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簡介：青島大學碩士學位論文慢病毒載體介導的LIGHT基因?qū)Y(jié)直腸癌細胞抑制作用的研究姓名駱諍申請學位級別碩士專業(yè)外科學（普外科）指導教師王海波20100520INHIBITIONOFLIGHTGENEBYLENTICIRALVECTORMEDIATEDONCOLORECTAICANCERCELLSABSTRACTAIMTODETERMINEWHETHERTHELENTIVIRUSMEDIATELIGHTGENECANINHIBITTHEHCTLL6CELLSMETHODSUSINGLENTIVIRUSMEDIATELIGHTGENEINFECTHCTLL6CELLSTHECELLSWEREDEVIDEDINTOTHREEGROUPSINORDERTOFINDOUTTHECHANGESOFPROLIFERATIONOFHCTLL6CELLLINESANDTHEEXPRESSIONOFLIGHTGENEMRNAINHCTL16CELLLINESWEANALYZEDTHEDATABYREALTIMEFLUORESCENTQUANTITATIVEPCRANDMTTEXPERIMENTRESUITS1T11EEXPERIMENTOFREALTIMEFLUORESCENTQUANTITATIVEPCRSHOWEDTHEPOSITIVEEXPRESSIONOFLIGHTGENEMRNA2375243__116197WASSTRONGERTHANTHENEGATIVEGROUP210372_126214ANDCONTROLGROUPP0052THEVALUESOF490NMWAVELENGTHLIGHTABSORPTIONWEREDIFFERENTINTHETHREEGROUPSINMTREXPERIMENTTHENUMBEROFALIVECELLSINTHEGROUPOFLIGLLTWASLOWERTHANOTHERSINTHEFRISTDAYP005THENUMBEROFALIVECELLSINTHENEGATIVEGROUPWASLOWERTHANCONTROLGROUPFROMTHESECONDDAYFP0052CONCLUSIONLIGHTGENESMEDIATEDOFHCTL16THESERESULTSPROVIDEAINVASIONANDMETASTASISBYLENTIVIRUSMAYBEUSEFULFORINHIBITINGGROWTHNOVELTHERAPEUTICPREVENTINGCOLONCANCERCELLPOSTGRADUATESTUDENTZHENGLUOGENERALSURGERYDIRECTEDBYPROFHAIBOWANGKEYWORDSCOLORECTALCANCERCELLSLIGHTGENE；LENTIVIRUS咖4㈣4㈨3肌4㈣3Ⅲ7，III●IⅢY

簡介：該研究用PCR方法檢測腎移植術(shù)后尿中的BKV并進行序列分析旨在選擇一種較靈敏、特異的檢測方法以指導腎移植術(shù)后BKV感染及致病的診斷和治療該研究從浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院腎臟病中心于1993年7月至2003年1月間施行同種異體腎移植患者中選取61例尿樣標本作為A組該組男44例女17例并選取該中心正在血液透析等待腎移植病人的尿樣標本30例作為B組該組男15例女15例另外采自健康志愿者的30例尿樣標本作為C組對照組該組男19例女11例采用PCR結(jié)合測序的方法檢測各組尿樣標本中的BKVDNA并用SPSS10統(tǒng)計學軟件分析實驗結(jié)果以P005為顯著性差異從該實驗中可以得出以下結(jié)論1、該實驗國內(nèi)首次從腎移植病人尿中檢測到BKVDNA腎移植患者是引起B(yǎng)KV尿的高危人群2、腎移植后有無排異史及腎功能正常與否和BKV尿無相關(guān)性3、尿BKV的檢測可用于腎移植后BKV相關(guān)性輸尿管梗阻的鑒別診斷4、尿BKV的PCR檢測可用于BKVAN的篩選診斷

簡介：華中科技大學碩士學位論文乙肝病毒X蛋白激活NFΚB信號通路對AFP表達的影響姓名任利申請學位級別碩士專業(yè)外科學（普外）指導教師陳孝平20090401華中科技大學碩士學位論文4增加278043和472053倍（P005）；50ΜMOLLPDTC作用24H后L02HBX細胞NFΚB信號通路阻斷，AFPMRNA和蛋白表達分別為140016倍和312044倍，與未加入PDTC作用的L02HBX細胞相比均有統(tǒng)計學意義（P005）。結(jié)論NFΚB信號通路是HBX上調(diào)AFP表達的途徑之一?！娟P(guān)鍵詞關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒X蛋白甲胎蛋白，核因子ΚB，信號通路，肝癌

簡介：目的已有計算機程序的分析預(yù)測結(jié)果顯示漢坦病毒的G2糖蛋白可能是其融合蛋白，而且屬于Ⅱ類融合蛋白，而內(nèi)在的結(jié)構(gòu)區(qū)（AA763～785）很可能是介導膜融合的關(guān)鍵部位融合肽。另外，已有實驗證據(jù)支持漢坦病毒的融合肽位于糖蛋白G2而不是G1上。鑒于漢坦病毒GM0438株也存在上述保守區(qū)（AA763～785），本研究擬通過實驗對此保守區(qū)是否為其融合肽做出初步判斷。從而為闡明HV的細胞融合機制、研制有效的漢坦病毒新型疫苗和治療制劑奠定基礎(chǔ)。方法根據(jù)GM0438株M片段CDNA基因序列應(yīng)用PRIMER5軟件設(shè)計引物，同源重組PCR法構(gòu)建10個單個氨基酸突變的糖蛋白G2的克隆載體。PCR擴增糖蛋白突變體的G2編碼區(qū)基因，雙酶切后與經(jīng)過同樣雙酶切的表達載體PCAGGSMCS連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5A，氨芐青霉素篩選糖蛋白G2單個氨基酸突變體的表達載體。經(jīng)雙酶切和測序證實。然后將野毒株G1BG1與GMG2某糖蛋白G2突變體表達載體共轉(zhuǎn)染VEROE6細胞，間接免疫熒光檢測蛋白表達情況，并經(jīng)酸性MEM處理、GIEMSA染色后觀察細胞融合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果1構(gòu)建了10個糖蛋白G2單個氨基酸突變的克隆載體C765A、P767D、P768D、C770A、P771D、G772D、G774D、G776D、C777A、C780A，雙酶切鑒定目的片段和載體分別為16KB和27KB，并經(jīng)測序證實。2構(gòu)建了10個糖蛋白G2單個氨基酸突變的表達載體GMG2C765A、GMG2P767D、GMG2P768D、GMG2C770A、GMG2P771D、GMG2G772D、GMG2G774D、GMG2G776D、GMG2C777A、GMG2C780A，雙酶切鑒定目的片段和載體分別為16KB和47KB，并經(jīng)測序證實。3間接免疫熒光實驗顯示野毒株G1BG1與GMG2共轉(zhuǎn)染組、G1BG1與某糖蛋白G2突變體表達載體共轉(zhuǎn)染組均有亮綠色熒光信號產(chǎn)生，呈胞漿分布。4野毒株G1BG1與GMG2共轉(zhuǎn)染后在偏酸性條件下可引起VEROE6細胞發(fā)生融合，而共轉(zhuǎn)染G1BG1與某糖蛋白G2突變體表達載體的細胞則沒有融合現(xiàn)象發(fā)生。結(jié)論漢坦病毒GM0438株G2糖蛋白上潛在融合肽區(qū)域（AA763～785）的10個特定的氨基酸突變均可以完全阻斷細胞融合的出現(xiàn)而不影響糖蛋白的表達。這強烈提示此保守區(qū)與膜融合密切相關(guān)，很可能是病毒的融合肽。

簡介：副粘病毒是一類對人和動物致病的重要病毒，在世界范圍內(nèi)流行，分為兩個亞科副粘病毒亞科和肺病毒亞科。副粘病毒亞科包括副粘病毒屬、麻疹病毒屬和腮腺炎病毒屬；副粘病毒屬主要包括人副流感病毒（HPIV）、新城疫病毒（NDV）和仙臺病毒（SV），麻疹病毒屬主要包括麻疹病毒（MV），腮腺炎病毒屬主要有流行性腮腺炎病毒（MUV）。肺病毒亞科只包括肺病毒屬，主要有人和牛呼吸道合胞病毒（RSV）。副粘病毒能夠引起人類呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)疾病，如上呼吸道感染、支氣管炎、毛細支氣管炎、肺炎、結(jié)膜炎、睪丸炎、卵巢炎等等，嚴重時甚至引起死亡。其中，MV、MUV、RSV等能引起兒童常見病，如麻疹、流行性腮腺炎以及呼吸道感染等。人副流感病毒3型（HPIV3）是嬰幼兒毛細支氣管炎和肺炎的第二大病因，還可引起嬰幼兒的哮吼和喉炎。目前尚無有效的抗HPIV3治療措施。除感染人類外，副粘病毒還能感染動物如禽類、馬類、豬類等。NDV是重要的禽類傳染病病原體，往往引起災(zāi)難性的、廣泛流行的疾病。此外，NDV尚有一定的臨床意義，如誘導干擾素（IFN）、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤治療等。本研究在原有工作的基礎(chǔ)上，利用定點突變技術(shù)構(gòu)建HPIV3HN蛋白促細胞融合區(qū)域兩端亮氨酸拉鏈中的保守氨基酸突變體，然后檢測突變體與同源F蛋白共表達后的促細胞融合活性以及受體結(jié)合活性、細胞表面表達效率，從而確定亮氨酸拉鏈對HPIV3HN蛋白功能的影響。一、TM區(qū)亮氨酸拉鏈突變體對促細胞融合活性的影響HPIV3HN蛋白TM區(qū)亮氨酸拉鏈由氨基酸L36～150組成，其中L36、L43和I50等氨基酸在副粘病毒中高度保守，采用同源重組PCR方法進行定點突變構(gòu)建突變體。每個突變體需要設(shè)計兩對含同源序列的引物，進行兩次PCR。獲得的兩個PCR產(chǎn)物含有短同源末端序列，將其同時轉(zhuǎn)染大腸桿菌TG1后，二者會自動重組形成完整的含突變位點的質(zhì)粒。為避免引入額外突變，引物中未引入酶切位點。轉(zhuǎn)染后提取質(zhì)粒，電泳結(jié)果正確，經(jīng)測序證實引入突變，成功將各保守氨基酸突變?yōu)楸彼幔ˋ）。由此得到3個單獨突變體，分別命名為L36A、L43A和I50A。在單獨突變的基礎(chǔ)上，構(gòu)建1個聯(lián)合突變體，命名為L36AL43A。將突變體分別轉(zhuǎn)染痘苗病毒VTF73預(yù)感染的BHK21細胞，采用定性（GIEMSA染色）和定量（指示基因法）兩種方法檢測細胞融合情況。細胞融合功能經(jīng)校正后，消除了蛋白表達效率的影響。結(jié)果顯示，與野生型（VVT）HPIV3HN基因相比，各單獨突變體促細胞融合活性有不同程度的降低。以WTHN基因促細胞融合活性為100％，突變體L36A融合活性為WTHN基因的6666％，突變體L43A融合活性為、VTHN基因的6060％，突變體150A融合活性為、WTHN基因的5760％。聯(lián)合突變體L36AL43A轉(zhuǎn)染后未見細胞融合形成。HPIV3HN蛋白頸部近膜區(qū)的亮氨酸拉鏈由氨基酸L114～I128組成，其中L114、L121和I128在副粘病毒中高度保守。采用同源重組PCR方法進行定點突變。突變后提取質(zhì)粒后電泳結(jié)果正確，經(jīng)測序證實成功引入突變。由此得到3個單獨突變體，分別命名為L114A、L121A和I128A。在單獨突變的基礎(chǔ)上，構(gòu)建1個聯(lián)合突變體，命名為L121AI128A。將突變體分別轉(zhuǎn)染痘苗病毒VTF73預(yù)感染的BHK21細胞，采用定性（GIEMSA染色）和定量（指示基因法）兩種方法檢測細胞融合情況。受體結(jié)合活性經(jīng)校正后，消除了蛋白表達效率的影響。以WTHPIV3HN基因促細胞融合活性為100％，L114A促細胞融合活性為WTHN基因的5300％，L121A促細胞融合活性為WTHN基因的5910％，I128A促細胞融合活性為WTHN基因的9090％。聯(lián)合突變體L121AI128A轉(zhuǎn)染后未觀察到細胞融合。頸部亮氨酸拉鏈附近及內(nèi)部的氨基酸P111、I112和I125在副粘病毒中亦是保守位點。同樣以同源重組PCR方法獲得3個單獨突變體，分別命名為P111A、I112A和I125A。將突變體分別轉(zhuǎn)染痘苗病毒VTF73預(yù)感染的BHK21細胞，采用定性（GIEMSA染色）和定量（指示基因法）兩種方法檢測細胞融合情況。促細胞融合活性經(jīng)校正后，消除了蛋白表達效率的影響。以WTHPIV3HN基因促細胞融合活性為100％，P111A為WTHN的4390％，1112A為WTHN的3940％，1125A為WTHN的3480％。各突變體分別進行3次平行實驗，所得實驗數(shù)據(jù)采用秩和檢驗進行分析；秩和檢驗統(tǒng)計值H2878，P005，表明各突變體受體結(jié)合活性差別不存在統(tǒng)計學意義。三、F蛋白對HN蛋白受體結(jié)合活性的影響將上述11個突變體分別與F蛋白共轉(zhuǎn)染痘苗病毒VTF73預(yù)感染的BHK21細胞，采用血吸附實驗檢測突變體的受體結(jié)合活性。以WTHN基因受體結(jié)合活性為100％，突變體L36A受體結(jié)合活性最高，為WTHN基因的9914％，突變體I125A受體結(jié)合活性最低，為WTHN的8448％。采用秩和檢驗分析HN單獨表達（血吸附HN組）與HN和F蛋白共表達（血吸附HNF組）兩組受體結(jié)合活性的差別，結(jié)果H10800，P005，表明兩組存在差別，血吸附HN組受體結(jié)合活性比血吸附HNF組高。從本實驗結(jié)果可得出結(jié)論本實驗成功構(gòu)建了HPIV3HN蛋白TM區(qū)和頸部近膜區(qū)兩個亮氨酸拉鏈中保守氨基酸的突變體，共獲得突變體11個，其中9個單獨突變體，分別為L36A、L43A、150A、L114A、L121A、I128A、P111A、I112A和I125A；在單獨突變的基礎(chǔ)上構(gòu)建了兩個聯(lián)合突變體，L36AL43A和L121AI128A。TM區(qū)和頸部近膜區(qū)兩個亮氨酸拉鏈對于HPIV3HN蛋白促細胞融合活性具有重要的作用。其中的保守氨基酸突變后，促細胞融合活性均有不同程度的降低，最低的為突變體I125A，僅為WTHN的3480％，而突變體I128A融合活性最高，為WTHN的9090％。其它突變體融合活性在3940％～6666％之間。而兩個聯(lián)合突變體轉(zhuǎn)染后未見細胞融合形成。這進一步證明HPIV3HN蛋白促細胞融合區(qū)域不是位于頭部，而是位于TM區(qū)和頸部近膜區(qū)，并在氨基酸I125結(jié)尾，I125是對促細胞融合活性有著關(guān)鍵作用的氨基酸殘基；亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)的完整性是副粘病毒細胞融合所必需的，對HN蛋白促細胞融合作用有著重要的影響。HN蛋白促細胞融合區(qū)域兩端亮氨酸拉鏈對受體結(jié)合活性并無影響。各突變體受體結(jié)合活性與WTHN非常接近；突變體I125A受體結(jié)合活性為WTHN的8586％，其它突變體在9192％～100％之間。與HN蛋白單獨表達相比，F(xiàn)蛋白和HN蛋白共表達能夠一定程度的降低HN蛋白的受體結(jié)合活性。

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文腺病毒介導PTEN和TIMP2抑制人腦膠質(zhì)瘤U87的實驗研究姓名盧旺盛申請學位級別博士專業(yè)外科學（神外）指導教師周曉平20030401LOHMRNAMMPMOTMTTMVDODPAGEPBSPCRPFU‘二1己PPPTENRNASEARTPCRSDSTBSTETTRISVEGFTSP1LURIABERTANIMEDIUMLOSSOFALLELEMESSENGERRNAMATRIXMETALLOPROTEINASESMULTIPLICITYOFINFECTIONTETRAZOLIUMBROMIDEMICROVESSELDENSITYOPTICALDENSITYPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFEREDSOLUTIONPOLYMERASECHAINREACTIONPLAQUEFORMINGUNITPATHOLOGICALINDEXPROPIDIUMIODIDEPHOSPHATASEANDTENSINHOMOLOGYDELETEDONCHROMOSOMETENRIBONUCLEASEAREVERSETRANSCRIPTIONPCRSODIUMDODECYLSULFATETRISBUFERSALINENNNNTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINETETRACYCLINETISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASES2TRISHYDROXYMETHYLAMINOMETHANEVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTORTHROMBOSPONDIN1LB培養(yǎng)基雜合子丟失信使RNA基質(zhì)金屬蛋白酶感染復數(shù)四甲基偶氮哇鹽法微血管密度光吸收度聚丙烯酞胺凝膠電泳磷酸鹽緩沖溶液多聚酶鏈式反應(yīng)空斑形成單位病理指數(shù)碘化丙喧10號染色體上缺失的礴成醉和張力蛋白同源物RNA酶A逆轉(zhuǎn)錄PCR十二烷基硫酸鈉TRIS鹽緩沖液四甲基乙二胺四環(huán)素基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑_2三輕甲基氨基甲烷血管內(nèi)皮生長因子血小板反應(yīng)素1

簡介：胃腸道腫瘤患者對新輔助化療治療認知的質(zhì)性研究THECOGNITIVEEXPERIENCESOFGASTROINTESTINALCANCERPATIENTSCOMPLETEDNEOADJUVANTCHEMOTHERAPYAQUALITATIVERESEARCH院系護理學院專業(yè)護理姓名袁一君指導教師顏美瓊主任護師指導4GT吳燕副主任護師23類別三影響患者NACT認知體驗的促進與妨礙兇素231主題一患者對醫(yī)護人員的信任感減弱妨礙劃‘NACT的正性體驗2311溝通不及時患者對醫(yī)方信任減弱2312醫(yī)者人文關(guān)懷不足患者對醫(yī)方信任減習弓2313“關(guān)系本位”、醫(yī)生聲譽可增強信任，但易導致被動依從232主題二積極的家庭情感支持促進忠者XJNACT的正性體驗233主題三醫(yī)療資源不可及、不便捷妨礙患者‘對NACT的正性體驗第四章討論1患者對NACT的正確認知有助于堅持治療11對NACT知識的正確掌握是堅持FFF療的前提12辯證看待NACT的積極效益和存在的風險13正確看待NACTI良反應(yīng)的“客觀性”2提高患者對醫(yī)護人員的信任感有助丁患者堅持NACT3良好的家庭支持有助于提高忠者NACT時的信心4提高忠者參與治療時醫(yī)療資源一J‘及、便捷性有助丁‘患者堅持治療第五章研究結(jié)淪第入章研究局限與未來研究建議L研究局限2未來研究建議參考文獻綜述胃腸道腫瘤患者化療依從性研究附錄致謝攻讀學位期間的研究成果第3_JJ笱筋筋”艿拍拍勰船勰羽四如引弘舛”””弘引鰓酡∞

簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文大腸癌新型CEA疫苗的優(yōu)化設(shè)計及其重組桿狀病毒的表達及鑒定姓名輦偉奇申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師王志新20050501笙三至墮丕堂堡主堂堡堡莖英文縮寫AICDAIDALVACCEACTLDMSODNADNTPECOLIEDTAHIVHPVHTLIPTGLLL2MHC0DPADREPAPCSPBSPCNAPCRPEGRNASESDS英文縮寫一覽表英文全稱中文全稱ACTIVATIONINDUCEDCELLDEATH激活誘導的細胞死亡ANTIIDIOTYPIEANTIBODY抗獨特型抗體ACANARYPOXVIRUS金絲雀鳥痘病毒CARCINOEMBRYONICANTIGEN癌胚抗原CYTOTOXICTCELL細胞毒性T細胞DIMETHYLSULFOXIDE二甲基亞砜DEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸DEOXYRIBONUCLEOSIDETRIPHOSPHATE脫氧核糖核苷三磷酸ESCHERICHIACOIL埃希氏大腸桿菌ETHYLENEDIAMINETETRACETATE乙二胺四乙酸HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS人免疫缺陷病毒HUMANDAPILLOMAVIRUS人乳頭瘤病毒HELDTCEN輔助性T細胞ISOPROPYLTHIO一0異丙基硫代一BDGALACTOSIDED一半乳糖苷LATE￡ENEONE晚期基因1LATEGENETWO晚期基因2MAJORHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEX主要組織相容性復合物OPTICALDENSITY光密度PANHLADRBINDINGEPITOPE泛DR輔助性T細胞表位PROFESSIONALANTIGENPRESENTINGCELLS專職性抗原呈遞細胞PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PROLIFERATIONCELLNUCLEARANTIGEN增殖細胞核抗原POLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)POLYETHYLENEGLYCOL聚乙二醇RIBONUCLEASE核糖核酸酶SODIUMDODECYSULFATE十二烷基硫酸鈉L

簡介：目前，肝臟移植是治療終末期肝病最有效的方法之一。本研究通過將全長人源化乙型肝炎病毒表面前S2抗原抗體FULLHUMANIZEDANTIBODYTOPRES2ANTIGENOFHUMANHEPATITISBVIRUS，ABHHBVS2基因克隆至腺病毒載體中，在293細胞中重組腺病毒。體外感染CHO、肝細胞株WRL68、L02及培養(yǎng)的人原代肝細胞，獲得表達的全長人源化基因工程抗體，檢測抗體親和力及中和乙肝病毒能力。采用大鼠原位肝移植，觀察到攜帶ABHHBVS2基因的重組腺病毒在大鼠移植肝中高效表達，能中和乙肝病毒，預(yù)防HBV對人原代肝細胞的感染。通過體、內(nèi)外實驗表明，腺病毒攜帶ABHHBVS2基因，可獲得高效表達的全長人前S2抗體，抗體親和力常數(shù)較高。并證明能在移植大鼠供肝中較高表達，表達的抗體能中和乙肝病毒，保護人原代肝細胞不受HBV感染。顯示在臨床肝移植中可能有潛在應(yīng)用價值，為深入研究基因治療預(yù)防肝移植后移植肝乙型肝炎復發(fā)，以及研究基因治療表達全長抗體治療臨床其他疾病提供了實驗依據(jù)。

簡介：多發(fā)性硬化認知障礙評估及其影響因素分析EVALUATIONOFCOGNITIVEIMPAIRMENTWITHMULTIPLESCLEROSISANDITSINFLUENCINGFACTORS學科專業(yè)神經(jīng)病學研究生米飛躍指導教師殷旭華主任醫(yī)師仝秀清副主任醫(yī)師完成時間二O一五年五月學號2012120050中圖分類號R74451目錄目錄中文摘要（1）英文摘要（2）論文題目（3）資料與方法（4）結(jié)果（6）討論（7）結(jié)論（11）參考文獻（11）文獻綜述（14）參考文獻（23）中英文縮略語表（27）攻讀學位期間發(fā)表文章情況（28）個人簡歷（29）致謝（30）

簡介：目的采用成熟的病毒裂解純化疫苗制備技術(shù)，以人類呼吸道合胞病毒HUMANRESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，HRSV野毒株中能誘導保護性抗體的F蛋白和G蛋白為目標蛋白，研究有效裂解HRSV和純化目標蛋白的方案。為獲得免疫原性強、安全性高的HRSV裂解純化亞單位疫苗做前期基礎(chǔ)研究。方法本研究分為兩部分，一部分是通過SDSPAGE蛋白電泳觀察TRITONX100、NP40等幾種常見裂解劑，在時間、溫度和濃度三種因素改變的情況下對HRSV裂解的效果，以篩選出針對目標蛋白裂解效果較好的裂解方案，并對這些裂解方案裂解過的樣品進行蛋白免疫印跡WESTERNBLOT實驗和透射電鏡檢查。另一部分是以蔗糖密度梯度離心法對裂解后的樣品進行目標蛋白的純化。摸索這種方法下，針對目標蛋白較佳的純化條件。繼而純化出一定量的目標蛋白并免疫小鼠，一月后處死采血，再進行中和實驗驗證我們純化出的目標蛋白的免疫原性和檢測其抗體效價。結(jié)果4％的去氧膽酸鈉37℃作用樣品2H、2％的NP4037℃作用樣品2H及1％TRITONX100作用90MIN對HRSV的裂解效果較好，其中前兩者均可在電泳圖上找到63KD和32KD的目標蛋白，且條帶清晰。1％TRITONX1004℃作用90MIN的HRSV樣品雖然未能在電泳圖上觀察到32KD的目標蛋白，但63KD的目標條帶清晰粗大，有利于此目標條帶的純化。電鏡結(jié)果顯示它們均對HRSV進行了有效的裂解。WESTERNBLOT實驗均可識別此三種裂解方案裂解后的樣品63KD處的蛋白條帶。在對兩個目標蛋白的純化條件的摸索中，我們發(fā)現(xiàn)應(yīng)用梯度為10％、15％、20％、25％和50％的不連續(xù)蔗糖密度梯度離心法，4℃、40000RPM離心16H對63KD的目標蛋白純化效果好，三種裂解方案裂解后的63KD的目標蛋白在15％和20％兩個蔗糖梯度層均有層積，后續(xù)動物實驗及中和實驗提示，在20％處的63KD的目標蛋白具有一定的免疫原性，抗體效價的平均值為14。結(jié)論實驗中，篩選出三種較理想的裂解方案，并純化出一定量63KD的目標蛋白作為實驗性疫苗，動物實驗結(jié)果顯示，這種方法純化的實驗性疫苗可誘導機體產(chǎn)生機體免疫應(yīng)答，中和抗體效價為1418左右。為進一步研制HRSV亞單位疫苗積累了一定的原始資料。

簡介：目的了解貴陽地區(qū)兒童哮喘控制現(xiàn)狀及患兒家長對疾病的認知水平，對近年推廣規(guī)范化治療的效果進行評估，并分析兒童哮喘控制的影響因素，為進一步加強哮喘規(guī)范化治療和管理提供依據(jù)。方法隨機選取在貴陽醫(yī)學院附屬醫(yī)院兒科哮喘門診就診的400例年齡1～14歲、病程超過12個月的哮喘兒童，對其家長就哮喘控制狀況及疾病認知水平進行問卷調(diào)查，并對可能影響哮喘控制的相關(guān)因素進行分析。結(jié)果1在過去12個月內(nèi)，725％的患兒有過哮喘發(fā)作，355％的患兒有過因哮喘發(fā)作的急診治療，178％的患兒有過因哮喘發(fā)作導致的住院治療。2615的家長認識到哮喘的本質(zhì)是氣道慢性炎癥性疾病；723的家長認為哮喘是可以控制的；770的家長認為哮喘需要長期規(guī)律用藥；868的家長認為長期吸入激素對孩子的生長發(fā)育有影響在患兒哮喘急性發(fā)作時373的家長會加用抗生素，只有265的家長選擇速效Β2受體激動劑；870的家長認為患兒哮喘控制狀態(tài)下可以參加運動；只有355的家長堅持給患兒長期規(guī)范用藥；堅持定期帶孩子復診的僅有255。3家庭經(jīng)濟收入、家長學歷、家長認知水平、堅持規(guī)范用藥、堅持定期復診是患兒哮喘控制的保護因素；個人過敏史、哮喘家族史、被動吸煙史是患兒哮喘控制的危險因素。結(jié)論1貴陽地區(qū)哮喘患兒病情整體控制狀況并不理想，與全國城市平均水平相比還存在一定差距；（2）貴陽地區(qū)哮喘患兒家長對疾病的認知水平較低，在兒童哮喘的治療和管理方面還存在很多疑惑和誤區(qū)；（3）家庭及社會因素、不良環(huán)境的接觸、治療依從性等是影響哮喘控制的主要因素。認識并改善影響因素，有助于提高哮喘控制水平。

簡介：天津醫(yī)科大學碩士學位論文基因芯片檢測人乳頭瘤病毒在子宮內(nèi)膜癌組織中的感染狀況姓名梁茜申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師李建文20100501天津醫(yī)科大學碩士學位論文ABSTRACTABSTRACT0BJECTIVETOSTUDYONTHERELATIONSBETWEENENDOMETRIALCARCINOMA、ENDOMETRIALWHICHWASABNORMALBLEEDING、NORMALENDOMETRIUMSANDINFECTIONSOFHPV．METHODSUSINGNESTEDPCRTECHNOLOGYANDGENECHIPTECHNOLOGYWHICHIS11IGHFLUXANDTHESPECIFICITYTOTEST15TYPESOFHPV．THESURVEYWASCONDUCTEDFOR40PATIENTSOFPARAFFIN．EMBEDDEDTISSUESFROMENDOMETRIALCARCINOMATHEHISTOPATHOLOGICTYPESOFENDOMETRIALCARCINOMASWERECLASSIFIEDAS37CASESOFENDOMETRIOIDCARCINOMA、2CASESOFADENOCARCINOMAWITHSQUAMOUSMETAPLASIA、1CASEOFMUCINOUSADENOCARCINOMAAND1CASEOFUNDIFFERENTIATEDCARCINOMA,ANDTHEHISTOPATHOLOGICGRADESWEREGROUPEDUNDER24CASESOFWELLDIFFERENTIATED、10CASESOFMODERATELYDIFFERENTIATED，AND6CASESOFPOORLYORNOTDIFFERENTIATED．THETTTMOURSTAGEWASDEFINEDACCORDINGTOFIGOSTAGINGSYSTEM19CASESOFSTAGEI、5CASESOFSTAGEII、4CASESOFSTAGEIIIAND2CASESOFSTAGEIV．AND20ENDOMETRIALHYPERPLASIASPATIENTSOFVARIOUSFORMSSIMPLE，COMPLEX，ANDATYPICAL．NORMALENDOMETRIUMSFROM20PATIENTSWEREASCONTR01．RESULTSHPVWASDETECTEDIN2OFSPECIMENSAMONGTHE40CASESOFENDOMETRIALCARCINOMA．POSITIVERATESOFENDOMETRIALCARCINOMATHATWASINFECTEDOFHPVWERE5．0％2／40．BOTHPOSITIVEFORHPV6．HPVWASDETECTEDIN3OFSPECIMENSAMONGTHEENDOMETRIUMSWHICHWASABNORMALBLEEDING，POSITIVEFORHPV6、HPV11ANDHPV6／11．POSITIVERATESOFENDOMETRIALCARCINOMATHATWASINFCCTEDOFHPVWERE15．O％3／20．NOHPVDNAWASDETECTEDINTHECONTROLS0／20．CONCLUSIONSHPVBEINGHARDLYDETECTEDINTHEENDOMETRIUMINDICATESTHATTHEENDOMETRIUMISNOTTHESUITABLEHOSTOFHPVREPLICATIONANDMATURATION．HPVINFECTIONSEEMSNOTRELATEDTOPATHOGENESISANDTRANSFORMATIONPROCESSOFENDOMETRIALCARCINOMA．THEENDOMETRIUMOFABNORMALBLEEDINGSEEMSNOTRELATEDHPVINFECTION．HPVINFECTIONSEEMSNOTRELATEDTOPATHOGENESISANDTRANSFORMATIONPROCESSOFENDOMETRIALCARCINOMA．KEYWORDSENDOMETRIALCARCINOMA；HUMANPAPILLOMAVIRUSHPV；POLYMERASECHAINREACTIONPCR；GENECHIPLL

簡介：目的了解長沙市小學生體形自我認知情況及相關(guān)的飲食行為和體力活動現(xiàn)狀，為制定兒童肥胖的營養(yǎng)干預(yù)措施提供科學依據(jù)。方法采用多階段分層隨機整群抽樣方法，抽取長沙市6區(qū)兩縣16所小學2224名4～6年級的小學生及其家長作為研究對象。通過體格測量和問卷調(diào)查的方式，收集學生身高體重、家庭一般人口學特征、學生及家長體形認知、體形滿意度及相關(guān)飲食行為和體力活動現(xiàn)狀等資料。根據(jù)測量所得身高體重，按照中國肥胖工作組制定的超重肥胖篩查標準對學生體形進行判定，將學生及其家長的認知體形、理想體形與學生實際體形進行對比，同時對與體形、體形認知、體形滿意度可能相關(guān)的飲食行為和體力活動進行相關(guān)性分析。采用EPIDATA31建立數(shù)據(jù)庫，運用SPSS180軟件包進行統(tǒng)計分析。結(jié)果1學生超重、肥胖現(xiàn)狀長沙市4～6年級小學生超重、肥胖的檢出率分別為117％和68％，其中男生超重、肥胖的檢出率分別為162％、94％，女生超重、肥胖的檢出率為65％、39％?？ǚ椒治鼋Y(jié)果顯示，獨生子女超重肥胖檢出率均高于非獨生子女，單親家庭學生高于非單親家庭學生、城區(qū)學生高于鄉(xiāng)鎮(zhèn)學生。2體形認知現(xiàn)狀長沙市4～6年級小學生普遍存在體形認知偏差，以低估自我體形為主?？倶颖救巳褐校J為自己體形消瘦、合適、超重和肥胖的學生比例分別為275％、585％、111％、29％。分別有23％、570％的超重男生和17％、492％的超重女生自認體形為消瘦和合適?？倶颖救巳褐?，有48％的未超重學生高估自我體形，女生63％高估的比例大于男生32％，差異有統(tǒng)計學意義X28842，P0003不同性別、是否城區(qū)學生、是否獨生子女及是否單親家庭之間，小學生的體形認知準確率差異均有統(tǒng)計學意義此外，不同BMI體重類別組對自我體形認知的準確率差異有統(tǒng)計學意義肥胖組＜超重組＜未超重組。未超重組中，317％的女生希望自己再瘦一點347％的男生希望自己更胖一點。家長普遍低估了學生的體形，對學生體形認知與實際體形不符。超重男生的家長中分別有35％和406％認為其體形消瘦和合適，超重女生的家長中有386％認為其體形合適。3體形滿意度現(xiàn)狀未超重組、超重組和肥胖組學生中，分別有160％、371％、695％的男生對自我體形不滿意，分別有251％、625％、861％的女生對自我體形不滿意。無序多分類LOGISTIC回歸分析結(jié)果顯示，高年級學生1320、肥胖學生13944、高估自我體形的學生8416，95％以及女生（1654，）更容易出現(xiàn)對自我體形的不滿。4飲食行為與體力活動現(xiàn)狀長沙市4～6年級小學生存在一定程度的不良飲食行為，超過20％的學生沒有做到每天吃早餐，一半以上的學生用餐不規(guī)律，學生中普遍存在進食速度過快、方便面代替正餐、吃飯時看電視、挑食偏食等不良飲食行為。小學生缺乏適當?shù)捏w力活動。494％的學生參加體力活動時間少于每日一小時的推薦標準，僅有641％的學生表示喜歡參加體力活動。5體形認知對體重管理行為的影響調(diào)整其他影響因素之后，LOGISTIC回歸分析顯示，未超重組學生采取不吃早餐（4045）、不吃晚餐（4051）、不吃肉2699的體重管理方式與高估自我體形有關(guān)。超重肥胖組學生采取吃補品（8167）和增加食物攝入5016的管理體重方式與低估自我體形有關(guān)。結(jié)論1本次調(diào)查中，長沙市4～6年級小學生超重檢出率為117％，肥胖檢出率為68％，小學生對自我體形及家長對學生體形的認知均存在偏差，主要以低估體形為主。2本次調(diào)查中，長沙市4～6年級小學生普遍存在對自我體形不滿，影響學生對自我體形不滿意程度的因素有年級、體形、體形認知偏差以及性別。3小學生體形自我認知偏差是學生在體重管理中采取不良飲食行為、忽視體力活動的危險因素。在防治兒童肥胖的營養(yǎng)干預(yù)中，普及體形的正確認知至關(guān)重要。

簡介：目的①開展輕度認知障礙中醫(yī)證素和中醫(yī)證型的規(guī)范化研究及輕度認知障礙中醫(yī)證素診斷評分表的研制。②探究輕度認知障礙中醫(yī)證素及中醫(yī)證型與輕度認知障礙認知功能水平MMSE、MOCA、AVLT、CDT各神經(jīng)心理學量表的相關(guān)關(guān)系。方法運用輕度認知障礙中醫(yī)四診信息臨床調(diào)查評分問卷，開展多中心458例受試者MCI中醫(yī)四診信息臨床調(diào)查，并將資料信息輸入數(shù)據(jù)庫進行聚類分析和因子分析，研究MCI中醫(yī)證素和證候類型，統(tǒng)計各證素和證型所屬中醫(yī)四診信息（即癥狀、體征和舌脈）的權(quán)重系數(shù)，獲取各證素和證型的主次癥，建立輕度認知障礙中醫(yī)證素積分模型和中醫(yī)證型積分模型，并在此基礎(chǔ)上初步研制輕度認知障礙中醫(yī)證素診斷評分表。與此同時，運用MMSE、MOCA、AVLT、CDT（4分評分法、30分評分法）對458例MCI受試患者進行測試評分。將MCI中醫(yī)證素及其證型的評分，分別與MMSE、MOCA、AVLT、CDT（4分評分法、30分評分法）及分測驗評分進行偏相關(guān)分析。結(jié)果①本研究所得，輕度認知障礙的證候要素為腎、心、肝、氣虛、血虛、陰虛、陽虛、痰濁、血瘀等共計9項，其中MCI主要病位證素為腎8930％9742％、心7817％7577％、肝6769％8454％主要病性證素為痰濁5546％7577％、血瘀4498％5928％、氣虛5175％4124％研究得到輕度認知障礙證素所屬癥狀的主次癥及其權(quán)重（具體見表31）。②結(jié)合研究所得輕度認知障礙證素、證素所屬癥狀的主次癥及其權(quán)重，建立MCI各中醫(yī)證素積分模型，初步研制輕度認知障礙中醫(yī)證素診斷評分表見表31。③MCI中醫(yī)證型為腎精虧虛證、腎氣虛證、腎陰虛證、腎陽虛證、心氣虛證、心血虛證、心陰虛證、心陽虛證、心脈瘀阻證、痰蒙心竅證、血虛證、肝郁證、腎（精氣）虛血瘀證、腎（精氣）虛痰濁證、痰瘀互阻證、心氣血虧虛證、心腎不交證等共計16項。其中MCI主要中醫(yī)證型為腎精虧虛證8930％9742％、痰蒙心竅證5284％6649％、心氣虛證4236％4381％、心脈瘀阻證4236％4588％、痰瘀互阻證3996％5979％。研究獲得輕度認知障礙中醫(yī)各證型所屬癥狀的主次癥及其權(quán)重，建立中醫(yī)各證型所屬積分模型（具體見研究結(jié)果223）。④MOCA評分與證素陰虛評分呈負相關(guān)（R0262，P0047），其分測驗命名功能評分與證素腎（R0149，P0041）、證素陰虛（R0357，P0006）評分呈負相關(guān)，注意力評分與證素腎（R0189，P0009）、證素肝（R0277，P0000）、證素陰虛（R0331，P0011）評分呈負相關(guān)，語言功能評分與證素氣虛評分呈負相關(guān)（R0344，P0002），抽象思維功能評分與證素陽虛評分呈負相關(guān)（R0489，P0010），視空間及執(zhí)行功能、延遲回憶、定向力評分與MCI各中醫(yī)證素評分之間無明顯相關(guān)性（P＞005）AVLT量表評分與證素氣虛評分呈負相關(guān)R0252，P0025，其分測驗短延遲回憶評分與證素心（R0219，P0052）評分呈負相關(guān)，長延遲回憶評分與證素氣虛評分（R0306，P0006）呈負相關(guān)，短時回憶評分與MCI各中醫(yī)證素評分之間無明顯相關(guān)性P＞005CDT（30分評分法）評分與證素陰虛評分呈負相關(guān)R0272，P0039，CDT30分A、CDT30分C評分與MCI各中醫(yī)證素評分之間無明顯相關(guān)性P＞005CDT（4分評分法）評分與證素陽虛評分呈負相關(guān)（R0395，P0041）MMSE量表評分與MCI各中醫(yī)證素評分之間無明顯相關(guān)性（P＞005）⑤MOCA量表評分與心氣虛虧虛證（R0611，P0016）、肝郁證R0305，P0030評分呈負相關(guān)，命名功能評分與心陰虛證（R0351，P0018）、肝郁證（R0352，P0011）評分呈負相關(guān)，注意力評分與腎陰虛證（R0276，P0040）、腎陽虛證（R0464，P0017）、腎氣虛證（R0247，P0035）、腎虛血瘀證（R0310，P0025）、腎虛痰濁證（R0290，P0021）、心陰虛證（R0405，P0006）、心腎不交證（R0482，P0001）、肝郁證（R0300，P0033）評分呈負相關(guān)，抽象思維功能評分與心氣虛證評分呈負相關(guān)（R0267，P0045），延遲回憶評分與心氣血虧虛證評分（R0656，P0008）呈負相關(guān)，視空間及執(zhí)行功能、語言功能、定向力評分與MCI各中醫(yī)證型評分之間無明顯相關(guān)性P＞005AVLT量表評分與心陽虛評分呈負相關(guān)R0500，P0018，短延遲回憶評分與心陽虛證評分呈負相關(guān)（R0527，P0012），長延遲回憶評分與心陽虛證（R0409，P0058）評分呈負相關(guān)，短時回憶評分與各證型之間無明顯相關(guān)性P＞005CDT30分評分法評分與心陰虛證評分呈負相關(guān)（R0345，P0020），CDT30分C評分與心陰虛證（R0349，P0019）評分呈負相關(guān)，CDT30分A評分與MCI各中醫(yī)證型評分之間無明顯相關(guān)性（P＞005）CDT（4分評分法）評分與心氣血虧虛證（R0537，P0039）評分呈負相關(guān)MMSE量表與肝郁證（R0239，P0008）評分呈負相關(guān)。結(jié)論①輕度認知障礙的證候要素為腎、心、氣虛、血虛、陰虛、肝、痰濁、陽虛、血瘀等共計9項，其中MCI主要病位證素為腎、心、肝，主要病性證素為痰濁、血瘀、氣虛。研究得到MCI中醫(yī)證型，其中腎精虧虛證、痰蒙心竅證、心氣虛證、心脈瘀阻證、痰瘀互阻證為MCI主要證型。研究明確了輕度認知障礙中醫(yī)證素和證型所屬癥狀的主次癥及其權(quán)重。②輕度認知障礙大部分中醫(yī)證素（如證素腎、肝、心、陰虛、陽虛等）和中醫(yī)證型（如腎精虧虛證、肝郁證、心陰虛證、心氣血虧虛證）與輕度認知障礙認知功能水平（MMSE、MOCA、AVLT、CDT各神經(jīng)心理學量表）存在負相關(guān)關(guān)系。