自動(dòng)思維的主要因素。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文瘤腔注射重組人5型腺病毒在腦膠質(zhì)瘤綜合治療中的作用及與P53關(guān)系的臨床研究姓名米中波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師焦保華20090301中文摘要型腺病毒注射液安柯瑞治療腦膠質(zhì)瘤的療效進(jìn)行研究。并在臨床應(yīng)用中驗(yàn)證重組人5型腺病毒注射液安柯瑞在腦膠質(zhì)瘤的治療中與P53基因的關(guān)系。方法2007年2月至2008年6月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院隨機(jī)選擇符合重組人5型腺病毒注射液安柯瑞適應(yīng)癥腦膠質(zhì)瘤III、IV級(jí)的患者。此期間入組合格患者24例，術(shù)后病理證實(shí)，Ⅳ級(jí)星形細(xì)胞瘤12例，III級(jí)星形細(xì)胞瘤2例，間變星形細(xì)胞瘤L例，間變少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤L例，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤8例，其中男性16例，女性8例，年齡18至71歲，平均年齡487歲，KPS評(píng)分60100分，中位KPS評(píng)分75分?；颊咦栽溉虢M，術(shù)前行血常規(guī)、血液生化、尿常規(guī)檢查和頭顱強(qiáng)化CT或MRI。患者手術(shù)中依據(jù)瘤腔大小予以溶重組人5型腺病毒注射液安柯瑞瘤腔注射。對(duì)接受注射的患者監(jiān)測(cè)術(shù)后48小時(shí)體溫，每隔三小時(shí)記錄一次體溫，若有體溫高于374℃者，體溫監(jiān)測(cè)間隔應(yīng)縮短至一小時(shí)，對(duì)出現(xiàn)流感樣癥狀的受試患者應(yīng)盡行嚴(yán)密的臨床觀察，評(píng)價(jià)重組人5型腺病毒注射液安柯瑞在腦膠質(zhì)瘤治療中安全性。術(shù)后給予放療和化療干預(yù)。定期進(jìn)行臨床隨訪、血常規(guī)、血液生化、尿常規(guī)檢查以及定期復(fù)查頭顱強(qiáng)化CT或MⅪ，并與治療前資料比較評(píng)價(jià)治療的效果。結(jié)合臨床治療效果應(yīng)用SPSS115統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以P005作為判斷差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)重組人5型腺病毒注射液安柯瑞治療腦膠質(zhì)瘤的療效與P53基因的關(guān)系進(jìn)行研究。結(jié)果1、藥物不良反應(yīng)

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多USP4通過(guò)去泛素化RIg-I正向調(diào)節(jié)其介導(dǎo)的抗病毒作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文CDC25B基因RNAI慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定姓名張齊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師范健石欣20070501東南大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)物為350BP，鑒定結(jié)果和預(yù)期一致。測(cè)序結(jié)果表明合成的CDC2583SHRNA核苷酸序列插入正確，中間為產(chǎn)生針對(duì)靶基因的SHRNA寡核苷酸，兩端下劃線為核酸內(nèi)切酶HPAI和XHOI酶切位點(diǎn)。以LVSHCDC2583，PHELPER10和PHELPER20質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀察各孔中GFP表達(dá)含量，病毒滴度為表達(dá)GFP的細(xì)胞數(shù)除以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，測(cè)定滴度為L(zhǎng)XLO啊7／M】，說(shuō)明有大量質(zhì)粒轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞，病毒包裝成功。結(jié)論P(yáng)CR和測(cè)序結(jié)果證實(shí)，成功的構(gòu)建了人CDC2583基因RN赴慢病毒載體關(guān)鍵詞RNA干擾；CDC2583；胰腺癌；慢病毒；WESTERNBLOT；Ⅱ

簡(jiǎn)介：目的哺乳類(lèi)雷帕霉素靶蛋白MT信號(hào)通路在細(xì)胞的生存、生長(zhǎng)與增殖中起中心調(diào)控作用，本研究用柯薩奇病毒B3M株CVB3MCVB3感染體外培養(yǎng)的SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞，建立病毒性心肌炎VM的細(xì)胞模型，用雷帕霉素RAPAMYCIN阻斷MT信號(hào)通路，了解MT信號(hào)通路在VM心肌纖維化的可能作用機(jī)制。方法取新生SD鼠，用改良法原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定，建立CVB3感染的細(xì)胞模型。用MT抑制劑雷帕霉素對(duì)細(xì)胞模型進(jìn)行干預(yù)，采用RTPCR、WESTERNBLOT、免疫細(xì)胞化學(xué)染色等方法檢測(cè)細(xì)胞MT、EIF4E、Ⅰ型膠原及SMAD3表達(dá)，應(yīng)用SPSS115統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P005為差別有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1低濃度的胰蛋白酶和膠原酶合用，結(jié)合2次差速貼壁分離培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞，可提高心肌細(xì)胞的存活率和純度，使細(xì)胞搏動(dòng)良好。2心肌成纖維細(xì)胞可作為CVB3的感染細(xì)胞建立VM細(xì)胞模型。3雷帕霉素使心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)源性MT表達(dá)下調(diào)，在一定劑量?jī)?nèi)，呈劑量和時(shí)間依賴性，MT可作為雷帕霉素作用的靶點(diǎn)。4雷帕霉素抑制CVB3誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞成纖維細(xì)胞增殖是通過(guò)MTEIF4E信號(hào)通路起作用的。5雷帕霉素抑制CVB3可誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原及SMAD3表達(dá)，提示MTEIF4E信號(hào)通路與SMAD信號(hào)通路共同作用，參與CVB3誘導(dǎo)的心肌纖維化過(guò)程。6CVB3可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞I型膠原表達(dá)，雷帕霉素抑制CVB3誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞MT、EIF4E、Ⅰ型膠原及SMAD3表達(dá)，提示心肌細(xì)胞在CVB3感染時(shí)細(xì)胞表型可能發(fā)生改變，并通過(guò)MTEIF4E及SMAD信號(hào)通路在纖維化過(guò)程中起一定作用。

簡(jiǎn)介：本文擬在我國(guó)分離到的SINV基礎(chǔ)上，建立能特異性檢測(cè)該病毒核酸的SYBRGREENI熒光定量PCR檢測(cè)方法，并初步應(yīng)用于我國(guó)部分地區(qū)采集到的病毒性腦炎不明原因發(fā)熱病人臨床標(biāo)本和媒介蚊標(biāo)本的檢測(cè)，同時(shí)以常規(guī)RTPCR檢測(cè)方法作為對(duì)照以對(duì)新方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，了解SINV在我國(guó)部分地區(qū)疑似病人及媒介蚊中的流行和分布狀況，為將來(lái)臨床標(biāo)本和媒介蚊標(biāo)本中SINV的早期快速檢測(cè)和調(diào)查SINV在我國(guó)的流行情況提供新的技術(shù)手段。一、辛德畢斯病毒熒光PCR檢測(cè)方法的建立。根據(jù)SINV基因組核苷酸序列特性設(shè)計(jì)引物。病毒在BHK21細(xì)胞上繁殖擴(kuò)增后提取RNA和逆轉(zhuǎn)錄。以病毒CDNA為模板分別進(jìn)行SYBRGREENI熒光PCR和常規(guī)RTPCR擴(kuò)增，并對(duì)SYBRGREENI熒光PCR法的靈敏性、特異性、重復(fù)性等進(jìn)行分析。結(jié)果最適退火溫度為55℃，最適引物濃度為05ΜMOLL。用該方法檢測(cè)2株SINV株YN87448和XJ160結(jié)果均為陽(yáng)性，而對(duì)其他蟲(chóng)媒病毒如甲病毒屬GETA病毒、乙腦病毒、BATAI病毒、SEADOMA病毒、環(huán)狀病毒及西方馬腦炎病毒合成模板檢測(cè)時(shí)結(jié)果均為陰性。根據(jù)病毒空斑形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將YN87448病毒懸液進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋后，分別用常規(guī)PCR和SYBRGREENI熒光PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，可見(jiàn)SYBRGREENI熒光PCR檢測(cè)敏感性比常規(guī)PCR方法高近100倍，檢出下限可達(dá)01PFUML。利用4個(gè)不同模板濃度樣品分別進(jìn)行5次檢測(cè)以進(jìn)行穩(wěn)定性分析，對(duì)CT值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得到各樣品CT變異系數(shù)均5％。二、辛德畢斯病毒熒光PCR檢測(cè)方法的初步應(yīng)用。1模擬感染血清標(biāo)本和部分臨床腦脊液CSF標(biāo)本的檢測(cè)應(yīng)用新建立的方法對(duì)模擬感染的人血清標(biāo)本和7份臨床CSF標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)CT值及熔解曲線分析，結(jié)果可見(jiàn)標(biāo)本中其他成分對(duì)檢測(cè)體系無(wú)明顯影響，對(duì)結(jié)果判定無(wú)干擾。2辛德畢斯病毒熒光PCR檢測(cè)方法在檢測(cè)臨床標(biāo)本中的應(yīng)用用新建立的熒光PCR方法及常規(guī)RTPCR檢測(cè)方法對(duì)2003～2005年間在云南和河南4所醫(yī)院中采集的248份病毒性腦炎或不明原因發(fā)熱病人的臨床CSF血清標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果云南大理州107份標(biāo)本中，熒光PCR檢測(cè)7份為陽(yáng)性，其中3份為病毒性腦炎病人血清標(biāo)本，4份為不明原因發(fā)熱病人血清標(biāo)本，RTPCR檢測(cè)6份陽(yáng)性經(jīng)測(cè)序證實(shí)為SINV，包括在熒光PCR檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果中；西雙版納州97份標(biāo)本中，熒光PCR檢測(cè)17份為陽(yáng)性，其中3份為病毒性腦炎病人CSF標(biāo)本，14份為不明原因發(fā)熱病人血清標(biāo)本，RTPCR檢測(cè)1份陽(yáng)性包括在熒光PCR檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果中；云南昆明、河南鄭州醫(yī)院中采集的疑似病人標(biāo)本未檢出SINV。3辛德畢斯病毒熒光PCR檢測(cè)方法在檢測(cè)蚊蟲(chóng)標(biāo)本中的應(yīng)用用新建立的SINV熒光PCR檢測(cè)方法及常規(guī)RTPCR檢測(cè)方法對(duì)我國(guó)云南、四川、東北地區(qū)采集的106份100只份蚊標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果云南23份蚊標(biāo)本中熒光PCR檢測(cè)3份為陽(yáng)性，RTPCR檢測(cè)1份陽(yáng)性經(jīng)測(cè)序證實(shí)為SINV，包括在熒光PCR檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果中；四川49份蚊標(biāo)本中熒光PCR檢測(cè)4份為陽(yáng)性，RTPCR檢測(cè)1份陽(yáng)性經(jīng)測(cè)序證實(shí)為SINV，包括在熒光PCR檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果中；東北地區(qū)34份蚊標(biāo)本中未檢出SINV。綜上所述，本研究成功建立了SINV特異性核酸的SYBRGREENI熒光PCR檢測(cè)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示了較好的靈敏性、特異性和廣譜性。將新建立的方法初步應(yīng)用于我國(guó)部分地區(qū)采集的疑似病人臨床標(biāo)本和蚊標(biāo)本中的SINV檢測(cè)，結(jié)果云南省大理州和西雙版納州的腦炎病人，尤其是不明原因發(fā)熱病人標(biāo)本中檢測(cè)到多份SINV陽(yáng)性，說(shuō)明云南省存在SINV的流行，SINV可能為引起不明原因發(fā)熱的重要病原體之一；從云南地區(qū)蚊標(biāo)本中檢出了SINV特異性核酸，這與既往文獻(xiàn)報(bào)道云南省曾發(fā)現(xiàn)SINV在媒介蚊群中流行一致，四川地區(qū)蚊標(biāo)本中檢出SINV特異性核酸，提示這些地區(qū)人群中可能存在SINV的潛在感染。兩種PCR檢測(cè)方法比較可看出，新建立的SINV熒光PCR檢測(cè)方法比常規(guī)RTPCR方法操作簡(jiǎn)便、快速、檢測(cè)靈敏度更高，可替代常規(guī)RTPCR方法對(duì)SINV進(jìn)行檢測(cè)，方法可較好的應(yīng)用于疑似病人臨床標(biāo)本及蚊蟲(chóng)標(biāo)本的檢測(cè)。本研究為今后SINV的臨床檢測(cè)和我國(guó)SINV的流行監(jiān)測(cè)與預(yù)防控制提供了技術(shù)儲(chǔ)備。

簡(jiǎn)介：背景及目的1TETHERIN是具有特殊拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的脂筏相關(guān)跨膜蛋白2008年發(fā)現(xiàn)其可抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒的出芽釋放對(duì)多種包膜病毒具有潛在的抑制作用。流感病毒是有包膜的單鏈RNA病毒與HIV、EBOLA等包膜病毒類(lèi)似為此本研究對(duì)TETHERIN基因進(jìn)行了克隆及表達(dá)并研究TETHERIN的非特異性抗病毒機(jī)制及與對(duì)流感病毒復(fù)制的影響。2有絲分裂檢查站關(guān)鍵蛋白ZWINT1缺失不會(huì)停止正常細(xì)胞有絲分裂卻造成染色體過(guò)早的分離引起非整倍體癌變。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)新的ZWINT1變異體ZWINT1V存在。本實(shí)驗(yàn)利用細(xì)胞周期同步化技術(shù)使HELA細(xì)胞分別處于間期與分裂期分析HELA細(xì)胞不同細(xì)胞周期中ZWINT1及ZWINT1V蛋白的定位及隨細(xì)胞周期變化情況。材料與方法1提取人外周血單個(gè)核細(xì)胞RNARTPCR克隆TETHERIN基因并構(gòu)建其真核表達(dá)質(zhì)粒。2脂質(zhì)體法在MDCK細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TETHERIN表達(dá)質(zhì)粒間接免疫熒光檢測(cè)TETHERIN蛋白的表達(dá)及亞細(xì)胞定位。3脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染和G418篩選穩(wěn)定表達(dá)TETHERIN及空載體的MDCK細(xì)胞經(jīng)流感病毒PR8感染后利用CCK8法測(cè)定病毒感染后細(xì)胞的增殖動(dòng)力曲線檢測(cè)細(xì)胞對(duì)流感病毒的抵抗作用。4空斑法及血凝試驗(yàn)及REALTIMEPCR檢測(cè)流感病毒PR8在篩選穩(wěn)定表達(dá)TETHERIN及空載體的MDCK細(xì)胞中的復(fù)制動(dòng)力曲線。5脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)ZWINT1及ZWINT1V胸腺嘧啶核苷雙阻斷法同步化HELA細(xì)胞在不同細(xì)胞周期利用間接免疫熒光及細(xì)胞核染色檢測(cè)其亞細(xì)胞定位。結(jié)果1酶切及DNA測(cè)序結(jié)果表明所克隆的人TETHERIN基因與GENBANK序列一致其表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與預(yù)期設(shè)計(jì)相符免疫熒光結(jié)果表明其重組蛋白主要分布于細(xì)胞膜上。2間接免疫熒光及流式檢測(cè)表明成功構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TETHERIN及其空載體的MDCK細(xì)胞系。3CCK8檢測(cè)結(jié)果表明在感染PR8病毒后穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TETHERIN的細(xì)胞活力高于空載體的細(xì)胞感染后36H差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4空斑實(shí)驗(yàn)及血凝試驗(yàn)結(jié)果表明在感染各時(shí)間點(diǎn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TETHERIN的MDCK細(xì)胞上清中PR8病毒的滴度與空載體對(duì)照細(xì)胞的感染上清滴度無(wú)差異。5REALTIMEPCR結(jié)果顯示TETHERIN在24H36H細(xì)胞內(nèi)病毒含量高于空載體。6免疫熒光結(jié)果表明HELA細(xì)胞間期ZWINT1野生型定位于細(xì)胞質(zhì)ZWINT1V主要定位于細(xì)胞核分裂期ZWINT1及ZWINT1V大部分轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核的紡錘體及著絲粒上ZWINT1V與ZWINT定位不完全相同且ZWINT1V更趨近于細(xì)胞核。結(jié)論1成功克隆和表達(dá)人TETHERIN基因構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系重組表達(dá)TETHERIN的細(xì)胞可有效抵抗流感病毒對(duì)細(xì)胞的破壞作用并影響子代病毒的釋放初步表明人TETHERIN對(duì)流感病毒具有一定的抑制作用。2ZWINT1V在HELA細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位與ZWINT1野生型不同為進(jìn)一步研究ZWINT1V獨(dú)特的亞細(xì)胞定位對(duì)有絲分裂檢查及細(xì)胞生物學(xué)功能的影響提供研究基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：人細(xì)小病毒B19HUMANPARVOVIRUSB19PVB19是細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬中目前已知的唯一致人類(lèi)疾病的病毒，也是動(dòng)物病毒中體積最小結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的DNA病毒?，F(xiàn)已證實(shí)該病毒與多種兒童及成人疾病有關(guān)。1990年我科首次證實(shí)國(guó)內(nèi)存在該病毒感染，隨后的研究發(fā)現(xiàn)其是我國(guó)兒童急性再生障礙性貧血、急性血小板減少性紫癜、胎兒水腫及孕婦非免疫性流產(chǎn)等疾病的重要病因之一，并與先天性心臟病、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎R(shí)A發(fā)病相關(guān)。B19病毒是由56KB核苷酸組成，編碼一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和兩個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白VP1VP2。B19病毒殼蛋白主要由VP2蛋白組成，VP1蛋白不超過(guò)殼蛋白的10％，其獨(dú)特區(qū)暴露在病毒的表面。B19病毒的抗原表位區(qū)集中在VP1獨(dú)特區(qū)和VP1VP2連接區(qū)。只有VP1獨(dú)特區(qū)和VP1VP2連接區(qū)基因編碼的蛋白才能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體。非結(jié)構(gòu)蛋白NS和B19病毒毒力有關(guān)。VP1和VP2蛋白，特別是VP1獨(dú)特區(qū)，對(duì)B19病毒的診斷和保護(hù)性疫苗的制備非常有意義。但是，由于B19病毒不能在傳統(tǒng)的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，使B19病毒抗原來(lái)源十分困難；加之XA株B19病毒VP1獨(dú)特區(qū)在核苷酸水平和氨基酸水平上與標(biāo)準(zhǔn)株相比存在著顯著的差異，故需要大量制備中國(guó)株B19病毒VP1蛋白作為抗原，為制備特異性診斷試劑和疫苗創(chuàng)造條件。研究目的本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)是在構(gòu)建B19病毒VP1基因原核表達(dá)載體基礎(chǔ)上大量表達(dá)VP1蛋白，進(jìn)一步對(duì)VP1蛋白進(jìn)行純化，以純化蛋白作為免疫原免疫動(dòng)物制備其單克隆抗體，檢測(cè)VP1蛋白的免疫原性及其單克隆抗體的免疫活性，為以后研究VP1蛋白的生物學(xué)功能，和B19病毒的防治奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法1首先通過(guò)酶切、電泳鑒定我們已構(gòu)建的VP1PUC19質(zhì)粒，將VP1片斷連接質(zhì)粒PQE30，用氯化鈣法制備和轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15，送菌測(cè)序。2運(yùn)用IPTG誘導(dǎo)含有VP1PQE30質(zhì)粒的發(fā)酵培養(yǎng)菌株表達(dá)VP1融合蛋白，并通過(guò)SDSPAGE和WESTERNBLOT技術(shù)分析蛋白表達(dá)情況及鑒定表達(dá)蛋白，利用AKTAEXPLER100快速純化系統(tǒng)純化表達(dá)蛋白。3以純化的蛋白作為抗原，免疫BALBC小鼠，末次加強(qiáng)免疫后3D取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP20進(jìn)行融合，經(jīng)HAT選擇培養(yǎng)，通過(guò)ELISA反復(fù)篩選陽(yáng)性克隆，有限稀釋法進(jìn)行5次以上的亞克隆，得到的穩(wěn)定分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株后用WESTERNBLOT鑒定其特異性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1VPLPUC19經(jīng)BAMHI和SALI雙酶切可切出分子量約480BP的片段，與預(yù)期結(jié)果相符。轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌M15測(cè)序結(jié)果證實(shí)序列完全正確。2含有VP1PQE30質(zhì)粒的菌株經(jīng)誘導(dǎo)劑IPTG誘導(dǎo)，可表達(dá)分子量約為22KD的蛋白，經(jīng)WESTERNBLOT鑒定，均可與6HIS抗體結(jié)合，為VP1融合蛋白。3經(jīng)AKTAEXPLER100快速純化系統(tǒng)純化表達(dá)的融合蛋白，收獲復(fù)性蛋白75G，純度達(dá)95％以上。4反復(fù)篩選獲得兩株穩(wěn)定分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株LI和ZH；WESTERNBLOT結(jié)果顯示該單抗有較強(qiáng)的特異性。結(jié)論1成功構(gòu)建了人細(xì)小病毒B19XA株VPL基因的原核表達(dá)系統(tǒng)VP1PQE30M152用發(fā)酵罐培養(yǎng)含有VP1PQE30的大腸桿菌M15，可誘導(dǎo)B19病毒VP1蛋白大量表達(dá)。3通過(guò)AKTAEXPLER100快速純化系統(tǒng)進(jìn)行蛋白純化，蛋白純度達(dá)95％以上。4首次在國(guó)內(nèi)建立了可穩(wěn)定表達(dá)的B19病毒VP1蛋白的雜交瘤細(xì)胞株，獲高效價(jià)鼠抗B19病毒VP1蛋白單克隆抗體，為B19病毒VP1基因變異和B19病毒感染檢測(cè)試劑盒的研究奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼學(xué)號(hào)102552080422人星狀病毒1型衣殼蛋白的序列分析、克隆表達(dá)及多克隆抗體制備去SEQUENCEANALYSIS，MOLECULARCLONINGANDEXPRESSIONOFHUMANASTROVIRUSSEROTYPE1CAPSIDPROTEINANDPREPARATIONOFPOLYCLONALANTIBODIESINRABBITS學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)導(dǎo)師王文靜教授指導(dǎo)教師翁康生主任技師金子辰副主任醫(yī)師陸曄副主任技師姓名吳立夢(mèng)起止日期2008年9月2011年3月答辯日期2011年1月12日東華大學(xué)化學(xué)化工與生物工程學(xué)院一★本研究受“艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治，，國(guó)家科技重大專項(xiàng)編號(hào)2008ZXL0004002資助。附件二東華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)東華大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于保密口，在年解密后適用本版權(quán)書(shū)。不保密D。學(xué)位論文作者簽名墨孟蘿日期20F1年L月≥調(diào)指導(dǎo)教師簽名J≥安笏交日期如【1年明L年R

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的小鼠內(nèi)皮抑素基因治療G422膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的實(shí)驗(yàn)姓名尹嘉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)（神外）指導(dǎo)教師盧亦成20040401Y657736腺病毒介導(dǎo)的小鼠內(nèi)皮抑素基因治療G422膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的實(shí)驗(yàn)研究目的檢測(cè)重組腺病毒介導(dǎo)的內(nèi)廢抑素治療對(duì)G422小鼠臟質(zhì)母細(xì)胞瘤體外和體內(nèi)生長(zhǎng)的影響，分析其作用機(jī)制。方法重組腺病毒用293細(xì)胞擴(kuò)蹭，RTPCR和WESTERNBLOT證實(shí)目的基因表達(dá)，ATT和流式細(xì)胞襝測(cè)細(xì)胞體外生長(zhǎng)情況，用多兇素多水平析因分析法設(shè)計(jì)測(cè)定體內(nèi)轉(zhuǎn)染率，觀察實(shí)驗(yàn)組小鼠皮下成瘤時(shí)間、成瘤比率和抑瘤率，電鏡和免疫組化等鑒定療效。結(jié)果制各的重組腺病毒滴度為10PFU／ML，內(nèi)皮抑素基因明顯表達(dá)，轉(zhuǎn)染后對(duì)體井腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有影響，抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)病毒量為M01250，分點(diǎn)注射后第7天，體內(nèi)轉(zhuǎn)染率大于45％實(shí)驗(yàn)組小鼠皮下成瘤時(shí)間延長(zhǎng)、成瘤率下降，腫瘤體積增長(zhǎng)受到抑制。結(jié)論內(nèi)皮抑素基因治療對(duì)G422小鼠膠質(zhì)母細(xì)胞瘤有良好的治療作用。關(guān)鍵詞膠質(zhì)瘤基斟治療腺病毒內(nèi)皮抑素小鼠EXPERIMENTALSTUDYOFADENOVIRUSMEDIATEDMOUSEENDOSTATINGENETHERAPYTOG422GLIOBLASTOMAOBJECTIVETODETECTTHEAFFECTOFADENOVIRUSCARRYINGTHEMOUSEENDOSTATNADMENDGONETHERAPYONG422GTIOBLASMMAMVIVOANDYI／ROMETHODSADMENDWASAMPLIFIEDIT293CEILSTHEGONEEXPRESSIONCONFIRMEDBYRTPCRANDWESTERNBLOT，THEGROWTHOFTHECELLSINVITROLLETECTEDYMTTMETHODANDFCMTRANSFECTIONEFFICIENCYINVIVOASSAYEDBYINULTIVARIATEOTGENECAIIILEARMODELWEREPERFORMEDTHETUMORIGENICITYLIMEANDRATE，THEEPEVTIONOFTUMO『FVOLEREMEASUREDTILECURATIVEEFFECTWASASSAYEDBY1MMUNOHI豇OCHEMISTRYANDELECTRONTIU㈣WL，MNMICROSCOPERESULTSTHETILEROFADMENDPRODUCTIONWASMOREHA／／10。OPFU／MLANDE11‘OSTATINGONEWASEXPRESSEDWEFLTHEENDOSTATINGONEDIDNOTAFFECTTIMGTOWTHCFTUMORBUTRES；RAINEDTILE筍OⅥHOFENDOTHETIALCELTINVITROTHETRANSFECTIONEFFICIENCYWASHIGHEMOVERTMM012513THEINTRATUMOURAINJECTIONSITEOVER4AND7DAYSAFTERTHETUMORIGENICITYNDRATETHEEFFECTIONOFTUMOURVOLUMEOFTHEMICETREATEDWEREBETTERTHANTHATOFTILECGOLCONELUSIOASAGOODTHERAPEUTICAEFFECTWASINDICATEWITHTHEADENOVILUSCARRYINGTHEURJSEENDOSTATINADMENDGONETHERAPYONG422GLIOBASTOMAKEYWORDSGIIOBASTOMAGONETHERAPYADENOVIRUS，ENDOSTATIN，MOUSE

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多上海市病毒性肝炎、細(xì)菌性痢疾時(shí)空分布及其傳播特征的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：為了實(shí)現(xiàn)促腎上腺髓質(zhì)素基因在罹患高血壓動(dòng)物的體內(nèi)長(zhǎng)期、穩(wěn)定、安全的表達(dá)從而達(dá)到長(zhǎng)期、穩(wěn)定降壓的目的并觀察它對(duì)各種高血壓并發(fā)癥的預(yù)防作用我們將人類(lèi)AM基因克隆入重組雙鏈腺相關(guān)病毒載體中并包裝成病毒顆粒并經(jīng)過(guò)肝素柱純化獲得高滴度的RAAVDAM病毒然后以自發(fā)性高血壓大鼠為模型分別經(jīng)尾靜脈分別注射RAAVDAM實(shí)驗(yàn)組和RAAVDGFP對(duì)照組這兩種病毒顆粒210PFU大鼠每組6只注射前及注射后每周監(jiān)測(cè)動(dòng)脈收縮壓每2周收集24小時(shí)尿同時(shí)觀察動(dòng)物行為變化實(shí)驗(yàn)周期為15周實(shí)驗(yàn)結(jié)束前經(jīng)右頸總動(dòng)脈插管用美國(guó)POWERLAB公司的心功能測(cè)定儀測(cè)定大鼠心功能的各項(xiàng)指標(biāo)最后處死動(dòng)物并取心、主動(dòng)脈、肝、腎等組織提取蛋白質(zhì)、總RNA分別用RTPCR和ELISA檢測(cè)AMMRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)和分布情況檢測(cè)尿中微量白蛋白的含量及變化主要臟器稱重并固定切片作形態(tài)學(xué)分析以觀察腎臟損傷情況和心血管重構(gòu)情況結(jié)論由我們的結(jié)果可以看出重組雙鏈腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的人類(lèi)AM基因可以在高血壓動(dòng)物體內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定地表達(dá)在降低動(dòng)物血壓的同時(shí)還發(fā)揮了預(yù)防高血壓的各種并發(fā)癥包括腎臟損害和心血管系統(tǒng)重構(gòu)等的作用而且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中兩組動(dòng)物并未出現(xiàn)因?yàn)椴《据d體注入和表達(dá)所引起的嚴(yán)重毒副作用所以我們認(rèn)為重組雙鏈腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的AM基因可能成為治療高血壓病、預(yù)防其心血管并發(fā)癥的有效藥物

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多丙型肝炎病毒NS5A蛋白核酸適體抗病毒作用機(jī)制.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文單純皰疹病毒性小鼠面癱復(fù)燃模型建立及預(yù)防的實(shí)驗(yàn)性研究姓名江濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師王海波樊兆民20070511山東大學(xué)碩士學(xué)位論文單純皰疹病毒性小鼠面癱復(fù)燃模型建立及預(yù)防的實(shí)驗(yàn)性研究研究生江濤導(dǎo)師王海波樊兆民教授中文摘要研究目的1建立I型單純皰疹病毒潛伏感染再激活導(dǎo)致小鼠面癱的模型2觀察免疫球蛋白IGG和干擾素對(duì)單純皰疹病毒性小鼠面癱的預(yù)防效果。研究方法選擇64只16～189、4周齡雌性BALB／C小鼠，用26G針頭在小鼠左耳廓背面近耳根部皮膚連續(xù)搔刮后，將I型單純皰疹病毒液滴在創(chuàng)面上，同樣方法搔刮右耳廓，滴PBS作為對(duì)照，制作小鼠面癱潛伏模型。然后將小鼠按數(shù)字表隨機(jī)分為3組，第一組小鼠20只腹腔注射免疫球蛋白IGG；第二組20只腹腔注射干擾素；第三組小鼠24只作為對(duì)照，腹腔注射生理鹽水，然后，每天觀察小鼠瞬目反射RP，觸須運(yùn)動(dòng)和小鼠鼻尖位置，確定面癱有無(wú)發(fā)生，面癱持續(xù)時(shí)間，以及面癱恢復(fù)情況，一直觀察到面癱恢復(fù)后八周。八周后取面癱恢復(fù)的小鼠，腹腔注射環(huán)孢素，建立小鼠面癱復(fù)燃模型，并用PCR法檢測(cè)病毒HSV1DNA的表達(dá)。結(jié)果第一組小鼠有LO只發(fā)生面癱，面癱率5096，面癱持續(xù)時(shí)間722222天第二組小鼠有6只發(fā)生面癱，面癱率3096，面癱持續(xù)時(shí)間450176天；第三組對(duì)照組小鼠有16只發(fā)生面癱，面癱率67％，面癱持續(xù)時(shí)間885258天。環(huán)孢素注射后3／28只小鼠再次面癱，復(fù)燃率11％，所有再次面癱小鼠均檢測(cè)到HSVIDNA，未再次面癱的小鼠均未檢測(cè)出HSVIDNA。結(jié)論1I型單純皰疹病毒潛伏感染再激活可能是單純皰疹病毒性小鼠面癱的發(fā)病原因之一，潛伏病毒的再激活與免疫力低下有關(guān)；2應(yīng)用于擾素可以有效降低面癱發(fā)生率和縮短面癱持續(xù)時(shí)間；3應(yīng)用免疫球蛋白IGG不能有效降低面癱發(fā)生率和縮短面癱持續(xù)時(shí)間。關(guān)鍵詞I型單純皰疹病毒小鼠面癱；潛伏感染；干擾素口2B；環(huán)孢素

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多人巨細(xì)胞病毒pp65DNA疫苗免疫小鼠的研究.pdf精彩內(nèi)容。