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簡介：目的包裝含小鼠FCΓRⅡB慢病毒表達(dá)載體，觀察其在小鼠B細(xì)胞表面的表達(dá)并研究其抑制性受體對MRLLPRSLE小鼠的作用研究。方法將慢病毒表達(dá)重組質(zhì)粒TREFCΓRⅡB、慢病毒調(diào)節(jié)質(zhì)粒TET分別與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，分別包裝表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒，分別測定表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒感染滴度。將MRLLPRSLE小鼠預(yù)防動物（周齡8周左右）40只隨機(jī)分成病毒液100UL組、病毒液200UL組、預(yù)防空病毒組（不含F(xiàn)CΓRIIB基因）、預(yù)防對照組（生理鹽水組）四組，每組10只，再將模型動物（周齡16周左右）組40只隨機(jī)分成病毒100UL組、200UL組、治療空病毒組（不含F(xiàn)CΓRIIB基因）和治療對照組（生理鹽水組），每組10只。通過尾靜脈注射將病毒液轉(zhuǎn)導(dǎo)到MRLLPRSLE小鼠體內(nèi)，連續(xù)注射四周，每周一次。注射完成后，觀察二周后提尾反射法收集小鼠尿液檢測小鼠尿蛋白，眼眶內(nèi)眥靜脈取血約500ΜL后檢測小鼠抗核抗體和抗雙鏈DNA含量，取血完成后處死小鼠，取各組小鼠新鮮脾臟組織進(jìn)行研磨、淋巴細(xì)胞分離后再磁珠分選檢測B細(xì)胞上FCΓRIIB基因的MRNA和蛋白的表達(dá)并做腎臟、淋巴結(jié)、肝臟的病理切片。同時各組的蛋白采用WESTERNBLOT法和磷酸化WESTERNBLOT，觀察B細(xì)胞通路上的BTK、SHIP1、PYN總蛋白和磷酸化蛋白的表達(dá)來研究其可能的機(jī)制。數(shù)據(jù)用SPSS160軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，組間比較采用T檢驗分析，P結(jié)果1表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒滴度均達(dá)106TUML。2MRLLPRSLEFCΓRⅡBMRNA和蛋白表達(dá)水平檢測結(jié)果預(yù)防和治療空病毒組與對照組相比無意義，病毒組（含100ΜL和200ΜL組）與空病毒組相比FCΓRⅡBMRNA和蛋白增加。3MRLLPRSLE小鼠尿蛋白、抗雙鏈DNA抗體含量檢測結(jié)果預(yù)防和治療空病毒組與對照組相比無意義，病毒組（含100ΜL和200ΜL組）與空病毒組相比尿蛋白、抗雙鏈DNA含量減少。41、對照組B細(xì)胞上的BTK、LYN與空病毒組相比無意義，預(yù)防病毒組中的BTK（含100ΜL和200ΜL組）與空病毒組相比蛋白含量明顯減少，P42、預(yù)防空病毒組BTK磷酸化、LYN磷酸化和SHIP1磷酸化水平與對照組比較沒有變化。預(yù)防病毒200ΜL組磷酸化BTK、磷酸化LYN和磷酸化SHIP1與空病毒組相比表達(dá)水平明顯減少，P5病理結(jié)果A腎臟HE染色顯示，預(yù)防組小鼠腎臟皮質(zhì)、髓質(zhì)內(nèi)廣泛性血管充血擴(kuò)張，周圍淋巴細(xì)胞浸潤；病變腎小球內(nèi)可見細(xì)胞數(shù)量增多，體積輕微增大或正常，部分腎小球周圍有淋巴細(xì)胞浸潤。治療組腎臟皮質(zhì)、髓質(zhì)內(nèi)廣泛性血管充血擴(kuò)張，尤其髓質(zhì)區(qū)和腎小球毛細(xì)血管較明顯，葉間動脈以及弓形動脈擴(kuò)張，官腔不整，周圍大量淋巴細(xì)胞浸潤；髓質(zhì)區(qū)彌漫性腎小球輕度增生性改變，病變腎小球內(nèi)可見細(xì)胞數(shù)量增多，體積輕微；小球周圍多量淋巴細(xì)胞浸潤，腎小球毛細(xì)血管團(tuán)萎縮，硬化。病毒預(yù)防組和治療組（100ΜL和200ΜL）較各自對照組淋巴細(xì)胞浸潤、彌漫性腎小球增生性改變較輕。B肝臟預(yù)防組小鼠肝細(xì)胞廣泛性胞漿疏松化，中央靜脈周圍多量淋巴細(xì)胞浸潤，部分區(qū)域中央靜脈和肝血竇擴(kuò)張；部分區(qū)域匯管區(qū)纖維組織增生，小血管擴(kuò)張并大量淋巴細(xì)胞浸潤。治療組小鼠肝細(xì)胞廣泛性胞漿疏松化，中央靜脈周圍大量淋巴細(xì)胞浸潤并分割肝小葉，部分區(qū)域中央靜脈和肝血竇擴(kuò)張，小血管擴(kuò)張并大量淋巴細(xì)胞浸潤，部分區(qū)域病變嚴(yán)重，肝小葉內(nèi)大量淋巴細(xì)胞浸潤并分割肝小葉，可見肝細(xì)胞點狀壞死，肝小葉幾乎被淋巴細(xì)胞取代，小葉結(jié)構(gòu)破壞。病毒預(yù)防組和治療組（100ΜL和200ΜL）較各自對照組淋巴細(xì)胞浸潤較輕。C淋巴結(jié)預(yù)防組小鼠淋巴結(jié)輕度增殖性改變，淋巴結(jié)固有結(jié)構(gòu)清晰，淋巴濾泡內(nèi)多量淋巴細(xì)胞，偶見生發(fā)中心；模型小鼠淋巴結(jié)以增殖性改變?yōu)橹?，主要表現(xiàn)為淋巴小結(jié)體積增大，淋巴濾泡增生，大量淋巴細(xì)胞增生，部分區(qū)域可見多量組織細(xì)胞增生，幾乎未見生發(fā)中心，以至于皮質(zhì)髓質(zhì)分界不清，嚴(yán)重病變可見淋巴結(jié)固有結(jié)構(gòu)消失。病毒預(yù)防組（100ΜL和200ΜL）較對照組增生性改變不明顯。病毒治療組（100ΜL和200ΜL）較對照組組織細(xì)胞增生較少，其中以200ΜL病毒注射組甚之。結(jié)論成功包裝了FCΓRⅡB慢病毒表達(dá)載體。通過轉(zhuǎn)染到MRLLPRSLE小鼠體內(nèi)表達(dá)的抑制性受體FCΓRⅡB延緩了系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠的病理發(fā)展過程上調(diào)B細(xì)胞上抑制性受體的表達(dá)可能是治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的一個新途徑。

簡介：目的在乙型肝炎病毒HBV的諸多傳播途徑中垂直傳播是十分重要的一種途徑而在垂直傳播中目前尚無有效預(yù)防措施的是宮內(nèi)傳播即HBV在孕期經(jīng)過胎盤感染胎兒造成這種情況的關(guān)鍵原因是宮內(nèi)傳播的機(jī)制還不清楚國內(nèi)外對這一問題的研究較少我室在十余年的時間內(nèi)從宏觀和微觀兩個方面對HBV宮內(nèi)傳播機(jī)制作了深入細(xì)致的研究方法①該研究以陜西省婦幼保健院連續(xù)41例血清乙型肝炎病毒表面抗原HBSAG陽性的產(chǎn)婦及其新生兒為研究對象7例血清HBSAG陰性的產(chǎn)婦及其新生兒為對照收集產(chǎn)婦肘靜脈血及新生兒的股靜脈血用ELISA法進(jìn)行HBSAG、HBEAG復(fù)檢同時收集胎盤組織以酶免疫組織化學(xué)法檢測乙型肝炎病毒感染的孕婦胎盤組織中的HBSAG②將乙型肝炎患者血清HBSAG、HBSAG、HBVDNA陽性、2﹪PEG、1﹪DMSO加入完人培養(yǎng)基中組成培養(yǎng)系統(tǒng)與HEPG2細(xì)胞共孵育24小時徹底洗滌后采用ELISA法檢測上清中的HBSAG、酶免疫組織化學(xué)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞中的HBSAGPCR法檢測細(xì)胞內(nèi)HBVDNA等方法檢測感染情況同時設(shè)立多組不同的對照③用HBV體外感染HEPG2細(xì)胞同樣的方法進(jìn)行HBV體外感染人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的實驗與檢測使用透射電鏡法膠體金標(biāo)免疫電鏡法對滋養(yǎng)層細(xì)胞感染情況進(jìn)行驗證結(jié)論綜合以文獻(xiàn)報道和該研究的結(jié)果強(qiáng)以看出HBV在體情況下確能夠感染滋養(yǎng)層細(xì)胞而在離體培養(yǎng)的情況下滋養(yǎng)層細(xì)胞在乙型肝炎患者血清、2﹪PCG、1﹪DMSO、或不加入DMSO加入完全培養(yǎng)基中組成的培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)24小時也可能形成能夠檢測到的感染但該研究僅為一初步研究由于人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞為非肝源性細(xì)胞所以對其與HBV的相互作用情況尚需進(jìn)一步驗證并加以深入研究

簡介：ATHESISDISSERTATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTERTHEAPPLICATIONOFSTRENGTHENINGTHEFUNCTIONTRAININGINLMPROVLNGCOGNITIVEDYSTIMCTIONIN19ATLENTSWITHCEREBRALL一一，●，’●1NIARCTLONBVZIHUIFENG一SUPERVISORASSOCIATEPROFWEIHONGZHANGNURSINGNURSINGCOLLEGEOFZHENGZHOUUNIVERSITYZHENGZHOUMAY24，2014摘要強(qiáng)化功能訓(xùn)練在改善腦梗死患者認(rèn)知功能障礙當(dāng)中的應(yīng)用研究生封自慧導(dǎo)師張偉宏副教授鄭州450052中文摘要目的研究腦梗死后非癡呆認(rèn)知功能障礙患者所患基礎(chǔ)疾病的相關(guān)資料，分析腦梗死后非癡呆認(rèn)知功能障礙患者的認(rèn)知功能受損特點，探討由護(hù)理人員實施的強(qiáng)化認(rèn)知功能訓(xùn)練方法對腦梗死后非癡呆認(rèn)知功能患者的認(rèn)知功能和日常生活能力提高的臨床療效。方法選取2012年5月至2013年12月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年綜合二科住院，并經(jīng)CT或M砒檢查確認(rèn)的腦梗死患者104例，經(jīng)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)的篩選，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組52例和實驗組52例。兩組患者均接受常規(guī)肢體訓(xùn)練和健康知識的指導(dǎo)，實驗組同時接受護(hù)理人員根據(jù)患者的MOCA量表、MMSE量表和ADL量表的檢測結(jié)果，制定個性化的、時長12周的強(qiáng)化訓(xùn)練，并于訓(xùn)練結(jié)束后，對兩組患者進(jìn)行以上三個量表的再次檢測，所有數(shù)據(jù)均采用SPSS軟件包進(jìn)行處理分析。職里口木1訓(xùn)練前兩組患者基本情況的相關(guān)資料。本次研究調(diào)查了研究對象的平均住院天數(shù)、發(fā)病類型、發(fā)病部位以及常見危險因素的相關(guān)資料。對照組的平均住院天數(shù)為1425204天，實驗組為1376A195天，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義T1249，PO215。發(fā)病類型對照組腦梗死患者52例實驗組腦梗

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒導(dǎo)致子宮頸癌的分子生物學(xué)機(jī)制及其在免疫治療方面的應(yīng)用研究姓名徐茜申請學(xué)位級別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師馬丁20060301華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士畢業(yè)論文ABSTRACTOBJECTIVETOCONSTRUCTTHEBACULOVIRUSEXPRESSIONVECTORFORHUMANPAPILOMAVIRUSTYPE16L1GENEANDTRANSFORMTHEBACMIDTOINSECTSF9CELL1INETOEXPRESSHPVI6L1VIRUSLIKEPARTICALS．METHODSTHEHPV～16L1GENEWASAMPLIFLEDBYPCRANDCLONEDINTOPLASMIDPFASTHTB，ANDTHECOMBINANTPLASMIDPFASTHTBHPVL6L1WASTRANSFORMEDTOCOMPETENTCELISDHIOBAC．ATRANSFORMANTCONTAININGTHETARGETGENEWASOBTAINEDANDNAMEDASBACMIDHPVL6L1．A11THECLONINGSTEPSWEREELECTROPHORESEDINEBSTAINED1％AGAROSEGEL．AFTERTRANSFECTINGTHISTRANSFORMANTINTOSF9CELLS．ITSEXPRESSIONINSF9CELLSWASDETECTEDBYSDS～PAGEANDELECTRONMICROSCOPY．RESULTSTHEEXPERIMENTALRESULTSSHOWEDTHATTHERECOMBINANTBUCULOVIRUSWASOBTAINEDANDTHETRANSFORMANTBACMIDHPVL6LLVIRUSLIKEPARTICALSWEREEXPRESSEDININSECTSF9CELLS，THISRECOMBINANTTRANSFORMANTCANBEUSEDASTHEPROTEINACCESSEDHIGHBIOLOGICALEHARAETERISTICSFORTHEFUNCTIONALSTUDYONBACMIDHPVL6LIVIRUSLIKEPARTICALS．KEYWORDSHUMANPAPILLOMAVIRUSTYPE16VIRUSLIKEPARTICALSRACEINE高危型人乳頭瘤病毒HPV如16、18、33、31、58型感染是是富頸癌發(fā)生的主要致病因素，其中HPVL6型感染又占其中的半數(shù)以上，同時HPV感染可能是宮頸癌年輕化的原因。HPV感染的疾病逐步進(jìn)展到宮頸上皮內(nèi)高度病變和癌癥，需要一個漫長的過程8～15年，如果在此期間對其進(jìn)行干預(yù)，可以延緩和阻止病變的進(jìn)一步發(fā)展1。在桿狀病毒一昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的HPV16L1病毒樣顆粒同真正的病毒粒子大小相似，并有較好抗原性，故目前LL自身或L1和L2共同裝配成的VLPS是HPV預(yù)防性候選疫苗的研究熱點2。隨著研究的進(jìn)展，針對E區(qū)與L區(qū)的不同特點，又發(fā)展出了不同的疫苗3。3

簡介：目的為研究第三代復(fù)制依賴性腺病毒載體應(yīng)用于慢性疼痛基因治療的可行性，構(gòu)建第三代腺病毒生產(chǎn)體系中的輔助性腺病毒以及表達(dá)CRE重組酶的真核表達(dá)載體，并對CRE切除輔助病毒包裝信號的有效性進(jìn)行分析。方法以重疊延伸PCR及酶切連接的方法將同向的兩個LOXP位點和綠色熒光蛋白表達(dá)盒依次克隆入PSHUTTLE穿梭載體質(zhì)粒，按照ADEASYTM系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)實驗方法進(jìn)行輔助病毒的生產(chǎn)和擴(kuò)增。同時構(gòu)建PCDNA31CRE真核表達(dá)載體，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，通過PCR和流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的CRE重組酶對其后感染的輔助病毒包裝信號的切除作用。結(jié)果構(gòu)建的輔助性腺病毒能夠在HEK293細(xì)胞內(nèi)包裝和擴(kuò)增，其包裝信號可以被細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的CRE酶有效切除。結(jié)論成功構(gòu)建了輔助性腺病毒和PCDNA31CRE真核表達(dá)載體，為第三代腺病毒的生產(chǎn)和慢性疼痛基因治療的研究奠定了實驗基礎(chǔ)。

簡介：點擊查看更多Hyper-IL-6重組慢病毒的構(gòu)建及其促肝細(xì)胞增殖的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的口服核苷（酸）類似物NUCLEOTSIDEANALOGS，NAS是目前持久抑制乙型肝炎病毒（HBV）復(fù)制的主要藥物，NAS治療后乙型肝炎復(fù)發(fā)的問題越來越引起廣泛重視。HBV在體內(nèi)以準(zhǔn)種的形式分布和存在，準(zhǔn)種多態(tài)性對停藥后復(fù)發(fā)患者再治療的療效及病情轉(zhuǎn)歸有重要影響。目前，對NAS治療停藥后復(fù)發(fā)再治療的研究主要集中于拉米夫定，對于阿德福韋酯等其他NAS的研究較少。國內(nèi)臨床研究僅提示使用阿德福韋酯規(guī)范化治療停藥復(fù)發(fā)的慢乙肝患者再次使用阿德福韋酯仍然有效，而對于復(fù)發(fā)患者體內(nèi)乙肝病毒準(zhǔn)種構(gòu)成的研究則未見報道。本研究以單用阿德福韋酯規(guī)范化治療停藥復(fù)發(fā)的慢性乙型肝炎患者和未經(jīng)過抗病毒治療的慢性乙型肝炎患者為研究對象，全面分析阿德福韋酯規(guī)范化治療停藥后復(fù)發(fā)患者體內(nèi)病毒準(zhǔn)種的準(zhǔn)確構(gòu)成對比停藥復(fù)發(fā)患者與未抗病毒患者體內(nèi)病毒準(zhǔn)種構(gòu)成的差異，為阿德福韋酯規(guī)范化治療停藥后復(fù)發(fā)患者的再治療提供病毒學(xué)依據(jù)。方法收集阿德福韋酯規(guī)范化治療停藥后復(fù)發(fā)的慢乙肝患者及未抗病毒治療的慢乙肝患者的血清，提取HBVDNA采用巢式PCR擴(kuò)增HBV多聚酶的逆轉(zhuǎn)錄區(qū)REVERSETRANIONRT基因，一部分PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至上海LIFETECHNOLOGY公司直接測序，另一部分PCR擴(kuò)增產(chǎn)物繼續(xù)行瓊脂糖凝膠水平電泳，以分離目的DNA片段膠回收純化目的DNA片段，將其連接到T載體上，轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的TOP10大腸桿菌中XGALIPTGAMPLB瓊脂平板篩選陽性克隆，每個樣本挑取30個陽性克隆，過夜培養(yǎng)后的菌液送至上海LIFETECHNOLOGY公司測定T載體上插入的目的DNA片段序列測序結(jié)果由DNASTARSEQMAN拼接去除無關(guān)序列，以進(jìn)行進(jìn)一步的序列分析，包括去除載體序列、多序列比對、找出耐藥突變位點、計算準(zhǔn)種復(fù)雜度和準(zhǔn)種多樣性、進(jìn)化樹分析等采用SPSS190對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果1停藥復(fù)發(fā)組N25與未抗病毒組患者N16的乙肝病毒準(zhǔn)種中野生株的比例均大于9333％，野生株均為優(yōu)勢株。停藥復(fù)發(fā)組中含有耐藥突變的克隆與野生克隆之比為10740，未抗病毒組中含有耐藥突變的序列與野生序列之比為8472，卡方檢驗得出P＞005，兩組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。2停藥復(fù)發(fā)組與未抗病毒組的準(zhǔn)種復(fù)雜度SN分別為09740044和09220081，P＞005，兩組間準(zhǔn)種復(fù)雜度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。停藥復(fù)發(fā)組與未抗病毒組的準(zhǔn)種多樣性D、DS、DN比較，P值分別為0171、0237、0197，均大于005，兩組間準(zhǔn)種多樣性差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3對慢性乙型肝炎患者的準(zhǔn)種復(fù)雜度及準(zhǔn)種多樣性D、DS、DN與血HBVDNA水平進(jìn)行SPEARMAN秩相關(guān)分析，結(jié)果顯示準(zhǔn)種復(fù)雜度及準(zhǔn)種多樣性與血HBVDNA水平無相關(guān)性。4所有樣本中檢測到的已知耐藥突變位點有耐恩替卡韋的RTI169T、RTS202I、RTM250V耐拉米夫定的RTV173L、RTL180M、RTM204IV，耐替比夫定的RTM204I，耐阿德福韋酯的RTA181V，未檢測到RTT184G、RTN236T突變。在未抗病毒組的患者的血清中也能檢測到如下已知的耐藥突變RTI169V、RTA181V、RTS202I、RTL180M、RTM204IV。僅在未抗病毒組患者的血清中檢測到1個含有阿德福韋酯耐藥突變RTA181V的克隆。5巢式PCR擴(kuò)增的RT基因直接測序的結(jié)果中未發(fā)現(xiàn)已知耐藥突變位點的存在，均為野生株序列而巢式PCR擴(kuò)增RT基因TA克隆后測序的結(jié)果中發(fā)現(xiàn)上述多種已知耐藥突變的存在。6停藥復(fù)發(fā)組患者與未抗病毒組患者在進(jìn)化樹中并無明顯聚集特征，序列間遺傳距離相近，均小于004。結(jié)論1使用阿德福韋酯規(guī)范化治療后停藥復(fù)發(fā)的慢乙肝患者體內(nèi)準(zhǔn)種中的優(yōu)勢株仍為野生株，與未抗病毒治療的慢乙肝患者在準(zhǔn)種復(fù)雜度和多樣性上并無統(tǒng)計學(xué)差異。停藥復(fù)發(fā)患者再次使用阿德福韋酯治療仍然有效。2未行任何抗病毒治療的慢性乙型肝炎患者體內(nèi)仍然存在耐藥突變株TA克隆后測序與直接測序相比能更好的了解體內(nèi)病毒的組成及是否存在耐藥突變。

簡介：點擊查看更多乙型肝炎病毒preS-S蛋白及C啟動子GC富含區(qū)在轉(zhuǎn)錄和復(fù)制中的作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：手足口病是兒童中常見的腸道病毒感染性疾病腸道病毒71型EV71和柯薩奇病毒A組16型COXA16是其主要病原。手足口病的傳染主要通過糞口和口口途徑其中接觸感染者糞便污染的水、食物及土壤可以導(dǎo)致糞口傳播。水是生命之源由于干凈安全飲用水的缺乏世界上每年都有大量人群發(fā)生疾病和死亡。近年來EV71的流行在亞太地區(qū)呈上升趨勢甚至引起嚴(yán)重中樞感染或死亡引起人們的密切關(guān)注。傳統(tǒng)的檢測手足口病病原的方法通常需要57D才能完成而且操作繁瑣、靈敏度較低不能滿足臨床上快速、靈敏的檢測需要。因此建立糞便及飲用水源水中手足口病病原快速、靈敏的檢驗方法對疾病的預(yù)防和輔助檢測、評估水源衛(wèi)生質(zhì)量和環(huán)境衛(wèi)生狀況具有重要的實用價值和現(xiàn)實意義。目的建立并優(yōu)化EV71和COXA16的LAMP檢測體系應(yīng)用于手足口病的病原檢測。建立EV71和COXA16的實時RTLAMP檢測方法并定量檢測天津市飲用水源水樣品。方法1、本研究基于EV71和COXA16病毒基因組VP1區(qū)利用軟件設(shè)計出LAMP反應(yīng)的外引物和內(nèi)引物。并對反應(yīng)溫度、鎂離子濃度、甜菜堿濃度、DNTPS濃度等擴(kuò)增條件進(jìn)行優(yōu)化。LAMP反應(yīng)的總反應(yīng)體系為25ΜLEV71和COXA16反應(yīng)混合物分別在62℃和63℃孵育60MIN然后在80℃加熱10MIN終止反應(yīng)。LAMP反應(yīng)結(jié)束后通過以下幾種方法判斷擴(kuò)增是否發(fā)生一是肉眼觀察反應(yīng)管的混濁度或向反應(yīng)管中加入SYBRGREENI型染料后觀察反應(yīng)管顏色的變化二是通過瓊脂糖凝膠電泳檢測此外也可通過酶切鑒定LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物。對6株腸道病毒分別進(jìn)行了LAMP反應(yīng)來驗證引物的特異性構(gòu)建EV71和COXA16標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒模板梯度稀釋后驗證LAMP反應(yīng)的靈敏性。2、采集60例天津地區(qū)手足口病流行期間手足口病患兒的糞便標(biāo)本分別用EV71和COXA16的特異性引物對分離到的病毒RNA進(jìn)行LAMP及PCR檢測。3、本研究于2010年1月至2010年11月采集18個天津市飲用水源水樣品。用超濾離心管濃縮500ML水樣提取總RNA。實時RTLAMP分別檢測飲用水源水中的EV71和COXA16。結(jié)果1、該方法對EV71和COXA16的檢測有高度的特異性與甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇B3、柯薩奇B5、埃可30及柯薩奇A16腸道病毒71型等病毒均無交叉反應(yīng)。LAMP檢測COXA16的靈敏性比傳統(tǒng)的PCR檢測方法高100倍檢測EV71的靈敏性比傳統(tǒng)的PCR檢測方法高10倍。2、LAMP檢測EV71的檢出率3160517％高于PCR276045％LAMP檢測COXA16的檢出率與PCR相當(dāng)276045％。說明這次手足口病流行的主要病原是EV71同時存在COXA16的散發(fā)。通過兩種方法的比較可知LAMP比PCR更快速、靈敏有著更為廣泛的發(fā)展前景。3、超濾離心管濃縮病毒的回收率為3483％。濁度儀實時RTLAMP結(jié)果顯示天津市飲用水源水中的EV71COXA16病毒濃度大約分別為0至19106COPIESL1和0至54105COPIESL1。結(jié)論本研究建立的LAMP檢測EV71COXA16的方法具有特異性好、敏感性高、節(jié)省時間的特點并成功地應(yīng)用于糞便及飲用水源水中EV71COXA16的檢測。

簡介：丙型肝炎病毒（HEPATITISCVIRUS，HCV）感染而引起的丙型肝炎現(xiàn)已呈全球分布，將近18億人為丙型肝炎的感染者，約占世界人口的3％，我國的感染率約為32％。目前采用的第三代間接ELISA檢測方法由于其在方法學(xué)上的固有缺陷，容易造成假陽性檢測結(jié)果和漏檢發(fā)展雙抗原夾心ELISA法檢測試劑是試劑發(fā)展的方向，由于HCV抗原的分子量相對較小，用酶來對HCV抗原直接標(biāo)記時，極易造成空間位阻，使抗體與抗原的進(jìn)一步結(jié)合受到較大的抑制，所以對HCV抗原的標(biāo)記是建立抗丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心ELISA檢測法的主要難點，也是目前國內(nèi)外該領(lǐng)域中研究的熱點。本研究通過生物素親和素系統(tǒng)的放大效應(yīng)來減少抗原標(biāo)記時的空間位阻，建立抗HCV抗體的雙抗原夾心ELISA檢測方法。利用實驗室已經(jīng)構(gòu)建好的質(zhì)粒載體，表達(dá)并純化出夾心ELISA法所用的抗原，將抗原偶聯(lián)到活化的長臂生物素上，制各成長臂生物素化的丙肝抗原，作為夾心抗原，用辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親合素作為酶結(jié)合物，利用辣根過氧化物酶催化底物進(jìn)行顯色，建立雙抗原夾心檢測法。采用本研究建立的雙抗原夾心法與對照試劑平行檢測500份臨床標(biāo)本，對檢測結(jié)果不一致的樣品采用HCVRNA定量檢測試劑盒進(jìn)行確定驗證。結(jié)果顯示檢測結(jié)果一致的樣品有493份，其中包括48份陽性樣品和445份陰性樣品，檢測結(jié)果不一致的樣品有7份，其中間接法陽性而夾心法陰性的有4份，HCVRNA檢測均為陰性夾心法陽性而間接法陰性的有3份，HCVRNA檢測陽性的有2份。經(jīng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計，本研究建立的雙抗原夾心法與間接法的特異性分別為9978％、9889％，靈敏度分別為100％、96％。表明該研究建立的雙抗原夾心法的靈敏度和特異性均優(yōu)于間接法，值得進(jìn)一步深入研究。

簡介：基因治療在理論上能治愈遺傳性疾病血友病B是一種凝血因子IXHFIX基因缺陷引起的單基因出血性疾病HFIX的表達(dá)不需要精確地調(diào)控少量提高即可改善患者的出血癥狀已證實有許多細(xì)胞能分泌具有生物學(xué)活性的HFIX因此許多學(xué)者選擇它作為基因治療的首選疾病開發(fā)了各種載體用于血友病B的基因治療基因治療的關(guān)鍵在于載體最為常用的是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體RV盡管RV具有高效轉(zhuǎn)移、能整合的優(yōu)點但它不能感染非分裂細(xì)胞且隨機(jī)整合有可能引起插入突變使人們對它的安全性心存顧慮重組腺相關(guān)病毒RAAV具有安全性好、宿主范圍廣轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較高長期穩(wěn)定表達(dá)可轉(zhuǎn)導(dǎo)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞的特點成為基因治療的熱點中國病毒基因工程國家重點試驗室制備和純化的高滴度RAAV2HFIX已在骨骼肌細(xì)胞等多種細(xì)胞獲得較高表達(dá)成為該實驗選用的載體靶細(xì)胞的選擇對HFIX的表達(dá)極其重要自從KOEBERL第一次在動物實驗中證實RAAV可介導(dǎo)HFIX在肝臟中表達(dá)人們采用各種靶細(xì)胞如肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞等進(jìn)行了一系列實驗研究但這些終末分化細(xì)胞存在著分泌量低表達(dá)不穩(wěn)定需要反復(fù)治療及有創(chuàng)性治療對血友病患者不利等缺點造血干祖細(xì)胞HSPC具有自我復(fù)制、定向分化和強(qiáng)大的擴(kuò)增潛能分泌的HFIX直接入血而且體外培養(yǎng)與移植技術(shù)成熟是基因治療理想的靶細(xì)胞如果能將RAAV載體和HSPC的優(yōu)勢結(jié)合起來將HFIX通過RAAV成功地轉(zhuǎn)導(dǎo)入HSPC隨之表達(dá)于各系子代細(xì)胞中有望得到安全的、穩(wěn)定的、方便的一次性治療的效果

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文流感病毒對嗅上皮影響的實驗研究姓名陳志宏申請學(xué)位級別博士專業(yè)耳鼻咽喉科指導(dǎo)教師倪道鳳20040401中崮協(xié)和醫(yī)科大學(xué)『_I國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文KDKILODALTON千道爾頓NBT／BCLPNITROBLUETETRAZOLIUM／氮藍(lán)四唑／X磷酸NNOSNO0DE5BROMO4CHLORO3INDOLYLPHOSPHATEPTOLUIDINETNERVALNITRIDEOXIDESYNTHASE神經(jīng)型一氧化氮合酶NITRIDEOXIDEOPTICALDENSITYOLFACTORYEPITHELIUM一氧化氮光密度嗅上皮OLIGODTOJ唔ODEOXYTHYMIDYLICACID寡聚多脫氧胸腺嘧啶核苷酸OMPONORSOSNSPBPBSOFTLL‘L’FAPVODOLFACTORYMARKERPROTEIN嗅標(biāo)記蛋白OLFACTORYNERVEODORANTRECEPTORS，嗅神經(jīng)氣味受體OLFACTORYSENSORYNEURONS嗅感覺神經(jīng)元PHOSPHATEBUFFER磷酸緩沖液PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PLAQUEFORMINGUNIT空斑形成單位PARAFORMALDEHYDE多聚甲醛POSTVIRUSOLTHCTORYDYSFUNCTION病毒感染后嗅覺障礙ORDISEASERTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASE逆轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應(yīng)CHAINREACTION

簡介：目的探討研究苦參、黃芪藥對以苦參中槐果堿、苦參堿、氧化槐果堿、槐定堿、氧化苦參堿、黃芪中黃芪甲苷和以增強(qiáng)小鼠免疫功能為指標(biāo)確定最佳提取方法和最佳配伍比例；研究苦參、黃芪藥對配伍后對苦參中氧化苦參堿、氧化槐果堿在大鼠體內(nèi)血藥濃度影響；苦參、黃芪及苦參、黃芪藥對提取物體外抗CVB3病毒及體外對感染CVB3病毒SD大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)對比實驗研究；研究苦參、黃芪藥對提取物對CVB3誘導(dǎo)BALBC小鼠心肌炎的治療作用；研究苦參、黃芪藥對提取物對CVB3誘導(dǎo)BALBC小鼠心肌炎治療的可能機(jī)制。材料與方法1、苦參、黃芪藥對的最佳提取方法、比例的確定苦參、黃芪藥對用水分提合并、水合提取、醇分提合并、醇合提取四種提取方法，苦參、黃芪藥對按生藥量比例11、12、13、14、15、21、31、41、51混合，通過紫外分光光度法測定總生物堿、高效液相色譜法測定苦參中槐果堿、苦參堿、氧化槐果堿、槐定堿、氧化苦參堿、黃芪中黃芪甲苷指標(biāo)性成分和增強(qiáng)小鼠免疫功能影響的藥效研究，確定了苦參、黃芪藥對最佳提取方法、最佳配伍比例。2、苦參、黃芪藥對提取物、單味藥苦參提取物中氧化苦參堿、氧化槐果堿在大鼠血漿中的藥代動力學(xué)研究分別取健康大鼠6只，雌、雄各半，取空白血漿05ML后，分別灌胃給藥（黃芪、苦參藥對提取物和苦參提取物），于給藥后05、1、2、3、4、6、8、10、12、24H，各從大鼠眼眶后靜脈叢取血05ML，進(jìn)行血漿內(nèi)苦參、黃芪藥對提取物、苦參提取物中有效成分氧化苦參堿、氧化槐果堿的藥代動力學(xué)分析。3、苦參、黃芪及苦參、黃芪藥對提取物體外抗CVB3病毒及體外對感染CVB3病毒SD大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)對比實驗研究在體外CVB3病毒感染的培養(yǎng)心肌細(xì)胞模型成功建立的基礎(chǔ)上，分病毒對照組、正常細(xì)胞對照組、陽性對照藥干擾素組，苦參提取物高、中、低劑量組，黃芪提取物高、中、低劑量組，苦參、黃芪藥對提取物高、中、低劑量組，分別于第2、5D時間點，在倒置顯微鏡下測定每孔細(xì)胞搏動速率，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，吸取上清液測定肌酸激酶同工酶（CKMB）的含量和測定藥物抑制病毒滴度。4、苦參、黃芪藥對提取物對CVB3感染的BALBC小鼠心肌炎治療作用實驗研究純系雄性BALBC小鼠，4周齡（體重為12G左右），設(shè)苦參、黃芪藥對提取物高、中、低劑量組，另外設(shè)三個對照組空白對照組、病毒對照組、玉丹榮心丸陽性對照組，每組二十只小鼠，統(tǒng)計小鼠死亡率，分別在第7D、14D無菌條件下取心臟，用HE染色方法觀察小鼠心肌損傷、測定心肌病毒滴度。5、苦參、黃芪藥對提取物對CVB3感染的BALBC小鼠心肌炎治療作用機(jī)制研究純系雄性BALBC小鼠，4周齡（體重為12G左右），設(shè)苦參、黃芪藥對提取物高、中、低劑量組，另外設(shè)三個對照組空白對照組、病毒對照組、玉丹榮心丸陽性對照組，給藥14D后通過免疫組化、原位雜交方法和原位末端標(biāo)記法對組織進(jìn)行凋亡形態(tài)學(xué)分析，觀察心肌顆粒酶B的蛋白、BCL2基因表達(dá)，CASPASE3的蛋白、基因表達(dá)，及心肌細(xì)胞凋亡情況，探索苦參、黃芪藥對提取物治療CVB3感染心肌炎的可能機(jī)制。結(jié)果1苦參、黃芪藥對的最佳提取方法、最佳配伍比例的確定苦參、黃芪藥對經(jīng)乙醇合提取，用高效液相色譜法測定苦參中槐果堿、苦參堿、氧化槐果堿、槐定堿、氧化苦參堿五種生物堿的含量最高，分別為10128、29458、10803、071790、30960MGG1，黃芪甲苷含量011920MGG1，用分光光度法總生物堿含量31880MGG1，通過對小鼠免疫功能影響的研究，苦參、黃芪藥對經(jīng)乙醇合提對小鼠免疫功能影響明顯優(yōu)于與其它提取方法對小鼠的免疫功能影響。苦參、黃芪藥對41配伍用高效液相色譜法測定苦參中槐果堿、苦參堿、氧化槐果堿、槐定堿、氧化苦參堿5種生物堿的含量較高高，分別為39020、10740、24293、22400、69530MGG1，苦參、黃芪21配伍黃芪甲苷含量最高為013060MGG1，用分光光度法測總生物堿苦參、黃芪51配伍含量最高為34740MGG1，通過對小鼠免疫功能影響的研究，苦參、黃芪藥對21配伍比例對小鼠免疫功能影響明顯優(yōu)于與其它配伍比例對小鼠的免疫功能影響。在中藥配伍的運用中，我們不僅要考慮單昧藥物的劑量，更要注意藥物用量之間的比例。通過配伍，既能增強(qiáng)原藥物的作用，更能調(diào)和偏性，取長補(bǔ)短，發(fā)揮藥物配伍的長處，使各具特征的藥物形成一個新的有機(jī)整體，以適應(yīng)復(fù)雜病癥的治療需要。在本實驗中，以中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)依據(jù)，以藥理療效結(jié)果為主要依據(jù)，有效成分含量為輔助指標(biāo)，最終確定苦參、黃芪按生藥量配伍的最佳比例為21。2、苦參、黃芪藥對提取物、單味藥苦參提取物中氧化苦參堿、氧化槐果堿在大鼠血漿中的藥代動力學(xué)研究大鼠灌胃苦參、黃芪藥對提取物后的氧化苦參堿在大鼠體內(nèi)的最大血藥濃度為2010ΜGML1，達(dá)峰時間為6小時，藥物分子在體內(nèi)024小時的平均停留時間為1291小時，024小時藥時曲線下面積為2261MGLH；苦參藥材中的氧化苦參堿在大鼠體內(nèi)的最大血藥濃度為6526ΜGML1，達(dá)峰時間為4小時，藥物分子在體內(nèi)024小時的平均停留時間為1570小時，024小時藥時曲線下面積為4650MGLH。將藥對提取物和苦參藥材提取物處理結(jié)果相比較，可得知，黃芪、苦參藥對配伍后達(dá)峰時間有所延后，除MRT（藥物分子在大鼠體內(nèi)的平均停留時間）較苦參藥材提取物大，其余統(tǒng)計據(jù)參數(shù)均小于苦參藥材提取物。大鼠灌胃苦參、黃芪藥對提取物后的氧化槐果堿在大鼠體內(nèi)的最大血藥濃度為3954ΜGML1，達(dá)峰時間為6小時，藥物分子在體內(nèi)024小時的平均停留時間為8679小時，024小時藥時曲線下面積為4331MGLH；苦參藥材中的氧化槐果堿在大鼠體內(nèi)的最大血藥濃度為2202ΜGML1，達(dá)峰時間為4小時，藥物分子在體內(nèi)024小時的平均停留時間為9385小時，024小時藥時曲線下面積為2611MGLH。從統(tǒng)計據(jù)參數(shù)結(jié)果分析，給苦參藥材的血藥達(dá)峰時間為4小時，而給藥對的為6小時，苦參藥材明顯比藥對的時間短，一般會認(rèn)為苦參中的氧化槐果堿吸收的較快，更易被大鼠吸收，但是從大鼠體內(nèi)的最大血藥濃度分析，給苦參的血藥最大濃度為2202ΜGML1，而給藥對的則是3954ΜGML1，藥對明顯高于苦參，說明藥對中的氧化槐果堿比較容易被大鼠吸收。此外從AUC（藥時曲線下峰面積）來看，苦參、黃芪藥對明顯高于苦參藥材，認(rèn)為苦參、黃芪藥對提取物能促進(jìn)氧化槐果堿的吸收。3、苦參、黃芪及苦參、黃芪藥對提取物體外抗CVB3病毒及體外對感染CVB3病毒SD大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)對比實驗研究在第2D時，苦參提取物高劑量組，苦參、黃芪藥對提取物高、中劑量組與病毒對照組有顯著性差異（P005），但在第5D天時，苦參高、中劑量組和苦參、黃芪藥對提取物高、中、低劑量組與病毒對照組有顯著性差異（P4、苦參、黃芪藥對提取物對CVB3感染的BALBC小鼠心肌炎治療作用實驗研究通過死亡率統(tǒng)計、病毒滴定分析、病理切片結(jié)果分析在7D時，只有高劑量苦參、黃芪藥對提取物組有降低死亡率、對病毒的有抑制及保護(hù)心肌作用。在第14D時苦參、黃芪藥對提取物高、中、低均能對病毒的有抑制及保護(hù)心肌作用，并且有良好的劑量效用關(guān)系。5、苦參、黃芪藥對提取物對CVB3感染的BALBC小鼠心肌炎治療作用機(jī)制研究給藥14D后通過免疫組化、原位雜交方法和原位末端標(biāo)記法對心肌組織進(jìn)行凋亡形態(tài)學(xué)分析，苦參、黃芪藥對提取物能夠降低心肌顆粒酶B的蛋白、CASPASE3的蛋白、基因及心肌細(xì)胞凋亡情況表達(dá)，上調(diào)BCL2基因表達(dá)，苦參、黃芪藥對提取物的高、中、低劑量對蛋白、基因表達(dá)水平有顯著性差異。結(jié)論1、苦參、黃芪藥對最佳提取方法為乙醇合提取，最佳配伍比例為21。2、苦參、黃芪藥對提取物中黃芪能夠促進(jìn)苦參中氧化槐果堿吸收，促進(jìn)氧化苦參堿轉(zhuǎn)化為苦參堿而被吸收。3、苦參、黃芪藥對提取物對CVB3感染的心肌細(xì)胞的保護(hù)及抗病毒作用優(yōu)于單味藥苦參、黃芪。4、苦參、黃芪藥對提取物對CVB3感染的BALBC小鼠心肌炎有治療作用。5、苦參、黃芪藥對提取物可能是通過降低心肌顆粒酶B的蛋白、CASPASE3的蛋白、基因表達(dá)，及心肌細(xì)胞凋亡情況表達(dá)，上調(diào)BCL2基因表達(dá)而對病毒性心肌炎起到一定的治療作用。

簡介：目的檢測單純皰疹病毒1型（HERPESSIMPLEXVIRUS1，HSV1）感染后認(rèn)知功能障礙小鼠海馬組織中細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶5CYCLINDEPENDENTPROTEINKINASE5，CDK5及其激活因子P35P25的表達(dá)變化，探討它們在單純皰疹病毒性腦炎認(rèn)知功能障礙發(fā)生機(jī)制中的可能作用。方法雄性C57BL6小鼠100只，分為模型組、假手術(shù)組、正常組。采用顱內(nèi)注射法建立單純皰疹病毒性腦炎小鼠模型，應(yīng)用PCR及病理檢查確定建模成功，感染后20D行MRIS水迷宮實驗評價各組小鼠認(rèn)知功能，然后應(yīng)用RTPCR方法檢測小鼠海馬組織CDK5MRNA的相對表達(dá)，WESTERNBLOT方法檢測CDK5及其激活因子P35P25的蛋白表達(dá)。結(jié)果接種后3天開始，模型組小鼠出現(xiàn)進(jìn)食減少、毛發(fā)蓬松、倦怠少動等癥狀；PCR及病理檢查證實HSE小鼠模型成功建立；水迷宮實驗正常組逃避潛伏期98±33S，假手術(shù)組117±54S，模型組269±164S，模型組小鼠穿越平臺次數(shù)及目標(biāo)象限停留時間較其他兩組明顯減少P＜005，提示模型組小鼠學(xué)習(xí)、記憶能力受損明顯P＜005；模型組小鼠海馬組織CDK5MRNA的相對表達(dá)量（222±092），較正常組125±013及假手術(shù)組137±039明顯上調(diào)P＜005；模型組海馬組蛋白表達(dá)比值CDK5122±040、P35170±081、P25113±039，與正常組及假手術(shù)組的比值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。結(jié)論小鼠感染HSV1后普遍出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶能力減退，HSE小鼠海馬組織中CDK5及其激活因子表達(dá)均增加，提示它們有可能參與了單純皰疹病毒性腦炎小鼠認(rèn)知功能障礙的發(fā)生。

簡介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文建立差異磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)平臺分析EB病毒瘤蛋白LMP1介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路姓名晏光榮申請學(xué)位級別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)腫瘤指導(dǎo)教師曹亞20050501博士學(xué)位論文中文摘要為此，我們借助磷酸化蛋白質(zhì)體內(nèi)外富集策略，結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)高通量技術(shù)，鑒定受LMPL調(diào)控的下游功能效應(yīng)蛋白質(zhì)分子磷酸化蛋白質(zhì)分子；然后采用傳統(tǒng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究策略建立髓病毒瘤蛋白LMPL與下游功能效應(yīng)蛋白質(zhì)分子間的關(guān)系，初步構(gòu)建雎病毒瘤蛋白LMPL介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路網(wǎng)絡(luò)。我們擬采用磷酸酶抑制劑和磷酸基團(tuán)金屬親和純化PHOSPHATEMETALAFFINITYCHROMATOGRAPHYJPMAC兩種策略來富集磷酸化蛋白質(zhì)。我們研究證實采用磷酸酶抑制劑抑制細(xì)胞內(nèi)磷酸酶活性可以有效提高細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白質(zhì)的總量，并且呈劑量和時間依賴性，從而確定了絲／蘇氨酸磷酸酶抑制劑和酪氨酸磷酸酶抑制劑的最佳工作濃度和最佳處理時間。同時采用PMAC技術(shù)從細(xì)胞總蛋白質(zhì)中分離純化出磷酸化蛋白質(zhì)。我們以PEGFR，PP65和QTUBULIN分別作為磷酸化蛋白質(zhì)和非磷酸化蛋白質(zhì)的代表，檢測細(xì)胞總蛋白經(jīng)過PMAC處理后磷酸化蛋白質(zhì)組分中是否存在非磷酸化蛋白質(zhì)，和非磷酸化蛋白質(zhì)組分中是否存在磷酸化蛋白質(zhì)，結(jié)果顯示，磷酸化蛋白質(zhì)組分中不存在QTUBULIN，非磷酸化蛋白質(zhì)中不存在PEGFR和PP65，說明借助PMAC策略可以有效地分離磷酸化蛋白質(zhì)與非磷酸化蛋白質(zhì)。從而建立了磷酸化蛋白質(zhì)體內(nèi)外富集技術(shù)平臺。在已經(jīng)建立磷酸化蛋白質(zhì)富集技術(shù)平臺的基礎(chǔ)上，我們確定了磷酸化蛋白質(zhì)富集結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定LMPL調(diào)節(jié)的磷酸化蛋白質(zhì)分子的可行性。我們用磷酸化蛋白質(zhì)的總量計算、二維凝膠電泳以及單個磷酸化蛋白質(zhì)的WESTERNBLOT分析發(fā)現(xiàn)，CNEL和CNE卜LMPL細(xì)胞經(jīng)磷酸酶抑制劑處理后，抑制了LMPL介導(dǎo)的下游蛋白質(zhì)磷酸化事件，導(dǎo)致兩細(xì)胞中磷酸化蛋白質(zhì)的均一性。所以我們只好放棄磷酸酶抑制劑這種磷酸化蛋白質(zhì)富集策略，而只采用磷酸化蛋白質(zhì)體外富集策略PMAC技術(shù)。當(dāng)細(xì)胞不經(jīng)過磷酸酶抑制劑處理，而直接用PMAC技術(shù)從細(xì)胞總蛋白中分離純化出磷酸化蛋白質(zhì)。磷酸化蛋白質(zhì)總量計算顯示，EB病毒瘤蛋白LMPL可以增加細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白質(zhì)總量的1803％，差異非常顯著盧O00845。通過分析富集的總磷酸化蛋白質(zhì)中的單個磷IL