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簡介：目的構建原核表達系統(tǒng)表達內含人免疫缺陷病毒1型HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUSHIV1部分RNA序列的病毒樣顆粒該病毒樣顆粒所含的HIV重組RNARERNA因被噬菌體衣殼蛋白包裹而具有耐核糖核酸酶RNASE特性同時因HIV的部分蛋白與病毒樣顆粒一起表達從而使該顆粒具有HIV病毒的部分免疫反應性結論本研究得到的表達載體PNCCL1HIV及原核表達系統(tǒng)可以作為構建和制備耐RNASE的HIVRNA標準品和質控品的平臺如可以直接作為HIV核酸測定中的陽性質控物和某些HIVRNA外標定量測定的外標定量標準可以為HIV1RTPCR檢測試劑盒和實驗室室間質量評價提供無生物傳染危險性的樣本如果對PNCCL1HIV中的HIV檢測的目的片段進行缺失、插入和突變等修飾所獲得的病毒樣顆?？梢宰鳛镠IV定量測定中的內標標準和HIV1RTPCR測定的內標質控物在本研究中HIV1GAG蛋白也被證實表達于病毒樣顆粒上這提示我們可以在該病毒樣顆粒表面表達某些細胞受體的配體表達有相應配體的病毒樣顆?？梢杂米餮芯坎《九c宿主細胞相互作用的模型可以用來作為定向運輸小分子藥物、反義RNA的工具此外在病毒樣顆粒表面表達有相應的抗原表位可以用來研究疫苗

簡介：研究背景自1972年發(fā)現(xiàn)諾瓦克病毒后，已相繼發(fā)現(xiàn)和確立了以下幾種能引起腹瀉的病毒，即輪狀病毒、諾瓦克樣病毒、腸腺病毒、星狀病毒、腸道冠狀病毒及細小病毒等。金玉等20032004期間對蘭州地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉病原體進行了流行病學調查研究，證實了輪狀病毒與諾瓦克樣病毒是小兒秋季腹瀉最常見的病原體。病毒性腹瀉已經(jīng)給患兒、家庭及社會都帶來很大的影響，目前，病毒性腹瀉尚無特異的抗病毒藥物，而中醫(yī)藥呈現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢。陳寶田教授長期臨床工作中，通過對大量中草藥的篩選，研制出急瀉停膠囊以番石榴葉為主藥，其它中藥為輔，組成番石榴葉復方，目前急瀉停膠囊已完成國家三期臨床試驗，經(jīng)過長期臨床醫(yī)療實踐證明對輪狀病毒性腹瀉療效確切。大量的研究證實番石榴葉與急瀉停膠囊對輪狀病毒性腹瀉有較好的療效，但二者之間臨床療效是否有差異尚不明白。番石榴葉對輪狀病毒體外及體內都有較好的抗病毒作用，是否對諾瓦克樣病毒是否有同樣效果，此研究將初步回答。目的評價番石榴葉及急瀉停膠囊治療嬰幼兒病毒性腹瀉病的臨床療效并初步探討作用機理。探討廣州地區(qū)諾瓦克樣病毒性腹瀉的發(fā)病情況，同時觀察番石榴葉對其治療效果。方法1、將2004年9月～2005年2月、2005年10月南方醫(yī)院門診腹瀉患兒310例中ELISA檢測輪狀病毒抗原陽性的186例腹瀉患兒，采用單盲隨機對照的方法，分為番石榴葉組治療組A58例、急瀉停膠囊組治療組B65例與思密達組對照組63例三組，觀察三組臨床療效、輪狀病毒抗原轉陰情況及糞NA、糞糖濃度的改變以及中醫(yī)證型分布情況；2、2004年10月～2005年1月、2005年10月～2006年1月在南方醫(yī)院兒科就診的臨床診斷為病毒性腹瀉的患兒腹瀉標本420例，采用半套式反轉錄聚合酶鏈反應RTPCR法檢測諾瓦克樣病毒，用序貫試驗法設計試驗，按就診順序對NVLS腹瀉患兒口服番石榴葉顆粒20GD1，一次服用，連續(xù)服用3D，觀察至20例患兒時，試驗中止。結果1、治療72H后，番石榴葉組、急瀉停膠囊組和對照組分別有38、39、13例患兒大便成形，嘔吐、腹瀉、發(fā)熱癥狀消失。統(tǒng)計處理結果示三組患兒的臨床療效間差異有顯著性H5237，P0000，NEMENYI法兩兩比較示番石榴葉組、急瀉停膠囊組與對照組間有顯著差異P0000，番石榴葉與急瀉停膠囊組間無明顯差異P0937，可以認為番石榴葉與急瀉停膠囊療效優(yōu)于思密達，番石榴葉與急瀉停膠囊間臨床療效無差異。治療組A抗原轉陰47例，轉陰率為8103％；治療組B轉陰53例，轉陰率為8154％；對照組轉陰30例，轉陰率為476％。三組糞HRV抗原轉陰率比較，差異有顯著性X222464，P0000；治療組間HRV抗原轉陰率比較，無明顯差異X20050，P0943。提示番石榴葉及急瀉停膠囊有促進患兒糞便HRV抗原轉陰的作用，同時顯示二者促進抗原轉陰的作用無明顯差異。當控制治療前NA、糞的影響后，協(xié)方差分析顯示治療前后NA差值有顯著差異F10477，P0000，治療前后糞糖差值有顯著差異F24326，P0000，表明經(jīng)番石榴葉及急瀉停膠囊治療后糞糖、糞NA濃度較治療前明顯降低，與對照組有顯著差異；提示番石榴葉及急瀉停膠囊能促進HRV腹瀉患兒腸道對糞便中NA和葡萄糖的吸收。2、420份糞便標本中檢測出NLVS陽性31例，陽性率為74％；番石榴葉對NLVS腹瀉有效率為800％。結論1、番石榴葉及急瀉停膠囊對輪狀病毒腹瀉療效較好，二者間臨床療效無明顯差異；2、NLVS感染可能是廣州地區(qū)嬰幼兒腹瀉的重要原因之一；番石榴葉對NLVS腹瀉療效較好。

簡介：點擊查看更多火炭母生藥質量及抑菌、保肝、抗乙肝病毒藥效實驗研究.pdf精彩內容。

簡介：目的探討重復感染致病毒性心肌炎心室重構的發(fā)生機制，MMPS家族在心肌炎心室重構過程的作用及與相關的細胞因子之間的作用。通過中藥干預探討對心肌炎心肌損傷的保護作用及其作用機制。方法建立重復感染病毒性心肌炎模型用CVB3M病毒以劑量梯度倍增方式連續(xù)4次經(jīng)腹腔感染小鼠，治療組于首次接種病毒當日給予灌胃給藥，持續(xù)至60天。在末次感染后不同時期觀察HE染色光鏡下心肌形態(tài)學變化、臟器指數(shù)變化、VG染色心肌膠原間質增生變化、RTPCR法測定心肌中細胞因子MMP1、TIMP1、TNFΑ、TGFΒ1的MRNA表達水平；WESTERNBLOT法檢測心肌中的MMP1和TIMPL的蛋白表達水平，ELISA法測定血清中TNFΑ和TGFΒ1水平。結果①病理結果顯示，正常對照組小鼠心肌組織未見異常，中藥組、西藥組小鼠心肌組織病理改變較病毒組明顯減輕。②心臟指數(shù)變化病毒組、中藥組、西藥組小鼠心臟指數(shù)高于正常組，但病毒組小鼠心臟指數(shù)明顯高于中藥組和西藥組。③病毒性心肌炎急性期末次感染后5～10D，心肌內壞死灶較多，大量炎細胞浸潤，TNFΑ轉錄和翻譯水平明顯增加。MMP1變化與TNFΑ并行；各治療組對早期TNFΑMRNA表達有抑制作用，同時亦對MMP1表達有抑制作用；在慢性期末次感染后20D心肌壞死灶逐漸吸收，膠原增生明顯，血清中TGFΒ1表達增加，心肌中TIMP1水平與之并行。出現(xiàn)早期心肌纖維化改變。各治療組檢測結果顯示對TGFΒ1表達有明顯降低趨勢，同時亦下調TIMP1表達水平，且與病毒組相比，具有統(tǒng)計學意義。結論①本實驗成功地建立了重復感染致病毒性心肌炎心肌壞死和心室重構的實驗動物模型。②本研究通過實驗證實本法對CVB3VMC具有確切的防治作用，提高慢性VMC小鼠的生存率，減輕小鼠體重的下降，降低小鼠HWBW的比值，減輕心肌的炎性病變。③本法顯著抑制慢性VMC心肌間質膠原增殖，無論從基因水平還是蛋白水平都有顯著下降，從而改善心室重構。④通過抑制膠原調控因子TNFΑ，TGFΒ1基因表達間接對MMPSTIMPS系統(tǒng)平衡的調節(jié)，來抑制細胞外基質合成與降解的失衡，延緩了心肌纖維化的進程。⑤本研究的進行為指導臨床治療慢性VMC心室重構提供了新的思路和方法。創(chuàng)新點本實驗首次系統(tǒng)地觀察了重復感染致病毒性心肌炎動物模型，從急性期到慢性期過程中心肌病理變化，心肌內膠原增生情況，MMPSTIMPS系統(tǒng)動態(tài)演變過程及細胞因子的調節(jié)作用。首次應用中藥干預來探討對心肌炎小鼠心肌損傷及纖維化的保護作用，并用分子生物學方法，通過基因及蛋白表達水平觀察中藥對細胞岡子及MMP系統(tǒng)的影響，揭示中藥對MMPSTIMPS系統(tǒng)、TNFΑ，TGFΒ1MRNA的活性影響來抑制心室重構的進程。

簡介：乙型肝炎病毒（HEPATITISBVIRUS，HBV）是一種嗜肝DNA病毒，具有嚴格的宿主和組織特異性，是全球感染性肝臟疾病的主要病因，據(jù)報道全球約每年100萬的患者死于HBV感染導致的各種疾病，如肝功能衰竭、肝硬化和肝癌，嚴重威脅人類的健康。HBV本身不引起肝細胞病變，肝臟的病理變化主要取決于機體免疫應答，尤其細胞免疫應答。HBV導致的免疫損傷十分復雜，加之缺乏有效的動物疾病模型，故目前乙型肝炎發(fā)生發(fā)展的免疫病理機制尚不十分清楚。TH17型細胞是一種輔助性CD4T細胞，能夠分泌產生IL17A（即IL17）、IL17F、IL22、IL6等細胞因子，孤獨核受體ΓTPHANNUCLEARRECEPTGAMMATRΓT是調節(jié)TH17型細胞分化的關鍵轉錄因子。TH17型細胞可促進炎癥的發(fā)生發(fā)展，與許多免疫性疾病的致病機制密切相關?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)TH17型細胞及其相關的細胞因子在HBV相關的肝臟疾病中明顯升高。但有關HBV抗原誘導的TH17型細胞在肝臟免疫病理損傷的作用，以及影響其分化的機制尚不清楚，有待進一步研究。因此，本研究首先用HBV抗原定向誘導初始CD4T細胞向TH17型細胞分化，并過繼轉移到能表達HBSAG和HBCAG的小鼠模型，以研究TH17型細胞在HBV感染中的致病作用；并進一步研究HBV抗原對TH17型細胞分化的影響及機制。第一部分HBV重組腺病毒的構建目的構建HBV重組腺病毒方法利用分子克隆技術將13倍HBV全基因組AYW亞型真核表達質粒與穿梭質粒PADTRACK連接，構建重組穿梭質粒PADTRACKHBV。測序驗證序列正確后，將重組穿梭質粒PADTRACKHBV線性化轉染到含有PADEASY1的大腸桿菌BJ5183中構建HBV重組腺病毒質粒PADGFPHBV13。測序驗證后，將重組穿梭質粒PADGFPHBV13線性化，用脂質體2000轉染到HEK293AD細胞進行包裝，并進一步擴增HBV重組腺病毒，用氯化銫梯度離心純化HBV重組腺病毒，最后用HBVDNAFQPCR定量檢測HBV重組腺病毒濃度。結果PADTRACKHBV質粒和PADGFPHBV質粒分別經(jīng)酶切，在1％瓊脂糖凝膠電泳，均可得到41KB大小的酶切片段，大小與13倍HBV基因全長相符合。轉染PADGFPHBV質粒的HEK293AD細胞在24小時后開始表達GFP熒光蛋白，1周后出現(xiàn)細胞病理效應。擴增后的HBV重組腺病毒的HBVDNA含量為1311010COPIESML，經(jīng)氯化銫梯度離心純化后病毒指數(shù)為7891012COPIESML。結論成功構建HBV重組腺病毒ADHBV。第二部分HBV感染小鼠模型的建立及小鼠對HBV的免疫應答反應目的建立急性HBV感染小鼠模型，研究HBV感染早期小鼠的免疫反應及其肝組織學改變。方法尾靜脈注射HBV重組腺病毒感染C57BL6小鼠，在注射病毒后的第1、2、3、5、7天收集小鼠血液、脾臟和肝臟。分離小鼠血清，用改良賴氏法檢測血清谷丙轉氨酶；時間分辨免疫熒光分析方法IFMA定量檢測血清HBSAG、HBEAG、抗HBS、抗HBE和抗HBC；HBVFQPCR定量檢測血清HBVDNA。分離肝臟細胞，用HBSAG和HBCAG作用肝臟細胞后，ELISA檢測細胞因子INFΓ、IL4和IL17；REALTIMEPCR檢測肝臟組織HBVCCCDNA；熒光顯微鏡觀察肝臟組織GFP蛋白表達；HE染色切片檢測小鼠肝臟組織病理學檢查，免疫組化檢測肝臟HBSAG和HBCAG表達。結果ADHBV組與AD組C57BL6小鼠在注射初期（1D、2D）均出現(xiàn)血清谷丙轉氨酶輕度升高和肝臟組織輕度炎癥反應，兩組之間無統(tǒng)計學差異，第3天血清谷丙轉氨酶和肝臟組織學改變基本恢復正常。小鼠感染ADHBV后的第1天血清檢測到HBSAG和HBVDNA，肝臟組織也出現(xiàn)HBSAG、HBCAG的表達和HBVCCCDNA，第3天最明顯。感染后第5天檢測到抗HBS，第7天檢測到抗HBC，而抗HBE一直為陰性；HBSAG和HBCAG作用后不影響肝臟細胞的INFΓ、IL4和IL17細胞因子分泌水平。結論尾靜脈注射ADHBV能夠構建急性HBV感染小鼠模型；ADHBV感染C57BL6小鼠早期不產生特異性免疫反應與肝臟損傷作用。第三部分HBV抗原誘導的TH17型細胞對感染ADHBV小鼠的作用研究目的定向誘導HBV抗原特異性TH17型細胞，并研究其對感染ADHBV小鼠的作用。方法1誘導HBV抗原特異性CD4T細胞經(jīng)C57BL6小鼠鼻腔接種200ΜL含5106COPIESHBV重組腺病毒的病毒懸液，4周后加強一次，再經(jīng)1周后取小鼠脾臟單個核細胞，將細胞分三組HBV抗原細胞因子組，HBV抗原組和PBS組。HBV抗原細胞因子組，用細胞因子（TGFΒ1NGML、IL610NGML、IL2310NGML、抗IFNΓ5ΜGML、抗IL45ΜGML）和HBV抗原（HBSAG20ΜGML和HBCAG20ΜGML）作用小鼠脾臟單個核細胞；HBV抗原組用HBSAG20ΜGML和HBCAG20ΜGML作用細胞；PBS組僅用PBS作用細胞。72小時后用CD4T細胞磁珠分選脾臟單個核細胞的CD4T細胞，把CD4T細胞與抗原提呈細胞（通過MITOMYCINC處理健康小鼠脾臟單個核細胞獲得）按51混合，并加用上述刺激因素繼續(xù)作用72小時。收集小部分細胞懸液用CONA刺激24小時后，ELISA檢測上清中IL17、IL22、INFΓ和IL4的水平；流式細胞術（FCM）分析IL17CD4T細胞、INFΓCD4T細胞和IL4CD4T細胞的百分比；REALTIMEPCR檢測細胞IL17、IL22和RΓTMRNA水平。2構建小鼠肝臟急性損傷模型通過C57BL6小鼠尾靜脈注射HBV重組腺病毒，感染病毒3天后予以細胞過繼轉移。洗滌上述培養(yǎng)的HBV抗原特異性CD4T細胞，PBS重懸細胞，將200ΜL含2107個細胞的懸液尾靜脈注射給已感染HBV重組腺病毒3天的C57BL6小鼠。24小時后處死小鼠，取小鼠血清用改良賴氏法檢測谷丙轉氨酶，取肝臟石蠟包埋，切片進行HE染色觀察肝臟病理學改變。結果1HBV抗原細胞因子組IL17CD4T細胞的百分比，以及IL17、IL22和RΓTMRNA水平顯著性高于HBV抗原組和PBS組，P＜001，且IL17和IL22分泌水平也顯著性高于其它兩組，P＜001。HBV抗原組的IL17CD4T細胞百分比，以及IL17和IL22MRNA水平和分泌顯著性高于PBS組，P＜001；HBV抗原組INFΓCD4T細胞的百分比和INFΓ的分泌顯著性高于HBV抗原細胞因子組和PBS組，P＜001。HBV抗原細胞因子組、HBV抗原組和PBS組IL4CD4T細胞的百分比和IL4分泌無顯著性差異。2HBV抗原細胞因子組和HBV抗原組的CD4T細胞分別過繼轉移給感染ADHBV的C57BL6小鼠，均能導致小鼠血清谷丙轉氨酶升高，以及肝臟組織明顯的炎癥反應，如肝細胞明顯腫脹，部分壞死，肝臟結構紊亂，大量的炎癥細胞浸潤。結論1用HBV抗原（HBSAG和HBCAG）聯(lián)合細胞因子在體外成功定向誘導初始CD4T細胞向TH17型細胞分化。2HBV抗原特異性TH17型細胞可導致感染ADHBV小鼠的肝臟炎癥反應與組織損傷。第四部分研究HBV抗原對TH17型細胞分化的影響及機制目的研究HBV抗原對小鼠TH17型細胞分化的影響及機制方法1分別用重組HBSAG、HBCAG、HBEAG免疫C57BL6小鼠，取三種抗原免疫組小鼠的脾臟單個核細胞，一部分細胞用相應HBV抗原（HBSAG20ΜGML，HBCAG25ΜGML，HBEAG25ΜGML）作用24小時，流式細胞術檢測細胞的IL17CD4T細胞百分含量。另一部分細胞用磁珠分選CD4T細胞，并與相應抗原和小鼠腹腔巨噬細胞共同培養(yǎng)72小時，REALTIMEPCR檢測細胞的IL17、IL22和RΓTMRNA水平，以及培養(yǎng)液IL17和IL22的含量。2檢測HBV三種抗原免疫組脾臟單個核細胞的TLR2、3、4、7和9MRNA水平。分別用HBV抗原作用相應免疫組小鼠脾臟單個核細胞24小時，檢測細胞IL6和IL23MRNA水平和分泌。不同劑量HBV抗原作用小鼠腹腔巨噬細胞24小時，檢測IL6、IL23MRNA水平和分泌及其TLR7MRNA水平和蛋白表達。SIRNA沉默巨噬細胞TLR7的表達，WESTERNBLOT分析SIRNA抑制效率；以SIRNATLR7小鼠巨噬細胞為APC，分別加入三種不同的HBV抗原及相應的HBV抗原免疫的CD4T細胞共同培養(yǎng)72小時，檢測CD4T細胞的IL17、IL22和RΓTMRNA水平，以及IL17和IL22的分泌水平；用HBV抗原對SIRNATLR7小鼠巨噬細胞作用后，檢測其IL6和IL23的分泌和MRNA水平。結果1HBSAG免疫組、HBCAG免疫組、HBEAG免疫組脾臟單個核細胞的IL17CD4T細胞百分比顯著性高于佐劑組，P＜001，且CD4T細胞的IL17和IL22MRNA水平和分泌，以及RΓTMRNA水平均顯著性高于佐劑組，P＜001，但程度不一致。IL17MRNA水平和分泌依次是HBCAG組HBEAG組HBSAG組，三組間差異具有統(tǒng)計學意義，P＜001；IL22MRNA水平和分泌依次是HBSAG免疫組HBCAG免疫組HBEAG免疫組，HBSAG免疫組顯著性高于HBCAG和HBEAG免疫組，P＜001，而在HBCAG和HBEAG免疫組之間無顯著性差異；RΓTMRNA水平依次是HBCAG免疫組HBEAG免疫組HBSAG免疫組，HBCAG免疫組顯著性高于HBSAG和HBEAG免疫組，P＜001，而在HBSAG和HBEAG免疫組之間無顯著性差異。2與佐劑對照組比較，HBEAG免疫組小鼠脾臟單個核細胞的TLR2MRNA水平顯著性升高，P＜001，HBCAG免疫組無明顯改變，而HBSAG免疫組則表達顯著性下降，P＜001；三種抗原免疫組TLR3MRNA水平無明顯改變；HBCAG免疫組TLR4MRNA水平顯著性升高，P＜001，HBEAG免疫組無明顯改變，而在HBSAG免疫組其表達顯著性下降，P＜001；三種抗原免疫組TLR7MRNA水平均顯著性升高（P＜001），以HBCAG免疫組升高最明顯；三種抗原免疫組TLR9MRNA水平均顯著下降（P＜001）。HBSAG、HBCAG和HBEAG免疫組脾臟單個核細胞的IL6MRNA水平和分泌均高于佐劑組；而HBCAG和HBEAG免疫組IL23MRNA水平和分泌顯著性高于佐劑組，P＜005。體外小鼠巨噬細胞在HBSAG、HBCAG和HBEAG作用下TLR7MRNA水平和蛋白表達顯著性升高，P＜001。在HBCAG和HBEAG作用下，巨噬細胞IL6和IL23MRNA水平和分泌顯著性升高，P＜001，呈濃度依賴關系，且以HBCAG作用最明顯；HBSAG作用巨噬細胞僅IL6MRNA水平和分泌顯著性升高，P＜001。SIRNATLR7抑制靶基因效率近70；SIRNATLR7能顯著性抑制能顯著性抑制三種HBV抗原（HBSAG、HBCAG和HBEAG）免疫組小鼠CD4T細胞IL17、IL22MRNA水平和分泌及RΓTMRNA水平的上調（P＜001）；能顯著性抑制三種HBV抗原上調小鼠巨噬細胞的IL6MRNA分泌和水平（P＜001），及顯著性抑制HBCAG和HBEAG上調小鼠巨噬細胞IL23MRNA水平和分泌（P＜005）。結論1HBSAG、HBCAG和HBEAG能夠促進TH17型細胞分化，以HBCAG誘導作用最強；HBCAG和HBEAG誘導的TH17型細胞以分泌IL17為主；HBSAG誘導的TH17型細胞以分泌IL22為主。2HBCAG和HBEAG通過上調小鼠巨噬細胞TLR7表達，增加IL6和IL23分泌，誘導TH17型細胞分化，而HBSAG通過上調小鼠巨噬細胞TLR7表達，僅增加IL6分泌，誘導TH17型細胞分化。

簡介：目的調查住院腦卒中患者照顧者照顧負擔及生活質量的現(xiàn)狀，探討認知行為干預對腦卒中患者照顧者照顧負擔及生活質量的干預效果。方法本研究為類實驗性研究。第一階段選取鄭州大學第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內科、神經(jīng)康復科、干部病房一病區(qū)、干部病房二病區(qū)的腦卒中患者的親屬，調查其照顧負擔、生活質量、簡易應對方式和社會支持狀況第二階段依據(jù)照顧負擔量表的計分方法，將照顧負擔總分≥21分的98例腦卒中患者照顧者確定為研究對象，將四個病區(qū)采用抽簽法進行隨機分組，確定干預組（49例）和對照組（49例）。干預組在醫(yī)院常規(guī)健康教育的基礎上，進行認知行為干預，共8周，每次3060分鐘，每周一次。對照組按醫(yī)院常規(guī)健康教育實施。每組在干預前、干預1個月、干預2個月分別接受一次測評，共三次，對認知行為干預的效果進行分析。結果1對兩組資料均衡性比較及各問卷統(tǒng)計描述①對腦卒中患者照顧者及患者的一般資料各個方面的情況進行對比，顯示一般資料各方面的差異均無統(tǒng)計學意義P＞005，兩組資料具有可比性。②調查顯示，98例腦卒中患者照顧者的照顧負擔ZBI總分為3544±1299。③照顧者的生活質量各維度得分為PCS軀體功能評分為4580±863，MCS精神功能評分為4512±899。④照顧者簡易應對方式各維度得分為積極應對得分為2352±568，消極應對得分為1086±372。⑤照顧者社會支持總分及各維度得分為總分為6462±1141，家庭內支持為2374±410，家庭外支持為4088±811。2根據(jù)腦卒中患者照顧者一般情況和患者一般情況對照顧者及患者進行分組，采用兩獨立樣本T檢驗、秩和檢驗及單因素方差分析，對不同分組的ZBI總分進行對比，結果顯示照顧者不同的年齡、性別、文化程度、月收入、與患者關系、持續(xù)照顧時間、日均照顧時間、有無慢性病、有無其他共同照顧者9個方面及患者不同的年齡、醫(yī)療費用支付方式、疾病類型、自理程度4個方面ZBI總分差異有統(tǒng)計學意義P＜005。而照顧者工作情況及患者的性別和文化程度三方面ZBI總分差異無統(tǒng)計學意義P＞005。3采用重復測量方差分析對兩組干預前、干預1個月、干預2個月ZBI總分及各維度得分進行比較，結果顯示①ZBI總分、ZBI的責任負擔及個人負擔的時間主效應均有統(tǒng)計學意義P＜005，即不考慮干預因素，可以認為這些維度的得分將伴隨時間的變化而改變②ZBI總分、ZBI的責任負擔及個人負擔的干預主效應有統(tǒng)計學意義P＜005，即不考慮測量的時間，可以認為干預水平（干預和對照）的不同，各維度得分會有差別③ZBI總分、ZBI的個人負擔得分和ZBI的責任負擔得分的時間因素與干預因素間均存在著交互作用P＜005。4采用重復測量對干預前、干預1個月、干預2個月的干預組、對照組SF12生存質量各維度得分進行比較。結果表明①PCS得分的時間主效應、干預主效應以及二者的交互作用均無統(tǒng)計學意義（P＞005）。②MCS得分的時間主效應、干預主效應及時間因素與干預因素交互作用均具有統(tǒng)計學意義P＜005。5采用重復測量對干預前、干預1個月、干預2個月的干預組、對照組SCSQ簡易應對方式各維度得分進行比較，結果表明①積極應對得分的時間主效應、干預主效應以及二者的交互作用均有統(tǒng)計學意義P＜005。②消極應對得分的時間主效應、干預主效應以及二者的交互作用均有統(tǒng)計學意義（P＜005）。6采用重復測量對干預前、干預1個月、干預2個月的干預組、對照組社會支持總分及各維度得分進行比較，結果表明①社會支持總分、家庭內支持及家庭外支持時間主效應均有統(tǒng)計學意義（P＜005），即不考慮干預因素，可以認為這些維度的得分會伴隨時間的變化而改變②社會支持總分、家庭內支持及家庭外支持的干預主效應有統(tǒng)計學意義（P＜005），即不考慮測量的時間，可以認為干預水平（干預和對照）的不同，各維度得分有差異③社會支持總分、家庭外支持得分及家庭內支持得分的時間因素與干預因素之間均存在交互作用（P＜005）。結論1認知行為干預可明顯降低腦卒中照顧者的照顧負擔，而且對個人負擔和責任負擔均有改善。2認知行為干預能有效改善腦卒中照顧者的生活質量，精神健康改善明顯，身體健康作用不明顯。3認知行為干預可有效提高腦卒中患者照顧者的家庭內支持及家庭外支持。4認知行為干預可有效提高腦卒中患者照顧者的積極應對方式，降低消極應對方式。

簡介：山東中醫(yī)藥大學碩士學位論文止瀉方治療小兒輪狀病毒腸炎的臨床研究姓名樊蔚申請學位級別碩士專業(yè)中醫(yī)兒科學指導教師曹宏20090420CLINICALRESEARCHOFCHILDREN’SROTAVIRUSENTERITISWITHZHIXIEDECOCTIONSPECIALITYDIGESTIVEDISEASES，PEDIATRICSMEDICINEOFTCMAUTHORFANW萌TUTORPROFESSORCAOHONGABSTRACTOBJECTIVETHEPURPOSEOFTHISTASKISTOOBSERVECHILDREN7SROTAVIRUSENTERITISWHICHISDIARRHEADUETCDAMPHEATINTCMUSEDBYTHETREATMENTWITHZHIXIEDECOCTIONINORDERTODETERMINETHEEFFICACYOFCHINESEMEDICINEMETHODS100INFANTSWITHRVENTERITISWEREDIVIDEDINTO2GROUPSRANDOMLYTHESTUDYGROUPANDTHECONTROLGROUPBOTHOFTHEMWERETREATEDFOR3DAYS111EINFANTSINTHESTUDYGROUPWERETREATEDWITHZHIXIEDECOCTIONANDTHATINTHECONTROLGROUPWERETREATEDWITHDIOCTAHEDRSLSMECTITEANDINTERFERONALBIFNQLBTHESYMPTOMSANDSIGNSOFTHEINFANTSWEREOBSERVEDBEFOREANDAFTERTHETREATMENTSANDTHEDATEMUSTBEPROCESSEDUSINGSTATISTICALRESULTSINTHEMAINSYMPTOMSANDSIGNSOFIMPROVEMENTANDTOTALEFFICIENCY，THETREATMENTGROUPISBETTERTHANTHECONTROLGROUPANDTHEREARESTATISTICALLYSIGNIFICANTCONCLUSIONTHISSHOWSTHATCHILDREN7SROTAVIRUSENTERITISWHICHISDIARRHEADUETODAMPHEATINTCMUSEDBYTHETREATMENTWITHZHIXIEDECOCTIONISEFFECTIVE，LOWCOST，ANDLESSSIDEEFFECTALSOITISWORTHPROMOTINGTREATMENTKEYWORDSZHIXIEDECOCTION；ROTAVIRUSENTERITIS；CLINICALRESEARCH

簡介：水痘是由水痘帶狀皰疹病毒VARICELLAZOSTERVIRUSVZV引發(fā)的世界性傳染疾病為了研制疫苗和有效診斷水痘本文研究了VZV疫苗株在VERO細胞中傳代適應、制備VZV抗原工藝和ELISA方法將VZV疫苗株在VETO細胞中連續(xù)傳代培養(yǎng)傳至第9代時CPE明顯增多病毒滴度從2～3LOGPFUML提高到≥42LOGPFUML能在超低溫條件下穩(wěn)定保存表明毒株獲得了適應性可用于制備VZV抗原培養(yǎng)條件試驗表明15L瓶旋轉培養(yǎng)的適宜MOI接種比例LOGPFUCELL為001收獲時間在60～96H收獲病變細胞經(jīng)超聲破碎、離心制備了VZV全病毒ELISAVARELISA抗原用TRITONX100裂解通過LENTILLECTINSEPHROSE4B親和層析純化制備了VZV糖蛋白EIJSAGPELISA抗原具有VZV特異性糖蛋白兩種抗原的稀釋度達13000～14000研究了VZVVARELISA和GPELISA的反應條件建立了相應的方法學兩種抗原最適使用稀釋度為14000PH74的PBS緩沖液為包被液10﹪新生牛血清為封閉液抗原抗體反應時間為120MIN酶標抗體工作濃度為1120辣根過氧化物酶作用底物為鄰苯二胺酶標抗體反應時間為120MINVCROGPELISA和VARELISA抗原加保護劑具有保存穩(wěn)定性和可重復性VCROGPELISA檢出WHOVZV國際標準血清的抗體滴度較VARELISA提高了4倍檢出下限分別為195MIUML和781MIUML所得結果與國外成品試劑盒相符應用抗原通過篩查獲得了VZV陽性血清測出的抗VZVIGG幾何平均滴度優(yōu)于人胚肺二倍體2BS細胞制備的VARELISAVZV疫苗株在VERO細胞中能傳代適應、制備毒種用15L瓶旋轉培養(yǎng)可大量制備VZV抗原建立了VERO細胞制備的VZVIGGVARELISA和GPELISA方法的靈敏度、特異性和可重復性良好因此VERO細胞用于VZV診斷制品的研究和生產是可行的本研究為今后兩種試劑盒的標準化和商品化奠定了基礎

簡介：點擊查看更多強制泛素化HBcAg重組慢病毒載體的構建及其誘導體內CTL反應的初步研究.pdf精彩內容。

簡介：Y，186279分類號魚GUDC密級學校代號Q學號呈QQ23壁壘QQ2Q】Q2／聾南羅蟹夕久旁SOUTHCHNAUNIVERSL下Y0F丁ECHNOLOGY碩士學位論文單純皰疹病毒II型糖蛋白D表達載體的構建及在畢赤酵母中的表達學位申請人導師姓名及職稱專業(yè)名稱研究方向曹春來郭勇教授發(fā)酵工程酶工程所在學院生物科學與工程學院論文提交EL期20055華南理T大學碩士學位論文ABSTRACTHERPESSIMPLEXVIRUSTYPE2GLYCOPROTEINDISTHEPRODUCTOFTHEGENEOFUS6，INTERRELATINGTOVIRUSSORPTIONANDMEMBRANEFUSION，MEDIATINGTHEVIRUSDIFFUSIONBETWEENTHECELLSITISTHEBETTERIMMUNOGENEOFTHEGLYCOPROTEINS，SUCHASGLYCOPROTEING，GLYCOPROTEINH，GLYCOPROTEINB，DISPLAYSHIGHERHOMOLOGIZATIONBETWEENHSV1ANDHSV2，ANDDURINGTHECOUNTERACTINGVIRUS，GLYCOPROTEINDISTHEMOSTIMPORTANTPROTECTIVEANTIBODY，CANINDUCETHERESPONSEOFCELLIMMUNITYANDHUMORALIMMUNITYPROTECTTHEANIMALFROMHSVATTACKANDRESTRICTTHERECESSIVEINFECTTHEHIGHEXPRESSIONANDPURIFICATIONOFHSV2GDWILLBENEFITTOTHEBIOLOGYANDIMMUNITYRESEARCH，BASEFORTHEMANUFACTUREOFSUBUNITVACCINEANDANTIGENTHETHESISMAINLYEXPATIATEONTHEOBTAINOFHSV2GDNUCLEOTIDESEQUENCE，THECONSTRUCTIONOFTHEHSV2GDRECOMBINEVECTORSANDHSV2EXPRESSIONINPICHIAPASTORISGSLL5AFTERANALYSISTHEHSV2GDNUCLEOTIDESEQUENCE，WEDESIGNEDTWOPRIMERSANDACHIEVEDTHEPCRPRODUCTWITHOUTTHESECRETEEPITOPENUCLEOTIDESEQUENCETHEPCRPRODUCTSWERELIGATEDWITHTHELINEARVECTORPMDL8TTACLONE，THENWEOBTAINEDTHERECOMBINEDVECTORPMD18TGD2THEVECTORSEQUENCEDETERMINED，WEANALYSISEDTHESEQUENCINGRESULTWITHTHESEQUENCENC一001798FROMTHEGENEBANK，NUCLEOTIDEHOMOLOGY994％AMINOACIDHOMOLOGY973％USINGPCR，F(xiàn)OURDIFFERENTPCRPRODUCTSCTLGD2KEX，CTLGD2，GD2一KEXANDGD2WASGAINEDWITHTEMPLATEOFTHEVECTORPMDL8TGD2ANDFIVEPRIMERSTHEPERPRODUCTSANDTHEBLANKVECTORPPICZAAWERELIGATEDAFTERDIGESTEDBYXHOIANDXBAIRESTRICTENZYMES，ANDOBTAINEDFOURDIFFERENTRECOMBINEDVECTORSTHERECOMBINEDVECTORSEQUENCEWASDETERMINEDBYSEQUENCINGANDANALYZING，THECONCLUSIONSHADBEENDREWMFAAND5’ENDJOINTEDCORRECTLY、NUCLEOTIDEHOMOLOGYWAS993％，AMINOACIDHOMOLOGYWAS973％，THECHANGESOFNUCLEOTIDEANDAMINOACIDWOULDNOTIMPACTONTHEFUNCTIONSTHELINEARVECTORSWERETRANSFORMEDINTOTHEPICHIAPASTORISGS115BYELECTROPORARTIONRESPECTIVELYCORRESPONDINGFOURTRANSFORMANTSWEREOBTAINEDSUCCESSFULLYTHENWETESTIFIEDTHEINTERESTEDGENEHADINTEGRATEDINTOTHEGS115GENOMEBYTHEMETHODOFPCR，ANDWEACQUIREDTHEPHENOTYPEOFTHETRANSFORMANTSMUTTHECONSTRUCTEDSTRAINSWEREINDUCEDBYMETHANOLTOEXPRESSRECOMBINEDHSV2II

簡介：人巨細胞病毒HCMV是人類重要的病原體之一孕婦初次感染HCMV可導致胎兒畸形或流產HCMV的活動性感染可以危及免疫抑制患者的生命鑒于感染患者常常無癥狀或缺乏特異性癥狀實驗室檢測技術具有極其重要的意義HCMV感染的檢測方法包括病毒分離培養(yǎng)、抗原檢測、核酸測定和血清學試驗上述方法各有優(yōu)缺點HCMV原發(fā)感染的診斷主要采用血清學方法HCMVIGM型抗體是病毒抗原刺激機體最早出現(xiàn)的抗體可作為活動性HCMV感染的一個重要指標用于診斷HCMVIGM的酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA最為常用具有操作簡便、快速和設備要求低的特點但來源于病毒的抗原存在著敏感性、特異性和標準化問題基因重組獲得表達產物的技術正引起各國學者重視國內這方面的研究報道不多目前已知為數(shù)不多的幾種HCMV蛋白具有免疫活性其中GP52和PP150是抗原性較強的兩種能特異性識別IGM抗體故而該研究選擇HCMVGP52和PP150的抗原性、特異性好的C端部分氨基酸的基因片段做目的基因應用基因工程技術得到了高效表達兩者融合基因的工程菌并對表達產物的抗原性進行了研究研究包括兩個部分1GP52基因在大腸桿菌中的誘導表達及重組蛋白的抗原性鑒定2PP150和GP52融合基因構建及其在原核細胞中的高效表達、表達產物的純化與抗原性檢測

簡介：目的本課題擬通過體外觀察健脾清化方對丙型肝炎病毒（HCV）人肝癌細胞株HEPG2細胞上清中載脂蛋白BAPOB、極低密度脂蛋白（VLDL）、甘油三酯（TG）的影響，科學客觀的分析健脾清化方干預干擾素抗丙肝病毒的作用機制。為中醫(yī)藥治療慢性丙型肝炎提供新的思路和視角。方法1購買HEPG2細胞株及SPF級SD雄性大鼠40只，采用隨機分組的方法將SD大鼠分為四組即中藥組、西藥組、聯(lián)合組及空白組，每組10只，前三組分別給予健脾清化方灌胃、干擾素皮下注射加利巴韋林灌胃、健脾清化方灌胃加干擾素皮下注射加利巴韋林灌胃，對照組給予同等體積的生理鹽水灌胃，10天后取大鼠血清，制作出四組大鼠含藥血清。2選取慢性丙型肝炎患者的血清，培養(yǎng)出丙肝病毒HCV感染的HEPG2細胞。3四組大鼠含藥血清分別干預丙肝病毒HCV感染的HEPG2細胞。4于丙肝病毒（HCV）感染后和藥物血清干預后48H、96H、144H、192H后分別收集細胞及上清，采用逆轉錄一聚合酶鏈反應法（RTPCR法）檢測HEPG2細胞中的丙肝病毒載量，用ELISA法檢測HEPG2細胞上清中APOB、VLDL、TG含量的變化。通過各組檢測的結果分析健脾清化方干預干擾素抗丙肝病毒的作用機制。結果RTPCR法檢測細胞及上清中HCVRNA正負鏈陽性，提示造模成功。結果顯示1對HEPG2細胞上清中脂質的影響造模前即空白組與造模后即對照組APOB、VLDL、TG含量比較，三種脂質在兩個不同組別間均有顯著差異，且線圖顯示三種脂質與空白組相比均呈不同程度的下降趨勢，提示對照組即丙肝病毒感染后HEPG2細胞上清中APOB、VLDL、TG含量較空白組減少。含藥血清干預后測得APOB、VLDL、TG含量在48H、96H、144H中的不同組別間無顯著差異，P大于005；在192H中P小于005，四組間存在顯著差異，且中藥組、聯(lián)合組與對照組相比P值均小于005，具有統(tǒng)計學意義，而西藥組與對照組相比P大于005，無統(tǒng)計學意義；且線圖顯示四組隨著時間的延長均呈不同程度的下降趨勢，其中對照組下降最為明顯，依次為中藥組、西藥組。提示聯(lián)合組對APOB、VLDL、TG含量的影響最為明顯，其次是中藥組，西藥組無明顯影響。（2）對丙肝病毒感染HEPG2細胞中HCVRNA滴度即丙肝病毒載量的影響HCVRNA滴度在144H、192H中四組間比較有顯著差異，且144H中聯(lián)合組與中藥組、西藥組對照組間存在顯著差異；在192H中中藥組與西藥組、聯(lián)合組之間，聯(lián)合組與西藥組、對照組之間有顯著性差異。線圖顯示中藥組、西藥組、聯(lián)合組及對照組均呈不同程度的上升趨勢，其中對照組上升最明顯；依次為中藥組、西藥組；聯(lián)合組最低。綜合檢驗及線圖分析聯(lián)合組對HCVRNA滴度影響最大，其次為西藥組，中藥組無明顯影響。結論本實驗研究表明1對照組即丙肝病毒感染后HEPG2細胞上清中APOB、VLDL、TG含量減少，且與時間呈正相關，與丙肝病毒載量呈負相關。（2）健脾清化方對丙肝病毒感染的HEPG2細胞上清中APOB、VLDL、TG含量具有調節(jié)作用。（3）聯(lián)合組即健脾清化方加干擾素加利巴韋林組不僅對HEPG2細胞上清中APOB、VLDL、TG含量有調節(jié)作用，對丙肝病毒亦有明顯的抑制作用，且優(yōu)于西藥組。4由此推斷健脾清化方可以提高干擾素抗丙肝病毒的療效，其機制可能與改善脂質代謝有關。

簡介：目的分析行非心臟大手術的老年患者術后認知功能障礙與術中腦氧代謝之間的關系；探討可能與老年患者術后認知功能障礙的發(fā)生有關的圍術期因素。方法82名擇期行非心臟大手術的60歲以上老年患者參加了研究?；颊哂谛g前23天和術后第7天分別由心理醫(yī)師進行一次神經(jīng)心理測驗。在一項測驗中術前術后降分值大于等于1個術前標準差定義為認知功能受損，一個病人在2項或2項以上測驗中出現(xiàn)認知功能受損則認為出現(xiàn)了術后認知功能障礙。麻醉前行經(jīng)右頸內靜脈逆行穿刺置管至頸靜脈球部以備采血并行橈動脈穿刺置管供血壓監(jiān)測和采血。以芬太尼4UGKG、異丙酚12MGKG、司可林2MGKG誘導，術中吸入異氟醚維持，間斷追加芬太尼和萬可松。于誘導后T1、誘導后23小時T2、出PACU時T3三個時間點分別同步采集橈動脈和頸靜脈球部血樣進行血氣分析和血糖測定，計算腦血流量腦氧耗比值CBFCMRO2和腦氧耗腦糖耗比值CMRO2CMRGLU。記錄圍術期用藥及相關情況。結果79例病人完成術后神經(jīng)心理測驗，共有12人152％發(fā)生術后認知功能障礙。在四項神經(jīng)心理測驗中，簡易智力狀態(tài)檢查MMSE術前與術后評分無統(tǒng)計學差異，其余三項測驗術后評分均顯著低于術前評分P＜001。在T1、T2兩個時間點，有POCD者的CBFCMRO2均高于無POCD者P值分別為0035和0054。LOGISTIC回歸分析顯示術前合并冠心病、術中阿托品用量和麻黃堿用量以及術中CBFCMRO2增高與老年病人POCD的發(fā)生有關。結論老年患者經(jīng)過麻醉和手術過程后，在認知功能的某些方面確實顯示了下降的趨勢。非心臟手術后POCD的發(fā)生可能與腦氧利用率降低有關。術前合并冠心病、術中阿托品用量、術中低血壓程度和術中腦氧利用率降低是老年患者發(fā)生POCD的危險因素。

簡介：上海第二醫(yī)科大學博士學位論文腺病毒介導的VASOSTATIN基因治療胰腺癌的基礎研究姓名李雷申請學位級別博士專業(yè)內科學（消化系病）指導教師袁耀宗20050401學位論文獨創(chuàng)性聲明V75990；本人所呈交的學位論文是我在導師的指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內容外，本論文不包含其他個人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均己在文中作了明確說明并表示謝意。作者簽名日期∞C一爭學位論文使用授權聲明本人完全了解上海第N科大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，學校有權保留學位論文并向國家主管部門或其指定機構送交論文的電子版和紙質版。有權將學位論文用于非贏利目的的少量復制并允許論文進入學校圖書館被查閱。有權將學位論文的內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索。有權將學位論文的標題和摘要匯編出版。保密的學位論文在解密后適用本規(guī)定。一繇巷雷日期勤蚪習名烈日導師簽名弘藝∽‘日期_夔生Z

簡介：【背景和目的】CASTLEMAN病是一種罕見的慢性淋巴組織增生性疾病。CASTLEMAN病病因不明，臨床表現(xiàn)復雜多樣，病理學改變也易與多種疾病相混淆，早期常不易診斷。隨著近年來報道病例的增加，CASTLEMAN病引起了越來越多研究者的關注?，F(xiàn)國內關于CASTLEMAN病的報道多為個案報道與臨床分析，少見較大樣本的臨床病理研究及病因學探討。本研究的目的在于全面分析52例CD的臨床病理、免疫組化特點，并對人皰疹病毒8型在其發(fā)病學上的相關性進行探討。【材料和方法】收集四川大學華西醫(yī)院病理科自1975年到2005年3月經(jīng)組織病理學證實的所有CASTLEMAN病病例共計52例，觀察其病理形態(tài)，并對1990年后石蠟包埋組織保存完好者共37例行CD3、CD79A、CD21、HHV8單抗以及Κ、Λ輕鏈LSAB三步法免疫組織化學染色，結合臨床表現(xiàn)、治療和隨訪資料進行分析?！窘Y論】本研究表明，CD具有特征性淋巴結增生樣改變，借助免疫組化技術有助于該病的診斷及進一步區(qū)分透明血管型和漿細胞型兩種病理亞型。CD的臨床表現(xiàn)多樣，需經(jīng)病理學診斷確診。臨床分型中，局灶型和多中心型具有顯著不同的臨床表現(xiàn)、治療和預后，局灶型多為良性病程，多中心型具有侵襲性，區(qū)分兩者對于指導臨床實踐很有意義。HHV8與中國內陸人群的CD發(fā)病無相關性。